Доработанный текст проекта Приказа Министерства сельского хозяйства РФ "Об утверждении Методики производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов для производства кормов и кормовых добавок" (подготовлен Минсельхозом России 12.12.2018)

Доработанный текст проекта Приказа Министерства сельского хозяйства РФ "Об утверждении Методики производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов для производства кормов и кормовых добавок"
(подготовлен Минсельхозом России от 12.12.2018)

Досье на проект

В соответствии с пунктом 13 Правил государственной регистрации генно-инженерно-модифицированных организмов, предназначенных для выпуска в окружающую среду, а также продукции, полученной с применением таких организмов или содержащей такие организмы, утвержденных постановлением Правительства Российской Федерации от 23.09.2013 N 839 (Собрание законодательства Российской Федерации, 2013, N 39, ст. 4991; 2014, N 25, ст. 3317; 2017, N 28, ст. 4145; 2018, N 6, ст. 896), приказываю:

Утвердить прилагаемую Методику производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов для производства кормов и кормовых добавок.

Министр

Д.Н. Патрушев

Приложение
Утверждена
приказом Минсельхоза России
от N

Методика
производства экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок

I. Общие положения

1.1. Настоящая методика устанавливает порядок проведения экспертиз (исследований) биологической безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов, используемых для производства кормов и кормовых добавок (далее - ГМО, экспертиза).

1.2. Исследование проводится организацией (испытательной лабораторией), аккредитованной в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации соответствующей исследованиям, указанным в настоящей методике.

1.3. При проведении экспертизы должны учитываться результаты молекулярно-генетического исследования ГМО.

Заявитель предоставляет копию заключения о проведенных молекулярно-генетических исследованиях.

1.4. Заключение о результатах экспертизы должно быть составлено на основании протоколов исследований ГМО и содержать:

наименование заключения;

наименование ГМО с указанием его таксономического статуса;

полное наименование, место нахождения, индивидуальный номер налогоплательщика (ИНН) юридического лица, осуществляющего на территории Российской Федерации генно-инженерную деятельность в целях создания ГМО (далее - заявитель);

полное наименование и место нахождения юридического лица либо фамилия, имя, отчество (при наличии), место жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя ГМО, представленного на экспертизу;

полное наименование и место нахождения организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;

фамилии, имена, отчества (при наличии) лиц, проводивших экспертизу, ученая степень (звание) (при наличии), места их работы и должности;

сведения о трансформационном событии (характеристики генетической модификации) в виде кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;

вид предполагаемого целевого использования ГМО;

регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО);

регистрационный номер свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии);

сведения о регистрации ГМО за рубежом (при наличии);

оценку полноты представленных заявителем документов и данных;

краткое содержание документов и данных, представленных заявителем для проведения экспертизы;

перечень исследований ГМО с указанием их результатов;

описание представленных заявителем на экспертизу образцов ГМО и исходного организма-реципиента (традиционного аналога ГМО) с указанием их количества, а также оценку их пригодности для проведения исследований;

место депонирования и коллекционный номер (указывается для депонированных штаммов ГМО);

выводы экспертизы о наличии или отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду;

рекомендуемый срок действия свидетельства о государственной регистрации ГМО (в случае отсутствия сведений о негативном воздействии ГМО на окружающую среду);

дату и номер заключения экспертизы;

подпись руководителя организации (испытательной лаборатории), осуществившей проведение экспертизы;

специальные условия использования ГМО (при наличии).

1.5. К заключению о результатах экспертизы должны прилагаться протоколы исследований ГМО, на основании которых оно составлено, подписанные руководителями организаций (испытательных лабораторий), осуществивших проведение исследований.

II. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов.

