Откройте актуальную версию документа прямо сейчас
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.
Государственный стандарт качества лекарственного средства
Общая фармакопейная статья ОФС
"Определение специфической активности аллергенов in vivo методом кожных проб"
Вводится впервые
Определение специфической активности аллергенов in vivo - это метод кожного тестирования (прик-тест, скарификационые, внутрикожные пробы) медицинских иммунобиологических препаратов - аллергенов (водно-солевых растворов), полученных из материалов природного происхождения, вызывающих развитие аллергического заболевания. В основе метода лежит выявление специфической реакции кожи у лиц чувствительных к соответствующему (тестируемому) аллергену, соотнесенной с кожной реакцией на гистамин.
Принцип метода постановки кожных проб
Метод основан на способности кожи человека, сенсибилизированного к определенному природному аллергену, реагировать на введение соответствующего лекарственного препарата аллергена, развитием местной аллергической реакции немеленого типа в виде волдыря, гиперемии (накожные пробы) или папулы, гиперемии (внутрикожные пробы). В основе механизма данной реакции лежит процесс связывания вводимого в кожный покров сенсибилизированного человека аллергена со специфическим IgE антителами, фиксированные на поверхности клеток-мишеней, что приводит к освобождению из них медиаторов с последующим их действием на клетки-мишени кожи.
Аллергические кожные реакции представляют собой проявление местной аллергии и являются отражением общей сенсибилизации организма.
Препараты аллергенов
Оценки специфической активности in vivo подлежат:
- Аллергены пыльцевые для диагностики и лечения (луговых трав, сорных трав, деревьев и кустарников, культурных злаков);
- Аллергены жилых помещений для диагностики и лечения или только для диагностики (из домашней пыли, микроклещей домашней пыли - Dermatophagoides pteronyssinus, Dermatophagoides farinaе, пера подушки, библиотечной пыли, дафний, отдельных грибов (Penicillium, Mucor, Rhizopus, Aspergillus).
- Аллергены эпидермальные для диагностики (из шерсти животных: собаки, кошки, овцы, кролика, морской свинки, перхоти лошади, волос человека и др.).
- Аллергены пищевые для диагностики (из молока, рыб, мяса курицы, мяса утки, говядины, целого куриного яйца, желтка куриного яйца, белка куриного яйца, хлеба, круп, фруктов и др. пищевых продуктов).
- Аллергены инфекционные (бактериальные).
Диагностические и лечебные аллергены представляют собой водно-солевые растворы белково-полисахаридных комплексов, которые стандартизуются по содержанию в 1 мл препарата единиц белкового азота, (PNU protein nitrogen unit. 1PNU - международная единица, принятая для выражения концентрации белкового азота, равная содержанию 0,00001 мг белкового азота), а специфическая активность устанавливается по результатам кожного тестирования у чувствительных к этому аллергену пациентах.
Аллергены пыльцевые, бытовые, эпидермальные, пищевые содержат от 7500 - 12500 PNU/ мл.
Аллергены микроклещей домашней пыли - от 3000 до 8000 PNU/мл.
Грибковые аллергены - от 750 до 1250 PNU/мл.
Аллергены, предназначенные для диагностики и лечения выпускаются в комплекте с тест-контрольной (фосфатно-солевой буферный раствор, рН от 6,75 до 7,25) и разводящей жидкостью (фосфатно-солевой буферный раствор, рН от 6,8 до 7,2), аллергены для диагностики - в комплекте с тест-контрольной жидкостью.
Область применения
Метод применяется:
- при определении специфической активности производственных серий аллергенов;
- при создании биологически стандартизованных эталонных препаратов аллергенов (в качестве биологической активности при создании стандарта принимается такая активность, которая вызывает появление, у чувствительность к данному аллергену лиц волдыря определенной величины);
- при диагностики аллергических заболеваний, при проведении аллерген-специфической иммунотерапии с целью выявления аллергена, контакт с которым вызывает заболевание.
