ВектоРубелла-IgМ-стрип (Диагностикум краснухи)

Торговое название: ВектоРубелла-IgМ-стрип (VectoHBsAg-strip)

Международное название: Диагностикум краснухи&

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Описание:

Тест-система УВектоРубелла-IgМ-стрипФ представляет собой набор реагентов для выявления иммуноглобулинов класса М (IgМ) к вирусу краснухи в сыворотках крови методом иммуноферментного анализа. Основным реагентом набора является очищенный антиген вируса краснухи, сорбированный на поверхности лунок полистиролового разборного планшета. На первой стадии анализа исследуемые и контрольные образцы инкубируют в лунках с иммобилизованным антигеном. Имеющиеся в сыворотке специфические антитела к вирусу связываются с иммобилизованным антигеном. Несвязавшийся материал удаляют отмывкой. Связавшиеся антитела выявляют при инкубации с конъюгатом антител к IgМ человека с пероксидазой хрена. После второй отмывки количество связавшегося конъюгата определяют цветной реакцией с использованием субстрата пероксидазы - перекиси водорода и хромогена - тетраметилбензидина. Реакцию останавливают добавлением раствора серной кислоты и измеряют оптическую плотность растворов в лунках при длине волны 450 нм. Интенсивность жёлтого окрашивания пропорциональна количеству содержащихся в исследуемом образце IgМ к вирусу краснухи. Набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные образцы. Для исследования небольших партий проб возможны 12 независимых постановок по 8 анализов каждая, включая контрольные образцы. Набор комплектуется всеми необходимыми для ИФА реагентами.

Показания к применению:

Тест-система предназначена для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу краснухи в сыворотке (плазме) крови человека, и может быть использована в клинике для диагностики первичного инфицирования вирусом краснухи.

Методы применения и принцип действия:

СБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ. Забор крови должен производится согласно стандартной процедуре забора крови из вены с соответствующими предосторожностями.

Свежие образцы сыворотки (плазмы) могут храниться при 2-8‡С в течение одной недели при условии отсутствия микробной контаминации. Образцы могут подвергаться замораживанию/оттаиванию только однократно, т.к. повторное замораживание/оттаивание приводит к неправильным результатам. После размораживания образец следует тщательно перемешать. Длительное хранение образцов проводят при -20‡С или ниже.

Образцы, содержащие осадок, перед анализом должны быть очищены центрифугированием в течение 5 мин при 5-10 тыс. об./мин.

Не использовать образцы с выраженной гиперлипидемией.

Для отбора исследуемых образцов и компонентов тест-системы использовать автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5%.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ. Достоверность результатов зависит от правильного выполнения следующих правил:

Не используйте реагенты с истекшим сроком годности.

Не заменяйте реагенты данной серии реагентами другой серии. Все компоненты подобраны для оптимального проведения теста.

Не проводите ИФА в присутствии паров кислот, щелочей, альдегидов или пыли, которые могут менять ферментативную активность конъюгатов.

Используйте стеклянную посуду, тщательно вымытую и ополоснутую дистиллированной водой, или (предпочтительно) одноразовую посуду.

Перед использованием необходимо выдержать реагенты 30 мин при температуре 18-25 ‡С.

Аккуратно разводите реагенты, избегая любого загрязнения.

Не допускайте высыхания стрипов в перерыве между завершением промывки и внесением реагентов.

Ферментативная реакция очень чувствительна к присутствию ионов металла. Поэтому не допускайте контактов каких-либо металлических предметов с конъюгатом и растворами субстратов.

Используйте для внесения каждой пробы чистый наконечник

Никогда не используйте одну и ту же ёмкость, для приготовления конъюгата и раствора ТМБ. Обращаем ^p Ваше особое внимание на то, что малейшее, даже не видимое глазом загрязнение пипеток раствором конъюгата может привести к контаминации всего содержимого флаконов с ЦФР и ТМБ. Поэтому необходимо протирать рабочую поверхность стола и конус пипетки (внутреннюю и внешнюю поверхности) 70% этиловым спиртом перед внесением ТМБ в ЦФР.

Проверяйте пипетки и другое оборудование на точность и правильность работы.

Не изменяйте протокол исследования.

Если допущена ошибка при внесении анализируемого образца, нельзя, опорожнив эту лунку, вносить в неё новый образец. Такая лунка бракуется.

