ВектоВКЭ-IgM-стрип (Диагностикум клещевого энцефалита)

Торговое название: ВектоВКЭ-IgM-стрип (VectorVKE-IgM-strip)

Международное название: Диагностикум клещевого энцефалита& (Tick-born encephalitis diagnosticum)

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Описание:

Диагностическая иммуноферментная тест-система УВектоВКЭ-IgM - стрипФ представляет собой набор реагентов для выявления иммуноглобулинов класса М (IgM) к вирусу клещевого энцефалита (ВКЭ) методом иммуноферментного анализа (ИФА). Один набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контроли. Для исследования небольшой партии проб возможны 12 независимых постановок ИФА по 8 анализов каждая, включая контроли. Комплектуется всеми необходимыми для ИФА реагентами.

Методы применения и принцип действия:

1. НАЗНАЧЕНИЕ Тест-система предназначена для выявления иммуноглобулинов класса М к вирусу клещевого энцефалита в сыворотке (плазме) крови человека, и может быть использована в клинических и эпидемиологических исследованиях для диагностики клещевого энцефалита.

2. СОСТАВ НАБОРА планшет разборный с иммобилизованными антителами к IgM человека - 1 шт.; положительный контрольный образец, инактивированный (К+; прозрачная жидкость красного цвета) - 1 фл., 1,3 мл; отрицательный контрольный образец, инактивированный (К-) - 1 фл., 2,5 мл; раствор для предварительного разведения сывороток (жидкость малинового цвета) - 1 фл., 10 мл; раствор для разведения сывороток (РРС) - 1 фл., 12 мл; антиген ВКЭ (сухой) - 1 ампула; стабилизирующий раствор для разведения антигена ВКЭ - 1 фл., 1,5 мл; конъюгат (моноклональные антитела к ВКЭ, меченные пероксидазой хрена; жидкость синего цвета) - 1 фл., 1,3 мл; раствор для разведения конъюгата (РРК) - 1 фл., 12 мл; концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином (ФСБ-Т, 25|) - 1 фл., 28 мл; цитратно-фосфатный буферный раствор с перекисью водорода (ЦФР) - 1 фл., 12 мл; тетраметилбензидин (ТМБ), концентрат - 1 фл., 1 мл; стоп-реагент - 1 фл., 12 мл; плёнка липкая - 2 шт.

3. ПОДГОТОВКА АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ Для проведения ИФА не рекомендуется использовать гемолизированные, гиперлипидные или повторно замороженные сыворотки. Допускается хранение образцов сывороток при 2-8‡С в течение 48 часов, либо при -20‡С в течение 3 месяцев. После размораживания образцы тщательно перемешать. При необходимости образцы очистить центрифугированием при 5-10 тыс. об./мин.

4. ОБЩИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ - При работе с исследуемыми сыворотками и контрольными образцами следует соблюдать меры предосторожности, принятые при работе с потенциально инфекционным материалом: работать в резиновых перчатках; не пипетировать растворы ртом; все использованные материалы подвергать обработке 6%-ным раствором перекиси водорода (не менее 6 часов). Внимание! Несоблюдение описанных ниже требований может привести к искаженному результату ИФА. Необходимо предъявлять высокие требования к чистоте лабораторной посуды, наконечников, ванночек и т.п., поскольку даже следы применяемых дезинфицирующих и моющих средств приводят к искажению результатов ИФА. Предпочтительно использование одноразовой посуды. При многократном использовании контейнера или ванночки для компонента их следует использовать всегда для одного и того же реагента, при повторном применении следует тщательно промыть дистиллированной водой до и после каждого использования. Для работы с набором следует использовать дистиллированную воду высокого качества, так как компоненты набора очень чувствительны к микробиологическому загрязнению, хлорноватистой кислоте и ароматическим хлорсоединениям, ионам металлов, зачастую находящихся в воде. При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов. При использовании автоматического вошера или гребёнки ёмкость и шланги для промывочного раствора рекомендуется 1 раз в неделю обрабатывать 70%-ным спиртом с последующей отмывкой дистиллированной водой. Перед постановкой реакции все компоненты тест-системы необходимо выдержать в течение часа при температуре 18-25‡С. Запрещается многократное использование планшета для предварительного разведения сывороток. После постановки реакции плотно закрыть флаконы с компонентами, упакованные стрипы поместить в холодильник, использовать в течение 4 недель.

5. ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ (для проведения реакций на 1 стрипе) 5.1. Подготовка стрипов Вскрыть цефленовый пакет с планшетом со стороны замка, отступив примерно 1 см. Для проведения ИФА рассчитать необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в цефленовом пакете с замком. Стрипы стабильны после первого вскрытия пакета в течение 4 недель. 5.2. Подготовка контрольных образцов Контрольные образцы готовы к использованию и не требуют дополнительного разведения. 5.3. Подготовка исследуемых сывороток Исследуемые сыворотки развести в 10 раз раствором для предварительного разведения сывороток. Для этого, используя вспомогательный ряд пробирок или вспомогательный планшет, к 90 мкл раствора добавить 10 мкл цельной сыворотки, тщательно перемешать. При этом цвет раствора должен измениться с малинового на жёлтый. Если изменения цвета не произошло, сыворотка для анализа не годится. Внимание: разведённую сыворотку не хранить! 5.4. Приготовление раствора для отмывки планшета (ФСБ-Т однократный) Содержимое одного флакона с концентратом ФСБ-Т развести дистиллированной водой до 700 мл. При выпадении осадка солей в концентрате необходимо прогреть его при 30-40 ‡С до полного растворения осадка. Хранение: до 4 недель при 2-8 ‡С. 5.5. Приготовление раствора антигена ВКЭ Содержимое ампулы с антигеном ВКЭ растворить в 1,5 мл стабилизирующего раствора. Хранение: до 4 недель при 2-8 ‡С. 5.6. Приготовление раствора конъюгата Готовить непосредственно перед использованием! В чистый флакон внести 1 мл раствора для разведения конъюгата (РРК) и добавить по 0,1 мл конъюгата и антигена ВКЭ в стабилизирующем растворе, тщательно перемешать (см. таблицу). 5.7. Приготовление раствора ТМБ Готовить непосредственно перед использованием! В чистом флаконе растворить 70 мкл концентрата ТМБ в 1 мл ЦФР, тщательно перемешать. При приготовлении раствора ТМБ следует исключить воздействие света (например, обернуть флакон фольгой). Внимание! Рекомендуем выделить отдельную посуду и наконечники для пипетки, которые использовать только для работы с раствором ТМБ. Посуду и пипетки (наконечники), контактирующие с раствором ТМБ, нельзя отмывать с применением синтетических моющих средств, поскольку даже их следы ведут к неконтролируемому разложению ТМБ в ходе реакции.