Условия проведения оценки специфической активности аллергенов in vivo методом кожных проб
Перед проведением оценки специфической активности аллергена in vivo методом кожных проб, последний проходит лабораторный контроль по показателям (физические свойства, биохимические показатели, стерильность, аномальная токсичность и др.) согласно требованиям нормативной документации на данный препарат.
Для постановки кожных проб проводят подбор 5 -10 пациентов, в возрасте от 18-60 лет, имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергену подтвержденную данными анамнеза, клиническими проявлениями заболевания, а также предварительными результатами кожного тестирования (от "+" до "++++").
Параллельно кожные пробы с тестируемым аллергеном ставят 5 лицам, не имеющих повышенную чувствительность к указанному аллергену.
Оценку специфической активности аллергенов методом кожных проб проводит врач-аллерголог только в аллергологическом кабинете или аллергологическом отделении больницы, оснащенными препаратами противошоковой терапии.
Противопоказания при постановки кожных проб
- обострение аллергического заболевания;
- острые и хронические кожные заболевания;
- острые инфекционные заболевания;
- хронические заболевания в стадии декомпенсации;
- обострение психических заболеваний;
- онкологические заболевания;
- иммунопатологические состояния и иммунодефициты;
- туберкулез любой локализации в период обострения;
- беременность и лактация;
- сердечно-сосудистые заболевания при которых возможны осложнения;
- при использовании адреналина;
- любые формы гормональной терапии, терапии антигистаминными препаратами, бронхоспазмалитиками, бета-адреноблокаторами.
Дополнительные требования при проведении кожных проб
Кожные пробы проводят не ранее, чем через:
- 1 неделю после постановки туберкулиновой пробы;
- 2 недели после применения инактивированных вакцин и антигистаминных препаратов;
- 4 недели после вакцинации живыми вакцинами;
- 8 недель после применения вакцины БЦЖ.
После проведения кожного тестирования пациент должен находиться под медицинским наблюдением не менее 60 минут.
Техника постановки кожных проб.
Материалы:
- Тестируемая серия аллергена - специфическая реакция кожи (наличие волдыря, гиперемии);
- Тест-контрольная жидкость - отрицательный контроль (отсутствие волдыря, гиперемии);
- Гистамин 0.01% раствор - положительный контроль (обязательное наличие волдыря, гиперемии);
- Стерильные одноразовые скарификаторы;
- Стерильные одноразовые инъекционные иглы;
- Шприцы одноразовые на 1 или 2 мл;
- Шприцы одноразовые туберкулиновые;
- Спирт этиловый 70°;
- Вата медицинская гигроскопическая.
Примечание. Приготовление 0,01% раствора гистамина:.0,01% раствор гистамина готовят разведением гистамина дигидрохлорида 0,1% - 1 часть и 9 частей натрия хлорида изотонического 0,9% раствора для инъекций. Срок годности 0,01% раствора гистамина - в течение 6 ч. с момента приготовления.
При постановке скарификационной пробы аллерген, тест-контрольную жидкость, 0,01% раствор гистамина набирают с соблюдением всех правил асептики в маркированные шприцы вместимостью 1 или 2 мл и наносят по 1 капле (0.1 мл препарата) на дезинфицированную 70° этиловым спиртом кожу внутренней поверхности предплечья на расстоянии 30-40 мм друг от друга. Стерильными скарификаторами или инъекционными иглами, индивидуально для каждого больного и для каждого препарата, наносят через капли препаратов царапины длиной 5 мм.
При постановке прик-теста (тест-укол) с помощью отдельных стерильных шприцев капли аллергена, тест-контрольной жидкости, гистамина наносят на кожу внутренней поверхности предплечья на расстоянии 30-40 мм друг от друга. Через каждую каплю инъекционными иглами индивидуальными для каждого больного и для каждого препарата производят укол в кожу. При этом иглу проводят через капли нанесенных растворов под углом 45 и прокалывают кожу таким образом, чтобы не выступила кровь, затем иглу вынимают, слегка приподнимая кожу.
