Межгосударственный стандарт ГОСТ 30425-97 "Консервы. Метод определения промышленной стерильности" (введен в действие постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 18 августа 1997 г. N 279)

7.7.1 Для выявления жизнеспособных мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в каждую из двух пробирок, содержащих по 5-6 жидкой питательной среды, вносят по  г или консервированного продукта.

Перечень используемых для выявления мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов питательных сред, их состав и приготовление по ГОСТ 10444.1.

7.7.2 Для выявления жизнеспособных мезофильных анаэробных микроорганизмов на дно каждой из двух пробирок с регенерированной питательной средой вносят по  г или консервированного продукта, при анализе консервов детского или диетического питания в каждую пробирку вносят по  г или консервированного продукта.

Питательную среду регенерируют непосредственно перед использованием (приложение В, пункт В.2).

Перечень используемых для выявления мезофильных анаэробных микроорганизмов питательных сред, их состав и приготовление по ГОСТ 10444.1.

Высота слоя среды с внесенным продуктом в обычных пробирках должна быть 10-11 см, а в высоких, куда высевают  г или продукта - 14-15 см. Количество питательной среды в высоких пробирках при этом должно составлять около 30 .

Сразу после посева на поверхность жидкой питательной среды, если она приготовлена без вазелинового масла, наслаивают голодный агар или вазелиновое масло, или парафиновую смесь, приготовленные по ГОСТ 10444.1, в таком количестве, чтобы образовался слой высотой около 2 см.

Допускается применение свежеприготовленных питательных сред без наслаивания голодного агара, вазелинового масла или парафиновой смеси (вазелиновое масло тормозит развитие анаэробных микроорганизмов при их пересеве с жидкой среды на агаризованную).

7.7.3 Посевы для выявления термофильных аэробных, факультативно-анаэробных и анаэробных микроорганизмов проводят по 7.7.1 и 7.7.2 (термофильные аэробные и факультативно-анаэробные микроорганизмы - по 7.7.1, термофильные анаэробные микроорганизмы-по 7.7.2) на питательные среды по ГОСТ 10444.1 для выявления этих групп микроорганизмов. Термофильные анаэробные микроорганизмы в консервах детского и диетического питания выявляют в  г или продукта.

7.7.4 При необходимости подсчета НВЧ аэробных, факультативно-анаэробных или анаэробных микроорганизмов посев продукта проводят с учетом требований ГОСТ 26670.

7.7.5 Посевы для выявления или подсчета количества мезофильных микроорганизмов термостатируют при температуре °С, термофильных - при 55-62°С до появления видимых признаков роста, но не менее 5 сут для мезофильных микроорганизмов и не менее 3 сут для термофильных микроорганизмов.

7.7.6 При необходимости подтверждения присутствия в консервах бацилл и (или) клостридий в споровой форме навески консервированного продукта дополнительно вносят параллельно в две пробирки со средами, указанными в 7.7.1, и (или) 7.7.2 и (или) 7.7.3. Посевы прогревают при температуре °С в течение 20 мин при выявлении спор мезофильных микроорганизмов, при температуре °С в течение 20 мин при выявлении спор термофильных микроорганизмов. Для прогрева пробирки с посевами помещают в предварительно нагретую до 50°С водяную баню таким образом, чтобы уровень содержимого пробирок был на 2-3 см ниже, чем уровень воды в бане. Одновременно в водяную баню помещают контрольную пробирку с водой и термометром. Уровень воды в контрольной пробирке должен соответствовать уровню содержимого пробирок с посевами. Время термообработки начинают отсчитывать с того момента, когда температура воды в контрольной пробирке достигнет требуемой величины °С или °С. Период подогрева содержимого пробирок до требуемой температуры должен быть 2-3 мин. Посевы после 20 мин термообработки немедленно охлаждают в струе водопроводной воды и затем термостатируют по 7.7.5.

7.7.7 Во время термостатирования посевов проводят ежедневные наблюдения за появлением признаков развития микроорганизмов: помутнения среды, образования газа, пленки, осадка.

По мере необходимости из посевов отбирают культуральную жидкость для определения морфологии клеток, наличия спор, отношения к окраске по Граму, наличия глобул в бациллярных клетках и каталазной активности.

Тесты для определения принадлежности микроорганизмов к определенной группе приведены в приложении Г.

7.7.8 Принадлежность выделенных микроорганизмов к типичным группам мезофильных бацилл устанавливают по культуральным особенностям развития, способности к спорообразованию в аэробных условиях, положительной окраске по Грамму, наличию каталазы, морфологическим особенностям протоплазмы клеток или спорангий.

Принадлежность микроорганизмов к мезофильным клостридиям устанавливают по культуральным особенностям развития, газообразованию, сульфитредуцирующей активности, способности к спорообразованию в анаэробных условиях, морфологии клеток, положительной окраске по Граму, отсутствию каталазы.

Принадлежность к термофильным аэробным и факультативно-анаэробным микроорганизмам устанавливают по изменению цвета среды, если она содержит индикатор - бромкрезоловый пурпурный, морфологии клеток, наличию спор, отношению к окраске по Граму, каталазной активности.

Принадлежность к термофильным анаэробным микроорганизмам устанавливают по культуральным особенностям развития, газообразованию, сульфатредуцирующей активности, способности к спорообразованию в анаэробных условиях, морфологии клеток, отношению к окраске по Граму, каталазной активности.

Отсутствие среди выявленных микроорганизмов B.cereus устанавливают по ГОСТ 10444.8, С. perfringens - по ГОСТ 10444.9, С. botulinum - по ГОСТ 10444.7.

7.7.9 В случаях, когда присутствие продукта в культуральной жидкости затрудняет выявление жизнеспособных микроорганизмов, пересевают культуральную жидкость из посевов на чашки Петри. Для выявления анаэробных микроорганизмов проводят пересевы в пробирки или в трубки Вейона, или в чашки Петри под стекло или культивируют посевы в условиях, указанных в приложении В. Для получения отдельных колоний проводят посевы с использованием десятикратных разведений культуральной жидкости.

При подозрении на присутствие D. nigrificans в посевах на термофильные анаэробные микроорганизмы для пересевов используют молочно-сульфатную среду или среды, содержащие сульфиты. Посевы термостатируют при температуре 55-62°С в течение 48 ч. Спорообразующие клостридии образуют большое количество газа на средах с глюкозой. D. nigrificans вызывает почернение сред, содержащих сульфиты или сульфаты.

7.7.10 Определение количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов в пастеризованных газированных фруктовых соках и напитках проводят по ГОСТ 10444.15.