2.1. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, включает анализ представленных заявителем документов и данных:

а) наименования ГМО с указанием его таксономического статуса; полного наименования, места нахождения, идентификационного номера налогоплательщика (ИНН) заявителя; полного наименование и места нахождения юридического лица либо фамилии, имени, отчества (при наличии), места жительства индивидуального предпринимателя - изготовителя образцов ГМО, представленных на экспертизу; вид предполагаемого целевого использования ГМО; регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО, предназначенного (предназначенных) для выпуска в окружающую среду, на основе которого (которых) создан ГМО, в отношении которого проведена экспертиза (в случае если ГМО создан на основе иного (иных) ГМО); регистрационного номера свидетельства о государственной регистрации ГМО для иного целевого использования (при наличии), либо информации об отсутствии такого свидетельства;

б) сведений об исходном организме-реципиенте (таксономическая характеристика с указанием метода идентификации; источник выделения штамма: субстрат, географический пункт, дата выделения; методы идентификации штамма, кем идентифицирован (фамилия, имя, отчество (при наличии)), ссылка на использованные определители);

в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации, характеристику экспрессии встроенных или измененных генов;

г) информацию о способе генетической модификации (описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки);

д) информация о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГМО, паспорт штамма ГМО (для депонированных штаммов ГМО), либо информация о культурально-морфологических, физиолого-биохимических (ферментативных), антигенных, биологических свойствах и генетических особенностях штамма ГМО; условиях культивирования: наименованиях питательных сред, рН среды, температуре и продолжительности выращивания, сроке хранения и периодичности пересева культуры штамма ГМО в нативной форме; о применяемом способе и условиях хранения штамма ГМО: в случае лиофилизации указывается продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, режим высушивания, температуры хранения, срок хранения; в случае криоконсервации указывается продолжительность выращивания на питательной среде (возраст культуры), состав защитной среды, титр клеточной суспензии, скорость замораживания (град/мин), температура хранения, срок хранения; о диссоциации культуры в зависимости от метода хранения (описание морфологических типов колоний на конкретной среде, подробное описание типа, сохраняющего полезный или диагностический признак); о среде, на которой заявителем предоставляется штамм ГМО, о количестве, дате приготовления и сроке годности образцов штамма ГМО (в случае непредставления информации о месте депонирования и коллекционном номере штамма ГМО, паспорта штамма ГМО);

е) информацию о вносимых генах (для организмов-доноров приводится таксономическая характеристика, данные о вирулентных, аллергенных и других свойствах);

ж) характеристики различий ГМО с исходным организмом, в том числе описание способа размножения и распространения, схема и условия промышленного культивирования (состав сред), новых фенотипических свойств, биологических преимуществах модифицированного организма по сравнению с исходным организмом;

з) описания методики, позволяющей идентифицировать генетическую модификацию, с указанием нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов, условий проведения полимеразной цепной реакции (далее - ПЦР);

и) результатов изучения возможности переноса генов, введенных в заявленный организм с использованием методов генной инженерии, в том числе генов устойчивости к антибиотикам, в микроорганизмы желудочно-кишечного тракта целевых животных;

к) информации о потенциальной колонизации ГМО в желудочно-кишечном тракте целевых животных и влиянии на естественную микрофлору (для ГМО, предназначенных для производства пробиотических кормовых добавок);

л) информации о способности ГМО выживать и размножаться в окружающей среде; о потенциальном антагонистическом, синергическом или другом негативном влиянии ГМО на организмы, не являющиеся генно-инженерно-модифицированными (при наличии);

м) копии отчетов исследований кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные штаммы ГМО (при наличии);

н) информацию о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, в государствах-членах Евразийского экономического союза, иных государствах, а также о наличии либо отсутствии фактов о негативных последствиях применения ГМО, кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов;

о) протоколы молекулярно-генетических исследований, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации соответствующей исследованиям, указанным в настоящей методике;

п) результаты исследований (при наличии) (оформленные соответствующими протоколами исследований), указанных в подпунктах "а" - "л" пункта 2.2. настоящей методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации с областью аккредитации соответствующей исследованиям, указанным в настоящей методике.

В случае если протоколы исследований, указанных в подпунктах "а" - "л" пункта 2.2 настоящей методики, не представлены заявителем, данные исследования проводятся организацией, осуществляющей экспертизу.

Заявитель вправе представить любую иную информацию по своему усмотрению.