Реакцию кожи при проведении скарификации и постановки прик-теста учитывают через 15-20 мин и регистрируют согласно прилагаемой схеме (реакция немедленного типа). Размеры волдыря измеряют масштабной полистироловой линейкой (мм). Размер волдыря определяют измерением максимального диаметра.
Реакция кожи на гистамин должна быть положительной. При отрицательной реакции кожи на гистамин, пробу с аллергеном не учитывают.
Реакция кожи на тест-контрольную жидкость должна быть отрицательной. При положительной реакции кожи на тест-контрольную жидкость, пробу с аллергеном не учитывают.
Кожную реакцию на аллерген учитывают согласно прилагаемой схеме.
Время учета реакции кожи через 15-20 мин после постановки проб.
Схема учета накожных реакций
Оценки реакции |
Размер и характер реакции |
|
Отрицательная (-) |
|
Отсутствие волдыря, гиперемии |
Положительная |
один крест (+) |
Волдырь 2-3 мм, гиперемия |
Положительная |
два креста (++) |
Волдырь 4-5 мм, гиперемия |
Положительная |
три креста (+++) |
Волдырь 6-10 мм, гиперемия или волдырь 6-10 мм, гиперемия с псевдоподиями, гиперемия. |
Положительная |
четыре креста (++++) |
Волдырь более 10 мм гиперемия или волдырь более 10 мм с псевдоподиями, гиперемия |
Внутрикожные пробы
Аллерген, тест-контрольная жидкость, раствор гистамина набирают в маркированные туберкулиновые стерильные шприцы и вводят по 0,02 мл препарата в дезинфицированную спиртом кожу на расстоянии 40-50 мм друг от друга. При этом кожу растягивают и вводят иглу под углом 45 срезом вниз. Срез иглы должен полностью введен в кожу. В месте введения должна образовываться папула размером до 3 мм.
Примечание. Из шприца необходимо удалять пузырьки воздуха, т.к. образование волдыря при внутрикожном введении воздуха можно принять за положительную реакцию. Нарушение техники проведения внутрикожных проб, например, внутрикожное введение более 0.02 мл раствора приводит к ложно положительным реакциям
Реакцию кожи на тест-контрольую жидкость и раствор гистамина оценивают по тем же критерия, как и при постановке накожных тестов.
Реакцию кожи на аллерген учитывают согласно прилагаемой схеме.
Схема учета внутрикожных реакций
Оценка реакции |
Размеры и характер реакции |
Отрицательная (-) |
Папула не более 3 мм |
Положительная (+) |
Папула 4-8 мм, гиперемия |
Положительная (++) |
Папула 9-15 мм, гиперемия |
Положительная (++++) |
Папула более 15 мм, гиперемия, или папула более 15 мм с псевдоподиями, гиперемия |
Результат внутрикожной пробы может проявиться через 6-24 час - появится инфильтрат ярко-розового цвета с острыми краями, окруженный более бледной каймой. Это соответствует иммунной ответной реакции Артюса; она наблюдается в случае грибковых и бактериальных аллергенов; через 24-48 часов наблюдается бледно-розовая инфильтрация с тонкой папулезной поверхностью, которая соответствует клеточной иммунной реакции.
Критерии оценки специфической активности лекарственных препаратов аллергенов.
Аллерген считают специфически активным при выявлении путем кожного тестирования специфической кожной реакции в виде волдыря, гиперемии (положительная проба) не менее чем у трех из пяти лиц, имеющих повышенную чувствительность к тестируемому аллергену (опытная группа).
В контрольной группе лиц в составе пяти человек, не имеющих повышенной чувствительности к тестируемому аллергену, не должно быть зарегистрировано ни одной положительной реакции кожи (отрицательная проба).
При регистрации положительных реакций у меньшего количества лиц опытной группы проводят постановку кожных проб дополнительно еще у 5 пациентов. Положительные реакции должны быть выявлены не менее, чем у пяти из десяти лиц опытной группы.
Препарат не будет считаться специфически активным, если положительная реакция кожи зарегистрирована менее, чем у 5- из 10- лиц опытной группы или, если выявлена хотя бы одна положительная реакция кожи у лиц контрольной группы.
Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.