Дата введения - 1 июля 2006 г.
1 Область применения
Настоящий руководящий документ устанавливает порядок определения острой токсичности водной среды в условиях опасного уровния загрязнения поверхностных вод суши, содержащих взвешенные вещества с помощью биотеста токсичности на основе фильтрационной активности инфузорий Paramecium caudatum.
Данный документ предназначен для оперативно-производственных подразделений территориальных управлений по гидрометеорологии и мониторингу окружающей среды (УГМС) Росгидромета, осуществляющих организацию и проведение оперативных наблюдений за состоянием аварийно загрязненных поверхностных вод суши.
Кроме этого документ может быть использован в сетевых подразделениях осуществляющих организацию и проведение режимных наблюдений за состоянием поверхностных вод суши в рамках Государственной службы наблюдений России в соответствии с правилами охраны поверхностных вод суши [1].
2 Нормативные ссылки
В настоящем документе использованы ссылки на следующие нормативные документы:
ГОСТ 17.1.1.01-77 Охрана природы. Гидросфера. Использование и охрана вод. Основные термины и определения.
ГОСТ 17.1.5.04-81 Охрана природы. Гидросфера. Приборы и устройства для отбора, первичной обработки и хранения проб природных вод. Общие технические условия.
ГОСТ 17.1.5.05-85 Охрана природы. Гидросфера. Общие требования к отбору проб поверхностных и морских вод, льда и атмосферных осадков.
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия.
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия.
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия.
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.
ГОСТ 27065-86 Качество вод. Термины и определения.
ГОСТ 29169-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой.
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.
ГОСТ Р 51592-2000 Вода. Общие требования к отбору проб.
РД 52.24.309-92. Организация и проведение режимных наблюдений за загрязнением поверхностных вод суши на сети Роскомгидромета.
Р 52.24.566-94 Рекомендации. Методы токсикологической оценки загрязнения пресноводных экосистем.
РД 52.44.2-94. Методические указания. Охрана природы. Комплексное обследование загрязнения природных сред промышленных районов с интенсивной антропогенной нагрузкой.
ТУ 6-89 5ж2.840.050. Флуориметр "Квант-7".
ТУ 3-3.1210 Микроскоп бинокулярный, стереоскопический с увеличением 3,6 - 100,1 марки МБС.
3 Термины и определения
В настоящем руководящем документе использованы следующие термины и определения:
3.1 биологическое тестирование: Оценка качества воды по ответным реакциям водных организмов, являющихся тест-объектами [по ГОСТ 27065 (СТ СЭВ 6184)].
3.2 биотест: Совокупность приемов получения информации о токсичности воды (донных отложений) на основе регистрации реакций тест-объекта.
3.3 тест-объекты: Используемые при биотестировании гидробионты. В настоящих документах инфузории Paramecium caudatum. (P 52.24.566).
3.4 острое токсическое действие (острая токсичность): Воздействие, вызывающее быструю ответную реакцию тест-объекта.
3.5 фильтрационная активность тест-объекта: Количественная характеристика скорости поглощения пищи тест-объектами. В настоящих документах - инфузории Paramecium caudatum.
3.6 пробный корм: Искусственно приготовленная суспензия яркофлуоресцирующих пластиковых микрочастиц, размерами, формой, а также числом частиц в единице объема, имитирующая естественный дрожжевой корм тест-организмов.
3.7 пробное кормление: Замена естественного корма тест-объекта (дрожжевых или бактериальных клеток) искусственно приготовленным пробным кормом, позволяющим количественно контролировать скорость потребления пищи тест-объектом.
3.8 экспозиция: Время, в течение которого тест-объект находится под воздействием исследуемого фактора. В зависимости от длительности экспозиции различают острое или хроническое токсическое действие (РД 52.24.635).
4 Общие положения
4.1 Для разработки унифицированных методов обнаружения опасных уровней загрязнения поверхностных вод суши в данном документе используется флуориметрический метод определения фильтрационной активности инфузорий Paramecium caudatum (РД 52.44.2, [2] - [4]). При этом под унификацией метода понимается:
а) возможность применения метода, в одном и том же варианте, как для контроля острой токсичности растворенных в воде загрязняющих веществ, так и для контроля острой токсичности загрязняющих веществ, сорбированных на взвешенных частицах;
б) возможность применения метода, в одном и том же варианте при использовании различных тест-объектов.