2.2. Проведение испытаний ГМО, предназначенного для производства кормов и кормовых добавок, содержащих жизнеспособные ГМО, осуществляется путем следующих исследований предоставленных заявителем образцов штаммов ГМО и штамма-реципиента:

а) токсикологических исследований ГМО: токсикокинетика, генотоксичность, результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах);

б) аллергологических исследований, в том числе о потенциальной аллергенности ГМО; о потенциальной аллергенности рекомбинантных белков или небелковых веществ, полученных с использованием ГМО - продуцентов, в иммунохимических исследованиях in vitro;

в) биоинформатического анализа: результаты оценки безопасности одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белка); наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической, или иной биологической активностью (при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank);

г) исследование патогенных свойств и вирулентности ГМО на лабораторных животных (свободных от специфических патогенов мышах, цыплятах) с определением летальной дозы для 50% лабораторных животных;

д) осуществляется оценка соответствия ГМО заявленному, используется методика идентификации ГМО утвержденного протокола молекулярно-генетического исследования ГМО;

е) изучение микробиологических свойств, чувствительности к антибиотикам и бактериофагам, гемолитической активности на эритроцитах животных (в отношении ГМО-бактерий);

ж) исследование стабильности ГМО при пассировании на жидких и плотных питательных средах с последующим через 7 пассажей тестированием биохимических свойств (в отношении ГМО-бактерий, простейших, грибов);

з) исследование жизнестойкости ГМО на объектах окружающей среды, в том числе на влажных опилках, ватных тампонах, при термической обработке;

и) исследование инвазивности ГМО;

к) исследование антагонистической или симбиотической активности ГМО с представителями резидентной микрофлоры кишечника;

л) иммунологические исследования ГМО на мышах линий СВА.

2.3. Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 2.1. настоящей методики.

В случае если исследования проводятся организацией, осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не может превышать 250 рабочих дней с момента представления заявителем образцов ГМО и исходного организма.

2.4. По результатам экспертизы выдается заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду, в случае отсутствия изменений в сторону ухудшения состояния окружающей среды по сравнению с воздействием на нее немодифицированного организма.

В заключении об отсутствии негативного воздействия на окружающую среду могут быть указаны специальные условия использования ГМО, в том числе при производстве конкретного вида кормов и кормовых добавок, при соблюдении которых негативное воздействие ГМО на окружающую среду отсутствует.

2.5. В случаях, не предусмотренных пунктом 2.4. настоящей методики, выдается заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

2.6. Если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные подпунктами "а"-"к", "н"-"о" пункта 2.1 настоящей методики, и (или) образцы ГМО и исходного организма-реципиента, пригодные для проведения исследований, в количестве, необходимом для проведения исследований (в случае, предусмотренном пунктом 2.2 настоящей методики), экспертиза не должна проводиться. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лабораторией), в срок, не превышающий 20 рабочих дней с момента обращения заявителя в указанную организацию.

III. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов.

3.1. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, включает анализ представленных заявителем документов и данных, предусмотренных подпунктами "а" - "и" и "о" пункта 2.1. настоящей методики, а также:

а) копии отчетов исследований кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные штаммы ГМО (при наличии);

б) информацию о регистрации кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов, в государствах-членах Евразийского экономического союза, иных государствах, а также о наличии, либо отсутствии фактов негативных последствий применения кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособные генетически модифицированные штаммы микроорганизмов;

в) протоколы исследований, указанных в подпунктах "г", "д" пункта 3.2. настоящей методики (при наличии), проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации соответствующей исследованиям, указанным в настоящей методике.

В случае если протоколы исследований, указанных в пункте 3.2 настоящей методики, не представлены заявителем, данные исследования проводятся организацией, осуществляющей экспертизу.

3.2. В отношении ГМО, предназначенных для производства кормов и кормовых добавок, содержащих нежизнеспособный ГМО, проводятся следующие исследования образцов кормов и кормовых добавок, представленных заявителем в количестве, необходимом для проведения исследований:

а) осуществляется оценка соответствия ГМО заявленному, используется методика идентификации ГМО утвержденного протокола молекулярно-генетического исследования ГМО;

б) осуществляется проверка кормов и кормовых добавок на наличие генно-модифицированных нуклеиновых кислот штамма ГМО в представленных образцах;

в) исследование образцов кормов и кормовых добавок на отсутствие жизнеспособного ГМО с использованием микробиологических методов;

г) токсикологических исследований образцов кормов и кормовых добавок: результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных (грызунах);

д) биоинформатического анализа: результаты оценки безопасности одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белка); наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической, или иной биологической активностью (при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank);

е) иммунологические исследования образцов кормов и кормовых добавок на мышах линий СВА.

3.3. Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктом 3.1. настоящей методики.

В случае если исследования проводятся организацией, осуществляющей проведение экспертизы, срок проведения исследований и экспертизы не может превышать 150 рабочих дней с момента представления заявителем образцов кормов и кормовых добавок.

3.4. По результатам экспертизы выдается заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду, в случае отсутствия изменений в сторону ухудшения состояния окружающей среды по сравнению с воздействием на нее немодифицированного организма.

3.5. В случаях, не предусмотренных пунктом 3.4. настоящей методики, выдается заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

3.6. Если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные подпунктами "а"-"и", "о" пункта 2.1, подпунктом "б" пункта 3.1 настоящей методики, и (или) образцы ГМО и исходного организма-реципиента, пригодные для проведения исследований, в количестве, необходимом для проведения исследований (в случае, предусмотренном пунктом 3.2 настоящей методики), экспертиза не должна проводиться. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лабораторией), в срок, не превышающий 20 рабочих дней с момента обращения заявителя в указанную организацию.

IV. Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих и/или полученных с использованием ГМО растительного происхождения, неспособного к репродукции.

4.1 Экспертиза ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих и/или полученных с использованием ГМО растительного происхождения, включает анализ представленных заявителем документов и данных:

а) описание свойств, приобретенных организмом в результате модификации и сведений об исходном организме (таксономическая характеристика с указанием метода идентификации);

б) кода, сформированного согласно Общероссийскому классификатору трансформационных событий;

в) описания структуры генетической конструкции (внесенной или удаленной) и места ее локализации (при наличии), характеристики встроенных или измененных генов;

г) информации о генетической модификации: описание метода модификации, структуры вектора, структуры вставки, расположении рекомбинантной ДНК (хромосома, органелла, плазмида), включая фланкирующие последовательности, характеристику экспрессии встроенных генов в процессе онтогенеза растения, уровень экспрессии в различных тканях растения, различия с исходным организмом;

д) информации об организмах-донорах вносимых генов (таксономическая характеристика, данные о токсических, аллергенных свойствах, группа патогенности при наличии);

е) данных секвенирования вставки ГМО и бордерных последовательностей, не менее 100 нуклеотидов по флангам генома реципиента;

ж) описания методики, позволяющей идентифицировать генетическую модификацию, в том числе описание нуклеотидных последовательностей, используемых праймеров, зондов и условий ПЦР;

з) протоколы молекулярно-генетических исследований, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации соответствующей исследованиям, указанным в настоящей методике;

и) информации о регистрации ГМО, кормов и кормовых добавок, их содержащих в Российской Федерации и/или государствах-членах Евразийского экономического союза и иных государствах;

к) оценка композиционной эквивалентности проводится на основании сведений, представленных заявителем, о результатах сравнения химического состава ГМО с химическим составом его традиционного аналога по следующим:

- содержание белка;

- аминокислотный состав;

- содержание жира;

- жирнокислотный состав;

- углеводный состав;

- содержание витаминов;

- содержание макро- и микроэлементов;

- содержание биологически активных веществ;

- содержание аллергенов;

- содержание антропогенных и природных контаминантов (токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, радионуклидов, вредных примесей);

- содержание антинутриентов и других веществ, характерных для растительных организмов данного вида.

Оценка композиционной эквивалентности ГМО и его традиционного аналога проводится с учетом биологических колебаний значений показателей, характерных для растений данного вида.

л) результаты исследований (при наличии) (оформленные соответствующими протоколами исследований), указанных в подпунктах "а" - "и" пункта 4.2. настоящей методики, проведенных в организациях (испытательных лабораториях), аккредитованных в национальной системе аккредитации, с областью аккредитации соответствующей исследованиям, указанным в настоящей методике.

В случае если результаты исследований (оформленные соответствующими протоколами исследований), указанных в подпунктах "а" - "и" пункта 4.2 настоящей методики, не представлены заявителем, данные исследования проводятся организацией, осуществляющей экспертизу.

