Методические указания МУК 4.1.2889-11 "Определение бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 2011 г.)

Методические указания МУК 4.1.2889-11
"Определение бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 6 июля 2011 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Введены впервые

Область применения

Настоящие методические указания устанавливают метод капиллярной газожидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектором для определения массовых концентраций бис(2-этилгексил)фталата в жидких пищевых продуктах (бутилированная вода, безалкогольные напитки, соковая продукция) в диапазоне 0,1-1 000,0 мг/кг.

Методические указания предназначены для органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека и других служб, осуществляющих надзор (контроль) качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, а также могут быть использованы другими лабораторными центрами, аккредитованными в установленном порядке.

1. Краткая характеристика бис(2-этилгексил)фталата

Общепринятое название: бис(2-этилгексил)фталат.

Название по номенклатуре ИЮПАК: бис(2-этилгексиловый) эфир 1,2-бензолдикарбоновой кислоты.

Синонимы: бис-(изооктил)фталат, ВЕНР.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: , Молекулярная масса 390,56.

Номер CAS: 117-81-7.

Физические свойства: бесцветная или слегка желтоватая жидкость, температура плавления -55°С, температура кипения 384°С, плотность D 0,981 при 25°С. Практически нерастворим в воде (0,285 мг в 1 л при 24°С), растворим в гексане, хлористом метилене, трихлортрифторэтилене и других органических растворителях.

В промышленности бис(2-этилгексил)фталат (далее - БЭГФ) используют в качестве пластификатора для пластмасс на основе поливинилхлорида для получения гибкости полимерных продуктов. Поливинилхлоридные пластмассы могут содержать от 1 до 40% БЭГФ. БЭГФ относится к 3-й группе токсичности. Европейское агентство по безопасности пищи (EFSA) оценило уровень, при котором отсутствуют наблюдаемые вредные эффекты (NOAEL), в 5 мг на 1 кг веса тела в день. С учетом дополнительного коэффициента безопасности (100) допустимый уровень суточного воздействия (TDI) установлен в 0,05 веса тела, что эквивалентно 0,003-0,004 веса тела/сутки. В Российской Федерации согласно СанПиН 2.1.4.1116-02 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. Контроль качества" нормативами качества воды по показателю ди(2-этилгексил)фталата являются для воды первой категории - 6 ; для воды высшей категории - 0,1 .

2. Методика определения бис(2-этилгексил)фталата в воде, безалкогольных напитках и соковой продукции методом капиллярной газожидкостной хроматографии с пламенно-ионизационным и масс-спектрометрическим детектором

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении бис(2-этилгексил)фталата методом капиллярной газожидкостной хроматографии (далее - ГЖХ) с использованием пламенно-ионизационного детектора (ПИД) или масс-спектрометрического детектора (далее - МС) после экстракции водного раствора гексаном (в случае воды) и перегонки с водяным паром и экстракции гексаном из водного дистиллята (в случае безалкогольных напитков и соковой продукции). Для количественного определения применен метод внутреннего стандарта, в качестве которого используется дейтерированный аналог бис-(н-гексил)-фталат- (БГФ-d).

2.1.2. Метрологические характеристики методики

Таблица 1

Метрологические характеристики методики определения при анализе воды

Метрологические характеристики	Диапазон концентраций БЭГФ в пробе
	0,05-50,0	50-5 000
Предел повторяемости (r), %	19,2	15,5
Предел воспроизводимости (),%	23,2	19,3
Относительная систематическая погрешность измерений (), %, Р = 0,95	16,9	13,8
Примечание: метрологические характеристики рассчитаны для образцов с содержанием бис(2-этилгексил)фталата 1,0 и 500,0

Таблица 2

Метрологические характеристики методики определения при анализе безалкогольных напитков и соковой продукции

Метрологические характеристики	Диапазон концентраций БЭГФ в пробе
	1-100	100-5 000
Предел повторяемости (r), %	19,9	17,8
Предел воспроизводимости (),%	24,5	21,6
Относительная систематическая погрешность измерений (), %, Р = 0,95	17,5	15,7
Примечание: метрологические характеристики рассчитаны для образцов с содержанием бис(2-этилгексил)фталата 1,0 и 500,0

2.2. Реактивы

Бис(2-этилгексил)фталат, кат. N 48557, подобные производства фирмы "Sigma-Aldrich" или с аналогичными характеристиками
Бис(н-гексил)фталат-, кат. N 34167, подобные производства фирмы "Riedel-de Haen" - внутренний стандарт или с аналогичными характеристиками
Гексан, ч	ТУ 6-09-3534-74
Дихлорметан (хлористый метилен), осч
Натрий хлористый
Натрий серно-кислый безводный, хч	ГОСТ 199-68
Вода бидистиллированная (в стеклянной посуде)	ГОСТ 6709

