Правила взятия образцов биоматериала для лабораторного обследования больных с симптомами менингита, а также контактных лиц (утв. Федеральным медико-биологическим агентством 10 июля 2013 г.)

Менингиты могут иметь как бактериальную этиологию (бактериальные менингиты), так и вирусную (серозные менингиты).

1. При менингитах бактериальных, вызванных Neisseria meningitidis (менингококк), Haemophilus influenzae (гемолитическая палочка) или Streptococcus pneumoniae (пневмококк) с диагностической целью необходимо исследовать:

1.1 образцы спинномозговой жидкости (СМЖ, ликвор) - обязательное исследование.

Определение показаний к проведению люмбальной пункции и ее выполнение осуществляется врачом-клиницистом в первые дни болезни.

1.2 мазки из ротоглотки - как дополнительное исследование в первые 3-4 дня от начала заболевания.

Получение отрицательного результата при исследовании мазка из ротоглотки не является диагностическизначимым и необходимо провести исследование образца СМЖ, ликвора в связи с широким распространением бессимптомного носительства этих возбудителей среди населения разных возрастных групп.

2. При менингитах, вызванных энтеровирусами, с диагностической целью необходимо исследовать не менее двух различных клинических образцов из ниже перечисленных:

2.1 образцы спинномозговой жидкости (СМЖ, ликвор) - обязательно,

2.2 материал из везикул (при их наличии),

2.3 образцы фекалий - две пробы фекалий отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней с интервалом 24-48 часов.

2.4. мазки из ротоглотки,

2.5 кровь (сыворотка и/или плазма). Пробы крови для иммунологического исследования берут в виде парных сывороток: первую отбирают как можно раньше после начала заболевания, вторую на 3-4 неделе в стадии реконвалесценции.

Параллельно кровь исследуется на наличие РНК вируса (кровь с ЭДТА), но следует помнить, что возбудитель в крови у больного циркулирует очень непродолжительное время.

3. Клинический материал, подлежащий исследованию от контактных с больным серозным или вирусным менингитом

Для обследования контактных с больным бактериальным менингитом достаточно исследовать только мазок из ротоглотки.

Для обследования контактных с больным менингитом вирусной этиологии можно исследовать мазок из ротоглотки и/или образцы фекалий.

Исследование клинического материала для определения наличия ДНК/РНК возбудителя проводится методом ПЦР в режиме реального времени.

4. Инструкция по правилам взятия клинического материала

Эффективность проведения лабораторного исследования зависит от правильного сбора соответствующих материалов и транспортировки их в лабораторию. Необходимо исключить контаминацию одной пробы от другой.

Для успешного лабораторного исследования необходимо проводить как можно более ранний отбор проб. Для отбора проб используются стерильные контейнеры, пробирки.

Пробы с отобранным материалом помещают в пластиковые мешки так, чтобы избежать протечек и повреждений. Все материалы должны сопровождаться соответствующими документами - направлением на исследование.

Транспортирование проб осуществляется в термоконтейнерах при температуре +2-8°С.

4.1. Спинномозговая жидкость (СМЖ, ликвор)

Взятие материала. Определение показаний к проведению люмбальной пункции и ее выполнение осуществляется в первые дни болезни врачом-клиницистом. СМЖ в количестве не менее 1 мл получают используя одноразовые иглы и одноразовые пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл.

Условия хранения до момента доставки в лабораторию:

- при температуре +2-8°С - в течение 1 суток;

4.2. Материал из везикул

Взятие материала. Перед взятием материала кожные элементы очищают ватным тампоном, смоченным спиртом, затем прокалывают их у основания стерильной иглой с одноразовым шприцем и отбирают содержимое. Для облегчения процедуры везикула может сдавливаться стерильным инструментом. Собранное содержимое помещают в одноразовые пластиковые пробирки объемом 1,5 или 2,0 мл. Рекомендуется проводить взятие материала из пяти элементов и исследовать их как единый образец.

Условия хранения до момента доставки:

- при температуре +2-8°С - в течение 1 суток;

4.3. Кровь (цельная, плазма)

Взятие материала. Для получения плазмы забор крови проводят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки - 6% ЭДТА) или одноразовым шприцем в пластиковые пробирки с цитратом натрия (3,8%-ный раствор цитрата натрия в соотношении 1:9). Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом (в противном случае кровь свернется, и выделение ДНК/РНК станет невозможным). Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Условия хранения до момента доставки:

Образцы цельной крови:

- при температуре 20-25°С - в течение 2 часов;

- при температуре +2-8°С - в течение 12 часов с момента взятия материала для качественного определения нуклеиновых кислот;

Недопустимо замораживание образцов цельной крови!!!

Образцы плазмы;

- при температуре +2-8°С - в течение 5 суток;

4.4. Образцы фекалий

Взятие материала. Забор образцов фекалий производится из одноразовых подгузников (дети младшего возраста) или из одноразовой емкости (чашка Петри, одноразовый пластиковый пакет и т.д.), помещенной в судно для дефекации. При использовании одноразового подгузника, у детей с водянистой консистенцией фекалий для получения достаточного количества образца в подгузник перед использованием помещают ватный тампон. N.B. Не допускается забор образца фекалий непосредственно из судна для дефекации или другой емкости многократного использования (вне зависимости от методов их дезинфекции). Забор образца фекалий производят одноразовым ватным зондом (предоставляется лабораторией). Забираемый материал должен полностью пропитать рабочую часть зонда. При возможности зондом собираются сгустки материала. После забора материала зонд помещается в пробирку с транспортной средой и оставляется в ней. N.B. При заборе материала не допускается контаминация им наружной поверхности пробирки и одноразовых перчаток. При возникновении контаминации производится замена перчаток и повторное взятие материала.

Условия хранения.

Образцы нативных фекалий

- при температуре +2-8°С - в течение 3 суток;

-#

4.5. Мазки из ротоглотки

Взятие материала. Мазки берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в одноразовую пластиковую пробирку объемом 1,5 или 2,0 мл. со специальной транспортной средой (или физ. раствором) и аккуратно обламывают пластиковый стержень на расстоянии не более 0,5 см от рабочей части, оставляя рабочую часть зонда с материалом в транспортной среде. Пробирку плотно закрывают крышкой.

Условия хранения.

- при температуре +2-8°С - в течение 3 суток;

- Используемая литература:

- МУ 3.1.1.2130-06 "Энтеровирусные заболевания: клиника, лабораторная диагностика, эпидемиология. Профилактика";

- Методическое пособие "Взятие, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики" ФГБУН ЦНИИЭ, 2012 г.;

- Информационное письмо по правилам забора, хранения и предварительной обработке образцов клинического материала при обследовании на энтеровирусную инфекцию, ассоциированную с энтеровирусом 71 типа (EV71);

- Инструкции к наборам реагентов для определения ДНК/РНК инфекционных агентов методом ПЦР в реальном времени.

Материал подготовили:

Врач-вирусолог - Авдеенко Т.Ф.

Врач-вирусолог- Городилова Н.Б.

Заместитель главного врача, руководитель ИЛЦ, дмн

О.А. Тарасенко