Заявитель вправе представить любую иную информацию по своему усмотрению.

4.2. Проведение испытаний ГМО для производства кормов и кормовых добавок, содержащих и/или полученных с использованием ГМО растительного происхождения неспособного к репродукции, осуществляется путем следующих исследований (в соответствии с приложением к настоящей методике), предоставленных заявителем образцов ГМО и образцов традиционного аналога ГМО:

б) аллергологических исследований включающих:

- результаты оценки аллергенных свойств одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (сравнение с известными аллергенами с использованием баз данных, содержащих информацию о трехмерной структуре и функции известных аллергенов и родственных им белков);

- определение аллергенности белка в иммунохимических исследованиях in vitro;

- определение устойчивости к воздействию протеолитических ферментов (пепсина);

в) биоинформатического анализа: результаты оценки безопасности одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белка; наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической, или иной биологической активностью (при использовании баз данных PIR, EMBL, SwissProt, GenBank);

г) изучение стабильности белка при обработке, хранении, технологической переработке; влияние температуры и рН, возможные модификации и/или образование стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивость белка к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте in vitro; исследования острой пероральной токсичности белка в эксперименте на грызунах;

д) оценка безопасности продукта (данные 90-дневных исследований на грызунах, данные исследований на молодых быстро растущих животных цыплятах-бройлерах, ягнятах - в случае если такие исследования проводились);

е) оценка чувствительности методики идентификации ГМО, по результатам проверки которой оформляется протокол с указанием пригодности или непригодности методики. Протокол с указанием пригодности методики оформляется в случае, если методика имеет высокую чувствительность (не менее 104 геномных эквивалентов/мл). В противном случае оформляется протокол о непригодности методики;

ж) исследование репродуктивной способности образцов ГМО растительного происхождения;

з) анализ результатов других исследований, включающих результаты определения кормовой ценности (так как заданные и незаданные эффекты генетической модификации могут являться причиной изменения баланса макро- и микронутриентов, и, следовательно, вести к изменению пищевой ценности продукта);

и) анализ результатов пострегистрационного мониторинга кормов и кормовых добавок, полученных с использованием данного ГМО, в стране-заявителе и других странах, осуществляемого с целью выявления незаданных эффектов генетической модификации, которые не могли быть обнаружены на стадии регистрационных исследований (при наличии).

4.3. Срок проведения экспертизы биологической безопасности не может превышать 90 рабочих дней с момента представления заявителем документов и данных, предусмотренных пунктами 4.1, 4.2 настоящей методики.

4.4. По результатам экспертизы выдается заключение об отсутствии негативного воздействия ГМО на окружающую среду, в случае отсутствия изменений в сторону ухудшения состояния окружающей среды по сравнению с воздействием на нее немодифицированного организма.

4.5. В случаях, не предусмотренных пунктом 4.4. настоящей методики, выдается заключение о негативном воздействии ГМО на окружающую среду.

4.6. Если заявителем не представлены документы и данные, предусмотренные подпунктами "а"-"к" пункта 4.1 настоящей методики, и (или) образцы ГМО и исходного организма-реципиента, пригодные для проведения исследований, в количестве, необходимом для проведения исследований (в случае, предусмотренном пунктом 4.2 настоящей методики), экспертиза не должна проводиться. Заявителю должен быть выдан мотивированный отказ в проведении экспертизы, подписанный руководителем организации (испытательной лабораторией), в срок, не превышающий 20 рабочих дней с момента обращения заявителя в указанную организацию.

Приложение
к методике производства экспертиз (исследований) биологической
безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов,
используемых для производства кормов и кормовых добавок

Проведение исследований для оценки биологической безопасности ГМО растительного происхождения, используемого для производства кормов и кормовых добавок.

1. В обязательном порядке заявитель предоставляет для исследования стандартные образцы ГМО и его традиционного аналога в количестве, достаточном для проведения необходимого объема исследований.

2. При оценке безопасности ГМО растительного происхождения учитываются результаты проведенных экспертами молекулярно-генетических исследований, включающих подтверждение присутствия в геноме ГМО заявленных чужеродных генов, исследований на наличие возможных не декларированных генетических модификаций.

Срок проведения оценки: не более рабочих 45 дней.

3. Гигиенические исследования ГМО растительного происхождения включают определение показателей качества и безопасности. Изучаемые показатели: содержание токсичных элементов; микотоксинов; пестицидов; радионуклидов; вредных примесей; микробиологические показатели.

Перечень показателей безопасности определяется на основании требований Технических регламентов и санитарно-гигиенических норм и правил, утвержденных на территории Российской Федерации.

Срок проведения исследования: не более рабочих 45 дней.

4. Оценка композиционной эквивалентности ГМО растительного происхождения и традиционного аналога проводится с целью исключения риска снижения их биологической полноценности. Сравниваются кормовая ценность нового и традиционного продукта (содержание белка, аминокислотный состав, содержание жира, жирнокислотный состав, углеводный состав, содержание витаминов, макро - и микроэлементов, специфических компонентов, биологически активных веществ, антинутриентов и других веществ, характерных для растений данного вида); нормы потребления; способы использования; биодоступность и переваримость; влияния на микрофлору желудочно-кишечного тракта. В случае если заявителем представлены исчерпывающие данные по композиционной эквивалентности, исследования могут быть ограничены определением влажности, золы, содержания белка, жира, углеводов, пищевых волокон. Если в результате оценки композиционной эквивалентности не обнаруживается отличий ГМО продукции от традиционных аналогов, то ее считают полностью безвредной для здоровья животных. В случае если генетическая модификация направлена на изменение химического состава ГМО, должны быть проведены исследования, подтверждающие заявленные изменения.

5. Токсикологические исследования линий ГМО растительного происхождения на двух поколениях лабораторных животных.

Изучение токсичности ГМО проводится в эксперименте на крысах линии Вистар. Токсикологические исследования включают изучение репродуктивной функции крыс поколения F0 , пре- и постнатальное развитие потомства поколения F1, а также оценку физиолого-биохимических показателей крыс поколения F0, F1 (на основании данных о динамике массы тела, об абсолютной и относительной массе внутренних органов; данных гематологических, морфологических и биохимических исследований, состояния антиоксидантного статуса и функционального состояния систем, осуществляющих защиту организма от воздействия токсичных соединений экзо- и эндогенного происхождения). Эксперимент проводится на самцах и самках крыс (исходный возраст 25-30 дней). Животных (исходно - не менее 110 самок и 50 самцов) делят на 2 группы, группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО; группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО. Количество животных в группах в начале эксперимента должно составлять не менее 55 самок и 25 самцов. Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

Исследуются следующие показатели: общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова) - каждые 2 дня; поедаемость корма - ежедневно; масса тела - каждые 7 дней. Отбор материала для гематологических, биохимических, морфологических исследований, определения массы внутренних органов (головного мозга, сердца, селезенки, легких, тимуса, гипофиза, печени, почек, надпочечников и семенников) проводят не ранее, чем через 100 дней с начала эксперимента у самцов поколения F0 (не менее 15 крыс на группу).

Оценивают показатели:

- гематологические показатели крови: концентрация гемоглобина; гематокрит; общее количество эритроцитов; средний объем эритроцита (СОЭ); среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ); средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ); общее количество тромбоцитов; общее количество лейкоцитов; дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы);

- биохимические показатели крови: аланинаминотрансфераза (АЛТ); аспартатаминотрансфераза (АСТ); желчные кислоты; фосфатаза щелочная; билирубин общий; билирубин прямой; белок общий; альбумин; глобулин; креатинин; глюкоза; альфа-амилаза; липаза; лактатдегидрогеназа; общие липиды; триглицериды; холестерин; холинэстераза; мочевина; хлориды; натрий; фосфор; калий;

- общий анализ мочи; изучаемые показатели суточный диурез; цвет и прозрачность; относительная плотность; pH; белок; глюкоза; креатинин;

- биомаркеры cистемы антиоксидантной защиты (материал для исследований: эритроциты); изучаемые показатели активность ферментов антиоксидантной защиты: глутатионредуктазы; глутатионпероксидазы; супероксиддисмутазы; каталазы;

- биомаркеры cистемы антиоксидантной защиты (материал для исследований: кровь, печень); изучаемые показатели: содержание продуктов перекисного окисления липидов: малоновый диальдегид;

- cистема ферментов метаболизма ксенобиотиков (материал для исследований: печень); изучаемые показатели: активность ферментов 1-й и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков: общее содержание цитохрома Р-450; 7-этоксирезоруфин-О-деэтилаза; 7-пентоксирезоруфин-О-деэтилаза; UDP-глюкуронозилтрансфераза; глутатионтрансфераза;

- cистема регуляции апоптоза, стабильность мембран лизосом (материал для исследований: печень); изучаемые показатели: общая и неседиментируемая активность-ферментов лизосом, галактозидаза; глюкуронидаза; арилсульфатазы А и В.

