Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные типов А и В сухие (Иммуноглобулин диагностический гриппозный)

Торговое название: Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие гриппозные типов А и В сухие

Международное название: Иммуноглобулин диагностический гриппозный& (Immunoglobulin influenza diagnostic)

Фармакологическая группа: МИБП-диагностикум

Фармакологическая группа по АТХ: V04CX. Другие диагностические средства

Состав:

Очищенная фракция иммуноглобулинов, выделенных из сыворотки крови животных или кур, иммунизированных очищенными антигенами вирусов гриппа соответствующего типа (субтипа), коньюгированных с флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ).

Препарат имеет красящий титр не ниже 1:16, содержит консервант - мертиолат 1:10000.

Описание:

Препарат имеет вид аморфной массы от желто-оранжевого до оранжевого цвета.

Показания к применению:

Ранняя диагностика гриппозной инфекции по выявлению антигенов вирусов гриппа А и В в клетках цилиндрического эпителия носа от больных с симптомами острого респираторного заболевания (ОРЗ), в секционном материале, а также обнаружение гриппозных антигенов в препаратах клеточных культур.

Методы применения и принцип действия:

1. Подготовка клинических материалов.

а) В качестве материала для исследования служат препараты, содержащие клетки цилиндрического эпителия слизистой оболочки глубоких отделов носовой полости от больных ОРЗ*.

Для этой цели сухим стерильным ватным тампоном, введенным через носовое отверстие в нижний носовой ход, собирают ротационными движениями как можно больше эпителиальных клеток. Затем тампоны помещают в пробирку с 2-3 мл 0,01 моль/л фосфатно-солевого буферного раствора (ФСБ)** рН 7,2-7,5. Для получения суспензии клеток тампоны в пробирке встряхивают, отжимают, клетки осаждают центрифугированием 5-6 мин при 3000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, а клеточный осадок ресуспендируют в нескольких каплях оставшегося раствора и наносят на предметные стекла раздельными каплями. Полученные мазки (диаметром 5-6 мм) высушивают под вентилятором и фиксируют 10 мин в охлажденном до температуры от 2 до 8 град. С ацетоне (х.ч.).

б) При исследовании секционного материала готовят препараты-отпечатки или криостатные срезы тканей респираторного тракта. Полученные препараты (отпечатки и срезы) высушивают под вентилятором и фиксируют 10 мин в охлажденном до температуры от 2 до 8 град. С ацетоне.

Мазки можно хранить до окрашивания при температуре от 2 до 8 град. С в течение 6-7 дней и до 6 месяцев при температуре не выше минус 20 град. С.

2. Приготовление рабочих растворов флуоресцирующего иммуноглобулина.

Сухой флуоресцирующий иммуноглобулин растворяют в 1 мл дистиллированной воды, разливают по 60 мкл в пробирки для микропроб и хранят при температуре не выше минус 20 град. С не более 6 месяцев.

Для проведения 100 анализов требуется 60 мкл препарата. Непосредственно перед употреблением препарат разводят ФСБ для получения указанного на этикетке рабочего разведения. Препарат в рабочем разведении хранят не более 14 дней при температуре от 2 до 8 град. С.

3. Окраска препаратов.

Предметные стекла с фиксированными мазками помещают во влажную камеру (специальную или чашку Петри с влажной фильтровальной бумагой на дне), на каждый мазок пипеткой наносят по 50 мкл рабочего разведения флуоресцирующего иммуноглобулина. Окраску проводят в течение 30 мин при температуре 16-20 град. С. Затем препараты ополаскивают дистиллированной водой и промывают ФСБ рН 7,2-7,5 двукратно по 10 мин, после чего вновь ополаскивают дистиллированной водой и высушивают с помощью вентилятора. Окрашенные мазки можно хранить при температуре от 2 до 8 град. С в течение 7-10 дней.

УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Анализ препаратов проводят под люминесцентным микроскопом МЛ-2(или иного типа) с использованием иммерсионного объектива 90x1,25Л, окуляра К5х, сине-фиолетовых светофильтров возбуждения СФ 1-2 или СФ 1-4, и теплозащитных светофильтров, корректирующих свечение фона, СЗС 7-2 и СЗС 14-4. При этом следует пользоваться только нефлуоресцирующимим мерсионным маслом или его заменителями (диметилфталат).

При люминесцентной микроскопии препаратов из материалов от больных выявляются различные эпителиальные клетки, лейкоциты, клеточный детрит. Плоские эпителиальные клетки, характеризуются крупными размерами, неправильной или полигональной формой с относительно малыми ядрами. Клетки цилиндрического эпителия - удлиненные или округлые, с относительно крупными, базально расположенными ядрами. Лейкоциты имеют сравнительно небольшие размеры, характерную форму ядер, обычно в них наблюдается неспецифическое свечение.

При люминесцентной микроскопии секционного материала выявляется как цилиндрический, так и кубический эпителий респираторного тракта, а также лейкоциты.

Диагностика гриппа осуществляется на основании выявления специфической диффузной или гранулярной флуоресценции в цитоплазме или ядрах клеток цилиндрического или кубического эпителия, четко отличающейся по интенсивности свечения от фоновой окраски окружающих интактных клеток. При оценке результатов не следует учитывать свечение клеточного детрита, плоских эпителиальных клеток, слизи и лейкоцитов.

При люминесцентной микроскопии препаратов зараженных вирусом гриппа клеточных культур наблюдаемая картина может сильно варьировать в зависимости от дозы вируса и сроков его репродукции. Обычно выявляется зеленое свечение цитоплазмы или ядер, можно встретить также и тотальную люминесценцию клеток. В препаратах незараженных клеточных культур наблюдают либо только контуры клеток, либо клетки с общей беловато-желтой аутофлуоресценцией.

Оценку интенсивности иммунофлуоресцентной окраски проводят по общепринятой условной четырех крестовой шкале яркостей:

++++ - исключительно яркая, интенсивная флуоресценция;

+++ - выраженная флуоресценция меньшей интенсивности;

++ - отчетливая флуоресценция, умеренной интенсивности;

+ - слабая, неотчетливая флуоресценция;

+/- - соответствует наиболее низкому уровню фонового свечения клеток.

Результат лабораторного анализа считают положительным при обнаружении в исследуемых объектах (или препаратах) 3-х и более клеток цилиндрического или кубического эпителия с интенсивностью люминесценции на 2 креста (++) и более.

Срок годности:

Срок годности - 2 года. Препарат с истекшим сроком годности применяться не должен.

Условия хранения:

Препарат хранят в соответствии с СП 3.3.2.028-95 при температуре от 2 до 8 град. С.

Транспортирование осуществляется в соответствии с СП 3.3.2.028-95 при температуре не выше 8 град. С. Допускается транспортирование при температуре от 9до 25 град. С продолжительностью не более 14 суток.

Дата актуализации инструкции 13.11.2013

Производитель: Предприятие по производству диагностических препаратов ООО, Россия

Владелец регистрационного удостоверения: Предприятие по производству диагностических препаратов ООО, Россия

Формы выпуска: лиофилизат [для диагностических целей], ампулы

Данные гос. регистрации: Р N003341/01 от 16.04.2004

Состояние регистрационного удостоверения: дата аннулирования 28.08.2009

Номер фармстатьи: ФСП 42-0321-4044-03