6. ПРОВЕДЕНИЕ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА Внимание! Внесение контрольных и исследуемых образцов проводить достаточно быстро, в течение 5-10 мин, так как при более длительном внесении образцов в лунки планшета время инкубации первого и последнего образцов значительно отличаются, что может привести к неправильной оценке результатов. 6.1. Для нанесения контрольных образцов рекомендуется следующая схема: при использовании 1 стрипа - 1 лунка К+ и 2 лунки К- 2 стрипов - 2 лунки К+ и 2 лунки К- 3 и более - 2 лунки К+ и 3 лунки К- Согласно схеме в лунки стрипа, например, А-1 и В-1, внести по 100 мкл К-. В лунку С-1 внести 100 мкл К+. В остальные лунки внести по 90 мкл РРС и по 10 мкл предварительно подготовленных исследуемых сывороток (п. 5.3). Таким образом, исследуемая сыворотка в лунке разбавляется в 100 раз. Отрезать липкую плёнку требуемого размера. Стрип закрыть, плотно прижав плёнку, поместить во влажную камеру. Инкубировать при температуре 37‡С в течение 60 мин. 6.2. После окончания инкубации осторожно снять плёнку, поместить её в дезинфицирующий раствор. Лунки промыть 5 раз раствором для отмывки планшета (п. 5.4) и 2 раза дистиллированной водой. При этом в каждую лунку необходимо вносить не менее 250 мкл в процессе одного промывания. Раствор из лунок тщательно удалить, постукивая перевёрнутым стрипом по фильтровальной бумаге. 6.3. В каждую лунку стрипа внести по 100 мкл раствора конъюгата (п. 5.6). Отрезать плёнку требуемого размера. Стрип закрыть плёнкой, поместить во влажную камеру. Инкубировать 60 мин при 37‡С. 6.4. По окончании инкубации стрип промыть 6 раз раствором для отмывки планшета и 2 раза дистиллированной водой, как описано в п. 6.2. Раствор из лунок тщательно удалить постукиванием перевёрнутого стрипа по фильтровальной бумаге. За 5 мин до окончания инкубации приготовить раствор ТМБ (п. 5.7). 6.5. Внести в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ и инкубировать в течение 20-25 мин при температуре 18-25‡С в темноте. 6.6. Остановить реакцию добавлением в лунки по 100 мкл стоп-реагента. В случае попадания на кожу раствора ТМБ или стоп-реагента необходимо немедленно смыть их водой с мылом.

7. КРАТКАЯ СХЕМА ИФА: Использовать только после тщательного ознакомления с инструкцией!

Внести: 100 мкл К+, К-, 90 мкл РРС и 10 мкл предварительно разведенных образцов, 60 мин, 37‡С. Промыть: ФСБ-Т однократный - 5 раз, вода дистиллированная - 2 раза. Внести: 100 мкл разведенного конъюгата, 60 мин, 37‡С. Промыть: ФСБ-Т однократный - 6 раз, вода дистиллированная - 2 раза. Внести: 100 мкл раствора ТМБ в ЦФР, 20-25 мин, 18-25‡С. Внести: 100 мкл стоп-реагента. Измерить: ОП при 450 нм.

8. РЕГИСТРАЦИЯ И ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ Результаты ИФА регистрируют с помощью спектрофотометра, измеряя оптическую плотность (ОП) на длине волны 450 нм. Измерения проводят сразу после остановки реакции. Качество тест-системы считают удовлетворительным, если среднее значение оптической плотности (ОП) отрицательного контрольного образца (ОПср К-) не превышает 0,20 о.е., а среднее значение ОП положительного контрольного образца не менее чем в 3 раза превышает ОПср К-. Результат анализа считают положительным, если значение ОП в соответствующей лунке равно или превышает критическое значение (ОПкрит), которое вычисляют по формуле: ОПкрит = ОПср К- + 0,2 Для интерпретации результатов исследования мы рекомендуем использовать коэффициент позитивности (КП): КП= ОПиссл. сыв. ОПкрит.

Если КП < 1, результат оценивается как отрицательный. Если КП ? 1, исследуемая сыворотка расценивается как положительно реагирующая.

Коэффициент позитивности - удобная и простая величина для наблюдения заболевания в динамике.

Срок годности:

6 месяцев со дня выпуска.

Условия хранения:

Наборы хранят и транспортируют при 2-8‡С.

Дата актуализации инструкции 11.10.2005

Производитель: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Вектор-Бест ЗАО, Россия

Формы выпуска: набор диагностический многокомпонентный, упаковки комбинированные

Данные гос. регистрации: Р N002562/01 от 12.04.2004

Состояние регистрационного удостоверения: дата аннулирования 28.08.2009

Номер фармстатьи: ФСП 42-0117-4698-03