Для погибших в течение эксперимента животных проводят морфологические исследования кожи; головного мозга; сердца; аорты; селезенки; легких. Выполняют макроскопические и микроскопические исследования, обзорные гистологические, морфометрический анализ на 30-й и 180-й дни эксперимента (плановый забор). Для поджелудочной железы; почек; семенников проводят микроскопические (электронно-микроскопические), гистохимические; иммуногистохимические исследования. Также возможны дополнительно морфологические исследования лимфатических узлов; тимуса; щитовидной железы; гипофиза; желудка, тонкой и толстой кишки; печени для установления причины смерти.

Срок проведения исследования: не более 200 рабочих дней.

6. Иммунологические исследования ГМО на лабораторных животных.

Иммунологические исследования ГМО, проводятся в эксперименте на мышах линий СВА (характеристика: высокочувствительны к введению эритроцитов барана и не чувствительны к гистамину и Salmonella typhimurium) и С57Bl/6 (характеристика: низкокочувствительны к введению эритроцитов барана, чувствительны к гистамину и Salmonella typhimurium). Исследования включают изучение иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:

- действие на гуморальное звено иммунитета в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;

- действие на клеточное звено иммунитета в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана;

- действие как сенсибилизирующего агента в тесте чувствительности к гистамину;

- действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).

Срок проведения исследования: не более 40 дней.

7. Аллергологические исследования ГМО растительного происхождения на лабораторных животных.

Потенциальную аллергенность оценивают, определяя тяжесть протекания системной анафилаксии и уровня циркулирующих сенсибилизирующих антител у крыс, получающих в составе рациона исследуемый ГМО (группа "опыт") и его традиционный аналог (группа "контроль"). Метод основан на количественной сравнительной оценке тяжести реакции системной анафилаксии, возникающей при внутрибрюшинной (в/б) сенсибилизации взрослых крыс пищевым антигеном - овальбумином куриного яйца (ОВА) с последующим внутривенным (в/в) введением сенсибилизированным животным разрешающей дозы того же белка.

Эксперимент проводится на крысах линии Вистар (половозрелые самцы, исходная масса тела 150-180 г). Животных делят на 2 группы, группа "контроль" получает рацион с включением традиционного аналога исследуемого ГМО; группа "опыт" получает рацион с включением исследуемого ГМО. Количество животных в группе в начале эксперимента - не менее 25 особей в каждой группе. На протяжении эксперимента животные получают стандартный рацион вивария (на 1 крысу в день: крупа овсяная 2,5 г, зерновая смесь 14,0 г., хлеб 2 сорт 4,0 г., творог 2,0 г., рыбная мука 0,5 г, мясо 2 категории 4,0 г., морковь 8,0г., зелень 8,0г., рыбий жир 0,1г., дрожжи 0,1 г., NaCl 0,15г.; основные нутриенты белок 3,69 г. жир 1,28 г., углеводы 12,42 г.; энергия, 76,0 ккал). Исследуемый ГМО и его традиционный аналог включают в состав корма в максимально возможном количестве, не нарушающем баланс основных пищевых веществ. Замена ингредиентов рациона должна быть проведена с учетом содержания белков, жиров и углеводов во вводимом продукте при соблюдении принципа изокалорийности. Пищевая и биологическая ценность рациона полностью удовлетворяет физиологические потребности животных. Рацион не содержит яичного белка. Животные получают свободный доступ к корму и воде; содержатся в отапливаемом, вентилируемом помещении.

На 1-й, 3-й, 5-й день опыта крыс в/б сенсибилизируют ОВА, а на 21-й день эксперимента вводят дополнительную ("бустерную") дозу антигена, уменьшенную в 10 раз в сравнении с первоначальной. Кормление рационами продолжают до утра 29-го дня эксперимента и затем вводят раствор ОВА в/в, после чего оценивают на протяжении 24 ч тяжесть развивающейся реакции анафилаксии по показателям числа летальных реакций, общего числа судорожных реакций и величины анафилактического индекса. Непосредственно перед введением разрешающей дозы у крыс отбирают 0,1-0,2 мл крови из хвостовой вены для определения уровня специфических антител. Проводят иммуноферментное определение уровней циркулирующих специфических антител к ОВА.

Тяжесть реакции анафилактического шока в каждой из групп животных оценивают по анафилактическому индексу, учитывающему тяжесть реакции анафилаксии, и проценту летальных реакций анафилаксии.

Срок проведения исследования: не более рабочих 40 дней.

8. Генотоксикологические исследования ГМО проводятся в эксперименте на лабораторных животных. Оценка потенциальной генотоксичности ГМО включает выявление повреждений ДНК и выявление мутагенной активности в эксперименте in vivo. Метод выявления мутагенной активности основан на учете хромосомных аберраций в метафазных клетках пролиферирующих тканей. Регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет).

Исследуемые показатели:

- в основе метода выявления мутагенной активности лежит регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы. Анализируют 100 метафаз от каждого животного. Учитывают число одиночных и парных фрагментов, хроматидных и хромосомных обменов, ахроматических пробелов (гепов) и разрывов по центромере, число клеток с множественными повреждениями и клеток с полной деструкцией хромосом. Оценку результатов цитогенетического анализа проводят путем сопоставления долей клеток с хромосомными аберрациями в контрольной и опытной группах.

- регистрация повреждений ДНК предусматривает оценку целостности структуры ДНК методом щелочного гель-электрофореза изолированных клеток (метод ДНК-комет). Метод основан на регистрации различной подвижности ДНК и возможных фрагментов ДНК лизированных клеток, заключенных в агарозный гель, в постоянном электрическом поле. При этом ДНК мигрирует к аноду, формируя электрофоретический след, напоминающий "хвост кометы", параметры которого зависят от степени поврежденности исследуемой ДНК. Общая схема метода включает получение гель-слайдов (подложки), получение микропрепаратов, лизис, щелочную денатурацию, электрофорез, нейтрализацию/фиксацию, окрашивание и микроскопический анализ.

Микроскопический анализ проводят на эпифлуоресцентном микроскопе с соответствующими для конкретного красителя фильтрами при увеличении 200х - 400х. На каждый микропрепарат анализируют не менее 100 "ДНК-комет". Анализ "ДНК-комет" может проводиться визуально или с помощью программно-аппаратного комплекса.

9. Исследования репродуктивной токсичности ГМО проводятся в эксперименте на двух поколениях (F0 и F1) лабораторных животных и включают:

- изучение влияния на генеративную функцию;

- изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития.

Срок проведения исследования: не более двух лет.

10. Токсикологические исследования линий ГМО растительного происхождения на лабораторных животных с изучением репродуктивной токсичности на двух поколениях (F0 и F1) должны быть продолжены на третьем (F2) и последующих поколениях лабораторных животных в случаях:

- когда в результатах исследований между опытной и контрольной группами лабораторных животных наблюдаются различия в диапазоне между погрешностью эксперимента и величиной двукратной погрешности (статистически значимое различие) по контролируемым параметрам;

- когда между опытной и контрольной группой наблюдаются различия по неконтролируемым в эксперименте параметрам (например, пигментация, отклонение в поведении, появление нехарактерных физиологических, анатомических, биохимических признаков)

- когда в процессе проведения экспертизы (исследования) получены данные из рецензируемых научных источников о неблагоприятном влиянии исследуемого ГМО на животных (в том числе целевых), не предоставленные заявителем.

11. Отчет по результатам исследований репродуктивной токсичности ГМО должен включать цифровые данные в форме таблиц, содержащих основные сведения, необходимые для суждения о наличии или отсутствии у исследуемого ГМО неблагоприятного действия на внутриутробное развитие и процессы репродукции.

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас

Получить бесплатный доступ

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.