4.2 Метод основан на количественной оценке реакции биотеста с помощью флуориметрического измерения концентрации пробного корма в опытной и контрольной серии. В роли тест-объекта могут быть использованы гидробионты-фильтраторы, добывающие пищу путем фильтрации её из окружающей водной среды. В этом случае загрязняющие вещества, растворенные в воде попадают внутрь организма обычным путем через систему дыхания, а загрязняющие вещества сорбированные на взвешенных частицах попадают в пищеварительную систему тест-организмов и обнаруживаются по своему воздействию на фильтрационную активность тест-орглнизмов. Одним из наиболее удобных тест-объектов являются повсеместно распространенные свободноживущие инфузории Paramecium caudatum, включенные в списки унифицированных методов стран СЭВ в качестве тест-организмов.
5 Сущность метода
5.1 Метод тестирования острой токсичности основан на сравнении величин фильтрационной активности тест-организмов в опыте и контроле, выявляемой в результате пробного кормления.
5.2 Оценку острой токсичности производят путем сопоставления результатов действия тестируемой и контрольной воды на инфузорий после экспозиции длительностью до 6 ч.
5.3 В качестве пробного корма используют суспензию в культуральной среде микроскопических пластиковых микросфер, приготовленных из яркофлуоресцирующих инертных материалов, размерами и формой, имитирующих природный корм тест-объекта (дрожжевые клетки).
5.4 Критерием наличия токсического воздействия тестируемой воды на тест-организмы является статистически значимое изменение фильтрационной активности, измеряемой по остаточной флуоресценции культуральной жидкости у опытных и контрольных организмов после пробного кормления.
5.5 Длительность пробного кормления инфузорий составляет 30 мин, после чего опытные и контрольные организмы отлавливают и удаляют, а интенсивность флуоресценции опытной и контрольной культуральных сред измерить на флуориметре "Квант-7".
6 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы
6.1 Флуориметр "Квант-7" по ТУ 6-89 5ж2.840.050
6.2 Микроскоп бинокулярный стереоскопический с увеличением 3,6 - 100,1 марки МБС, по ТУ 3-3.1210
6.3 Стаканы химические тип В, Н по ГОСТ 25336, вместимостью 100 ![]()
6.5 Пипетки градуированные не ниже 2 класса точности исполнения 2 по ГОСТ 29227, вместимостью 1 ![]()
и 5 ![]()
6.6 Пробирки (с пришлифованными пробками), по ГОСТ 1770, вместимостью 10 ![]()
6.7 Стеклянные капилляры (см. п. 10.2)
6.9 Суспензия яркофлуоресцирующих пластиковых микрочастиц, размерами, формой частиц, а также числом частиц в единице объема, имитирующая естественный дрожжевой корм тест-организмов (производится Гидрохимическим институтом Росгидромета).
8 Требования к технике безопасности и квалификации персонала
8.1 При отборе проб и биотестировании загрязненных поверхностных вод суши необходимо соблюдать правила, утвержденные в установленном порядке инструкциями по работе на водных объектах и в химических лабораториях с вредными веществами.
8.2 Особых требований по экологической безопасности не предъявляют.
8.3 К работе по биотестированию допускают лиц, освоивших методы водной токсикологии, методы полевых и лабораторных исследований с помощью биотестов и прошедших инструктаж по технике безопасности.
9 Условия биотестирования
9.1 Биотестирование осуществляют в нестерильных условиях в помещении или боксе, в которых отсутствуют токсические пары или газы. Оптимальная температура тестируемой воды (![]()
)°С.
9.2 Посуда, используемая для отбора проб, культивирования инфузорий и тестирования должна быть тщательно вымыта, ополоснута дистиллированной водой и высушена в сушильном шкафу. Для мытья посуды используют хромовую смесь и бикарбонат натрия. Органические растворители и поверхностно-активные вещества для мытья посуды применять нельзя. Приготовленная таким образом посуда, а также материалы и реактивы запаивают в полиэтиленовые пакеты, которые вскрываются непосредственно перед употреблением предметов на месте работы.
9.3 Подготовку к работе и поверку флуориметра осуществляют в соответствии с технической документацией на прибор.
10 Подготовка к биотестированию
10.1 Культуру инфузорий Paramecium caudatum используют в стадии стационарного роста, в связи с чем приготовление рабочей культуры осуществляют заранее за 5-7 дней до процедуры тестирования. Условия культивирования приведены в приложении А.
10.2 Стеклянные капилляры, необходимые для отлавливания инфузорий, готовят вручную из стеклянных трубочек диаметром 3-5 мм. При этом на пламени спиртовки трубки нагревают и вытягивают до меньшего диаметра 0,2 - 0,3 мм. После чего вытянутый кончик капилляра шлифуют наждачной бумагой (нулевкой) и оплавляют в пламени спиртовки