2.3. Приборы, оборудование, посуда

Система капиллярной ГЖХ с пламенно-ионизационным детектором (ПИД)
Система капиллярной ГЖХ с квадрупольным масс-спектрометром
Микрошприц МШ-10 для жидкостной хроматографии или аналогичный
Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С или аналогичный	ТУ 64-1-2451-78
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и погрешностью 0,0001 г	ГОСТ 24104
Колбы плоскодонные с конусом 14/23 объемом 100	ГОСТ 25336
Цилиндры вместимостью 100	ГОСТ 1770
Пипетки 4-1-2 или 5-1-2, 4-2-25 или 5-2-25	ГОСТ 29227
Вайл (ёмкость 4-6 с герметично завинчивающейся крышкой)
Фильтры беззольные ФО-ФС-15 "Синяя лента"	ТУ 2642-001-42624157-98

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных в МУК.

Все растворители перед проведением анализа следует перегонять с использованием только стеклянной лабораторной посуды. На дальнейших этапах используется только стеклянная лабораторная посуда, предварительно промытая перегнанным в стекле гексаном или хлористым метиленом. Для исключения возможности получения ложноположительных результатов на всех этапах проведения анализа экстракты не должны контактировать с пластиками.

2.4. Отбор проб

Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией на конкретную продукцию.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Приготовление стандартных растворов бис(2-этилгексил)фталата и дейтерированного бис(н-гексил)фталата

Навеску (0,010,001) г БЭГФ количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 , растворяют в 20 метиленхлорида, затем добавляют гексан до метки. Получают основной стандартный раствор БЭГФ в 100 смеси гексан-хлористый метилен (4:1) с концентрацией 100 . Аналогично готовят основной стандартный раствор внутреннего стандарта БГФ-d с концентрацией 100 . Рабочие растворы с концентрацией фталатов 1 (1 ) готовят разбавлением в 100 раз гексаном стандартных растворов. Основной и рабочие стандартные растворы хранят в стеклянной посуде (мерной колбе) с притертой стеклянной пробкой в прохладном месте (при температуре около 0°С). Сроки годности основного раствора - 9 месяцев, рабочих растворов - 1 месяц.

2.5.2. Подготовка пробы для анализа

2.5.2.1. Подготовка образца воды

К 100 образца воды продукта добавляют 5 г сухого хлористого натрия. Добавляют 0,2 рабочего раствора БГФ-d и 0,8 гексана, добавка соответствует концентрации внутреннего стандарта в 2 .

Встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев из верхнего органического слоя вносят микрошприцем 1-2 в инжектор ГЖХ-ПИД системы. Количество БЭГФ в образце воды определяют по сравнению площади его пика с пиком внутреннего стандарта по калибровочной зависимости площади пиков анализируемого вещества и его дейтерированного аналога по формуле.

При анализе воды высшей категории, где установленный уровень МДУ составляет 0,1 , применяют следующий вариант подготовки пробы: к 1 образца воды добавляют 0,2 рабочего раствора БГФ-d и 9,8 гексана (добавка соответствует концентрации внутреннего стандарта в 0,2 ). Смесь встряхивают, отделяют верхний гексановый слой и удаляют гексан в токе азота до объема примерно в 1,0-1,5 , вносят микрошприцем 1-2 в инжектор ГЖХ-ПИД системы.

2.5.2.2. Подготовка образца безалкогольных напитков и соковой продукции

В круглодонную перегонную колбу на 250 помещают 100 напитка, добавляют 5 г хлористого натрия и 0,2 (2 БГФ-d в напитке) рабочего раствора внутреннего стандарта. Смесь нагревают на глицериновой бане до кипения, отгоняя 50 дистиллята. К водному дистилляту добавляют 1 гексана, встряхивают, после разделения слоев 1-2 из верхнего органического слоя вносят в инжектор ГЖХ системы. Далее анализируют по пункту 2.5.2.1.

2.6. Описание определения

Образцы анализируют с помощью системы ГЖХ-ПИД. Разделение проводят на капиллярной колонке 30 m x 0,32 mm х 0,25 um, покрытой полиметилсилоксаном типа DB-1ms или полиметилсилоксаном с 5% фенильных групп типа DB-5ms, газ-носитель - азот, скорость потока до сброса - 40-42 мл/мин, входное давление - 15 psi. Температура инжектора 280°С, режим ввода без разделения потока (splitless) газа-носителя, температура программируется от 60 до 280°С со скоростью 20°С/мин, температура детектора 300°С. Примерное время выхода растворителя 1,2-1,4 мин, БЭГФ - около 11 мин, внутреннего стандарта БГФ-d - около 10 мин. Относительное приведенное время удерживания выхода БЭГФ по внутреннему стандарту составляет примерно 1,095-1,085. ГЖХ-ПИД должна обеспечивать уровень сигнала фталатов, превышающий шум в 3 раза, при вводе 0,05 нг БЭФГ или БГФ-d.