Ложноположительные результаты могут быть обусловлены: 1. Получением неправильного рабочего разведения исследуемых сывороток (например, 1:70; 1:50). Для получения правильного рабочего разведения исследуемых сывороток необходимо: а) при отборе 10 мкл сыворотки для предварительного разведения не погружать наконечник глубоко в сыворотку, чтобы исключить налипание сыворотки на внешнюю поверхность наконечника. б) тщательно перемешивать сыворотку при предварительном разведении 1:10. 2. Контаминацией отрицательных сывороток в рабочем и вспомогательных планшетах положительными сыворотками из соседних лунок; вероятность такой контаминации особенно высока при первичном скрининге исследуемых сывороток, так как на весь планшет обычно выявляется всего несколько отрицательных сывороток.

Для исключения взаимной контаминации сывороток во вспомогательном планшете для предварительного разведения сывороток и в рабочем планшете необходима тщательная и аккуратная работа, без разбрызгивания растворов.

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ. 1. Подготовка стрипов. Цефленовый пакет вскрыть выше замка на 1 см. Планшет в упаковке должен быть выдержан 30 мин при комнатной температуре (18-25)‡С перед его вскрытием для предотвращения конденсации влаги на стрипах. Для проведения ИФА рассчитать необходимое количество стрипов, оставшиеся стрипы снять с рамки и сразу плотно упаковать в цефленовый пакет с осушителем, удалить из него воздух и плотно закрыть замок. Стрипы стабильны после первого вскрытия цефленового пакета в течение 4 недель при 2-10‡С. 2. Подготовка контрольных образцов. Контрольные образцы готовы к использованию и не требуют дополнительного разведения. 3. Подготовка исследуемых сывороток. Исследуемые сыворотки развести в 10 раз раствором для предварительного разведения сывороток. Для этого внести во вспомогательный ряд пробирок или в лунки вспомогательного планшета по 90 мкл раствора и добавить по 10 мкл цельной сыворотки, тщательно перемешать. При этом малиновый цвет должен измениться на жёлтый. Если изменения цвета не произошло, данная сыворотка может дать неправильный результат. Разведённые сыворотки не хранить! 4. Приготовление раствора для отмывки планшета. Количество используемого раствора для отмывки планшета, в зависимости от числа стрипов, приведено в таблице 1. При выпадении осадка солей в концентрате ФСБ-Т необходимо прогреть его при 30-40‡С до полного растворения осадка. Хранение: до 1 недели при 2-8 ‡С. 5. Приготовление раствора конъюгата. Готовить непосредственно перед использованием! Количество используемого конъюгата и раствора для разведения конъюгата (РРК), в зависимости от числа стрипов, взятых для анализа, приведено в таблице 1. В отдельный чистый флакон внести необходимое количество РРК, добавить необходимое количество конъюгата и тщательно перемешать. Хранение: до 30 мин при 18-25‡С. 6. Приготовление раствора ТМБ. Готовить непосредственно перед использованием! Для проведения анализа на одном стрипе 70 мкл концентрата ТМБ растворить в 1 мл ЦФР в отдельном чистом флаконе (см. таблицу). Следует исключить воздействие света на раствор ТМБ, например, обернуть флакон фольгой. Внимание! Раствор ТМБ должен быть бесцветным. Появление цвета в течение нескольких минут после приготовления раствора указывает на то, что реагент не может использоваться и должен быть заменён. Рекомендуем выделить отдельную посуду и наконечники для пипетки, которые использовать только для работы с раствором ТМБ. После работы посуду и наконечники ополоснуть водой, промыть 70% спиртом и тщательно отмыть дистиллированной водой. Посуду и наконечники пипеток, контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому разложению ТМБ в ходе реакции. Хранение: до 20 мин при 18-25 ‡С в тёмном месте.

ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА.

1. В лунку А-1 внести 100 мкл раствора для разведения сывороток (в растворе РРС возможно выпадение осадка, перед использованием взбалтать). Лунка А-1 будет являться контролем поглощения раствора ТМБ. Для нанесения контрольных образцов рекомендуется следующая схема:

при использовании 1 стрипа - 1 лунка К+ и 2 лунки К-

2 стрипов - 2 лунки К+ и 2 лунки К-

3 и более - 2 лунки К+ и 3 лунки К-

Согласно схеме в лунки стрипа, например, В-1 и С-1 внести по 100 мкл К-, в другие лунки, например, D-1 и Е-1 внести по 100 мкл К+. В остальные лунки внести по 90 мкл РРС и по 10 мкл предварительно разведённых исследуемых сывороток. Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется в 100 раз. Отрезать липкую плёнку требуемого размера. Стрип закрыть, плотно прижав плёнку, поместить во влажную камеру. Инкубировать 30І3 мин при температуре 37,5І0,5 ‡С.

2. После окончания инкубации осторожно снять плёнку, замочить её в дезинфицирующем растворе. Стрип промыть (см. ниже).

Требования к отмывке: Полностью удалите жидкость из всех ячеек в ёмкость с дезинфицирующим раствором, используя для этого вошер или многоканальную пипетку. После этого заполните все лунки стрипов раствором для отмывки планшета, внося не менее 300 мкл в каждую лунку. Удаление жидкости производится не ранее, чем через 30-60 секунд после её внесения. Повторите данную процедуру еще 4 раза. Общее количество отмывок равно 5. Остатки жидкости на дне лунок и сверху на рамке и стрипах удалите, постукивая планшетом по фильтровальной бумаге; фильтровальную бумагу необходимо менять после каждой операции.

3. В каждую лунку стрипа, кроме А-1, внести по 100 мкл раствора конъюгата (выше п. 5). В лунку А-1 внести 100 мкл РРК. Отрезать липкую плёнку требуемого размера. Закрыть стрип плёнкой и поместить во влажную камеру. Инкубировать 30І3 мин при 37,5І0,5 ‡С. За 5-10 мин до окончания инкубации приготовить раствор ТМБ (выше п. 6).

4. По окончании инкубации стрипы промыть как описано в п. 2.

5. Внести в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ и инкубировать в темноте в течение 25 мин при 18-25 ‡С.

6. Остановить реакцию добавлением в лунки по 100 мкл стоп-реагента, используя ту же самую последовательность и скорость раскапывания, что и для раствора ТМБ. Убедитесь в чистоте основания стрипов. В случае загрязнения - тщательно протрите основание стрипов. Стоп-реагент представляет собой раствор серной кислоты с концентрацией 1 моль/л. В случае попадания на кожу стоп-реагента необходимо немедленно смыть его водой с мылом.

7. Результаты ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм. Измерения проводят не позднее 10-15 мин после остановки реакции. Проверьте соответствие между спектрофотометрическими и визуальными данными, а также между распределением проб в планшете и идентификационным протоколом.

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Качество тест-системы считают удовлетворительным, если ОП контроля раствора ТМБ не превышает 0,10 о.е., среднее значение ОП отрицательного контрольного образца (ОПср К-) не превышает 0,250 о.е., а среднее значение ОП положительного контрольного образца не менее 0,7 о.е.

2. Рассчитывают критическое значение оптической плотности (ОПкрит) по формуле:

ОПкрит = ОПср К- + 0,2.

3. Если значение оптической плотности исследуемой сыворотки ОПсыв г 0,9xОПкрит, то результат анализа считают отрицательным, IgМ к вирусу краснухи не определены. Но это не означает, что пациент не инфицирован вирусом краснухи. Если кровь взята у больного в начале острой фазы заболевания, IgМ в сыворотке крови могут отсутствовать, поэтому при подозрении на наличие инфекции (контакт, клинические проявления) рекомендуется исследовать сыворотку, взятую у пациента через 10-15 дней, на наличие IgM повторно. Если ОПсыв попадает в интервал от 0,9xОПкрит до 1,1xОПкрит, рекомендуется повторить анализ таких сывороток. Если вновь результат анализа попадает в Усерую зонуФ, рекомендуется у этих пациентов исследовать сыворотку, взятую через 10-15 дней после первого забора, на наличие IgM и IgG для выявления сероконверсии и подтверждения факта первичного инфицирования вирусом краснухи. Следует отметить, что при реактивации и реинфекции вирусом краснухи IgM не продуцируется, и факт реактивации или реинфекции можно подтвердить только по увеличению концентрации специфических IgG при исследовании парных образцов сыворотки. Положительными считают сыворотки с ОПсыв. > 1,1 x ОПкрит и не содержащие ревматоидный фактор класса М (РФ-М), причём необходимо проведение повторного анализа таких сывороток для исключения ложноположительных результатов, обусловленных случайными, несистемными ошибками при постановке анализа. Для выявления РФ-М рекомендуется тест-системы УВектоРевматоидный фактор класса МФ производства ЗАО УВектор-БестФ. При наличии РФ-М в исследуемой сыворотке его можно удалить с использованием иммуносорбента УВектоРФ - иммуносорбентФ и повторить анализ на наличие специфических IgM к краснухе.

Срок годности:

Тест-системы - 6 месяцев со дня выпуска.

Условия хранения:

Тест-систему хранят при температуре 2-8 ‡С. Транспортирование осуществляют всеми видами крытого транспорта при температуре от 2 до 8‡С; допускается транспортирование при температуре до 25‡С не более 3 суток. Замораживание не допускается.

Дата актуализации инструкции 01.01.2005

Производитель: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Формы выпуска: набор диагностический многокомпонентный, упаковки комбинированные

Данные гос. регистрации: Р N003275/01 от 05.03.2004

Состояние регистрационного удостоверения: дата аннулирования 28.08.2009

Номер фармстатьи: ФСП 42-0117-4694-03