Приложение В (рекомендуемое). Способы культивирования посевов в анаэробных условиях

Приложение В
(рекомендуемое)

Способы культивирования посевов в анаэробных условиях

В.1 При культивировании посевов для выявления анаэробных микроорганизмов в обычных атмосферных условиях заданное значение окислительно-восстановительного потенциала жидкой среды достигается и поддерживается путем добавления в среду редуцирующих веществ: кусочков печени или мяса, не содержащих ингибиторов микроорганизмов, тиогликолевой кислоты, цистина, глюкозы, аскорбиновой кислоты, путем повышения вязкости среды за счет добавления в нее 0,05-0,1% агара и путем наслаивания на поверхность среды парафиновазелиновой смеси, голодного агара и других веществ, защищающих среду от проникновения в нее кислорода окружающей среды.

В.2 Продукт или его разведения высевают в пробирки с жидкой (вязкой) средой непосредственно после удаления кислорода из среды путем прогрева пробирок в течение 10-15 мин в кипящей водяной бане или при помощи текучего пара с последующим быстрым охлаждением до температуры °С - при выявлении мезофильных микроорганизмов или до 55-62°С - при выявлении термофильных микроорганизмов.

В.3 Анаэробные условия в герметичных емкостях, предназначенных для термостатирования посевов, создают путем заполнения емкостей инертным газом (азотом, водородом или гелием) или смесью (азота - 80%, углекислого газа - 10% и водорода - 10%) или за счет химического поглощения кислорода. Отсутствие кислорода в емкости контролируют индикатором Eh среды (метиленовой синью, резазурином и др.).

В.4 Оптимальные условия для развития строгих анаэробов создают в анаэростатах, снабженных специальными препаратами, поглощающими кислород, за счет реагирования его с водородом, выделяющимся при увлажнении препарата водой в присутствии платины, палладия или других катализаторов.

В.5 Для создания анаэробных условий за счет химического поглощения кислорода воздуха в герметичных сосудах используют основной раствор пирогаллола. Для поглощения кислорода из 100  воздуха применяют смесь 10 раствора гидроокиси натрия с (NaOH)=2,5 и 1 г пирогаллола, приготовленную после помещения посевов в сосуд непосредственно перед его герметизацией.

В.6 Для создания анаэробных условий непосредственно в посевах на чашках Петри на внутреннюю поверхность крышки с помощью липкой бумаги прикрепляют бумажный пакет 4x7 см, содержащий 2 г сухой смеси, состоящей из пирогаллола, карбоната калия и талька в соотношении 3:3:15. Затем чашку Петри герметизируют, смазывая края крышки пластилином или другими герметизирующими материалами.

В.7 Анаэробные условия создают с помощью бактерий, сильно поглощающих при росте кислород, например Serratia marcescens.

Одну половину чашки Петри с агаризованной средой засевают исследуемым материалом, а другую - бактериями, поглощающими кислород (способ Фортнера). Чашки Петри герметизируют, как указано в В.6.

При выборе условий анаэробного культивирования учитывают устойчивость определяемого микроорганизма к парциальному давлению кислорода и требуемое для его развития значение окислительно-восстановительного потенциала среды.