2.6.1. Калибровка хроматографа

Для градуировки в хроматограф из рабочих растворов БЭГФ и внутреннего стандарта с концентрацией 1 каждый готовят смеси.

Калибровочная смесь N 1: к 1 рабочего раствора БЭГФ добавляют 1 рабочего раствора внутреннего стандарта, получая смесь с концентрацией каждого вещества 0,5 при соотношении стандартов 1:1.

Калибровочная смесь N 2: к 0,5 рабочего раствора БЭГФ добавляют 1,0 раствора внутреннего стандарта и 0,5 гексана, получая смесь с концентрацией БЭГФ 0,25 и БГФ-d 0,5 при соотношении стандартов 1:2.

Калибровочная смесь N 3: к 1,0 рабочего раствора БЭГФ добавляют 0,5 рабочего раствора внутреннего стандарта и 0,5 гексана, получая смесь с концентрацией БЭГФ 0,5 и БГФ-d 0,25 при соотношении стандартов 2:1.

Вводят 1-2 каждой смеси в ГЖХ-ПИД систему, определяют соотношения площадей пиков БЭГФ и внутреннего стандарта БГФ-d.

Строят калибровочный график зависимости соотношения площадей на хроматограммах () от соотношения концентраций БЭГФ и внутреннего стандарта БГФ-d (), определяя коэффициент K.

2.6.2. ГЖХ-МС анализ

Для подтверждения наличия БЭГФ используют систему ГЖХ-МС, основанную на Thermo Trace GC 200 газовом хроматографе, соединенного с квадрупольном масс-спектрометром DSQ II (подобного производства США), или аналогичную систему. Разделение проводят на капиллярной колонке 25 м х 0,32 мм х 0,25 мкм, покрытой полиметилсилоксаном типа DB-1ms или полиметилсилоксаном с 5% фенильных групп типа DB-5ms, газ-носитель - гелий, скорость потока через колонку -1 см/мин. Температура переходных линий - 250°С, температура термостата колонки программируется от 60 до 280°С со скоростью 10 см/мин, диапазон регистрируемых масс - от 40 до 450 а.е.м. Базовая масса БЭГФ - m/z = 149, другие характеристические ионы 113, 167 и 279. базовая масса внутреннего стандарта БГФ-d - m/z = 153.

2.7. Обработка результатов измерения

Содержание в образцах рассчитывают методом внутреннего стандарта по формуле:

, где

С - массовая концентрация БЭГФ, ;

- массовая концентрация добавленного внутреннего стандарта, ;

- отношение площади пика БЭГФ в образце к площади пика внутреннего стандарта;

К - калибровочный коэффициент, получаемый из калибровочной кривой (пункт 2.6.1).

За результат принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных измерений и выражают с точностью до одного десятичного знака.

3. Оперативный контроль результатов измерений

3.1. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

Хроматографирование проб проводят не менее двух раз, сравнивают отношение площади пика исследуемого вещества к площади пика внутреннего стандарта БГФ-d.

Допустимое расхождение между параллельными измерениями (R) определяют на основании предела повторяемости (r) (табл. 1):

, , где

- средняя концентрация двух определений и .

Если расхождение между параллельными определениями не превышает допустимого:

то среднее арифметическое принимают за результат анализа.

При превышении норматива R следует повторить измерения, используя новую пробу.

4. Требования техники безопасности

При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

5. Требования к квалификации операторов

Работу по указанной методике могут исполнять высококвалифицированные специалисты в области газожидкостной хроматографии и санитарной химии. Исполнители должны быть проинструктированы по основным мерам техники безопасности при работе с веществами 1-2-го класса опасности, органическими растворителями, а также по основным правилам безопасности при работе в химлаборатории (п. 3).

6. Условия измерений

Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с веществами 1-2-го класса опасности, органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционной системой согласно ГОСТ 12.4.021.

Температура окружающего воздуха должна быть от 15 до 25°С. Относительная влажность воздуха не более 80% при 25°С. Атмосферное давление 730-760 мм рт. ст. Напряжение электропитания 210-220 В. Частота переменного тока 45-50 Гц.

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко