Межгосударственный стандарт ГОСТ 31506-2012 "Молоко и молочные продукты. Определение наличия жиров немолочного происхождения" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2012 г. N 918-ст) (с изменениями и дополнениями)

Межгосударственный стандарт ГОСТ 31506-2012
"Молоко и молочные продукты. Определение наличия жиров немолочного происхождения"
(введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2012 г. N 918-ст)

С изменениями и дополнениями от:

23 ноября 2015 г.

Milk and milk products. Determination of non-milk fats

Дата введения* - 1 июля 2013 г.

Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты (далее - продукт) и устанавливает метод определения наличия жиров немолочного происхождения путем сравнения формы кристаллов стеринов в жировой фракции продукта микроскопическим методом.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, введенным в действие приказом Росстандарта от 23 ноября 2015 г. N 1944-ст, в раздел 2 внесены изменения, вступающие в силу с 1 мая 2016 г.

См. текст раздела в предыдущей редакции

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79** Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3622-68 Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию

ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 5815-77 Реактивы. Ангидрид уксусный. Технические условия

ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:

3.1 микроскопические методы: Методы, основанные на исследовании различных объектов с помощью микроскопа.

4 Сущность метода

Метод основан на сравнении формы кристаллов стеринов в жировой фракции анализируемого продукта со сравнительным образцом.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, введенным в действие приказом Росстандарта от 23 ноября 2015 г. N 1944-ст, в раздел 5 внесены изменения, вступающие в силу с 1 мая 2016 г.

См. текст раздела в предыдущей редакции

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

Микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение .

Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Стекла покровные по ГОСТ 6672.

Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности г.

Термостат, обеспечивающий поддержание температуры °С.

Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание температуры °C и °С.

Термометр лабораторный нертутный стеклянный по ГОСТ 28498 диапазонном измерений от 0°C до 100°C, ценой деления шкалы 1°C.

Термометр лабораторный ртутный стеклянный типа Б по ГОСТ 28498 с диапазоном измерений от 0°C до 100°C, с ценой деления шкалы 1°C.

Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.

Баня водяная с регулируемым обогревом.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

Устройство перемешивающее лабораторное.

Миксер.

Колба мерная 1-100-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-500-2 по ГОСТ 1770.

Стаканы В-1-50, В-1-200 по ГОСТ 25336.

Воронки В-56-80, В-75-110 по ГОСТ 25336.

Бутыли пластиковые или стеклянные вместимостью 500 с завинчивающимися крышками.

Бумага фильтровальная лабораторная диаметром 15 см, обезжиренная по ГОСТ 12026 ФБ-II, ФС-II.

Палочки стеклянные оплавленные.

Щипцы металлические.

Терка мелкая.

Холодильник бытовой электрический любого типа, обеспечивающий поддержание температуры в холодильной камере °C.

Центрифуга со скоростью вращения не менее 5000 об/мин.

Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962, высшей очистки.

Пентан, ч. д. а., массовой долей основного вещества не менее 90%.

Хлороформ, х. ч., массовой долей основного вещества не менее 90%.

Натрий сернокислый, х.ч., по ГОСТ 4166.

Медь (II) сернокислая 5-водная, х.ч., по ГОСТ 4165, раствор массовой концентрации 70 .

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

Баня глицериновая, обеспечивающая поддержание температуры до 150°С с точностью до 1,0°С.

Пипетка 1-1-2-5 по ГОСТ 29227.

Колба Кн-1-25-14/23, Кн-1 -50-24/29, Кн-1-500-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Колба с тубусом (Бунзена) 2-500-29/32 по ГОСТ 25336.

Воронка Бюхнера 3 ГОСТ 9147.

Воронка ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.

Воронка ВФ-3-100, с диаметром пор 80 мкм, ХС по ГОСТ 25336.

Насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Холодильник ХШ-1-200-29/32 ХС по ГОСТ 25336.

Ангидрид уксусный по ГОСТ 5815, ч.д.а.

Дигитонин, содержание основного вещества не менее 90%, по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, спиртовой раствор массовой концентрации 10 .

Калия гидроокись по ГОСТ 24363, х.ч., раствор с массовой долей 40%.

Эфир диэтиловый, ч.д.а., по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.

6 Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 3622, ГОСТ 13928 и ГОСТ 26809 с дополнением.

В случае если анализ не может быть проведен сразу после отбора проб, их рекомендуется хранить не более 10 сут в холодильнике при температуре не выше °C.

7 Порядок подготовки к проведению измерений

7.1 Подготовка пробы продукта

Для выделения жира отбирают пробу продукта, которая должна обеспечить выделение из нее не менее 30 г молочного жира.

7.1.1 Сырое молоко и сырые сливки, питьевое молоко и питьевые сливки

Пробу помещают в центрифужные пробирки или стаканы и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин.

При этом продукт разделяется на два слоя: верхний - жировой, содержащий почти весь жир, и нижний - белковый. Центрифужные емкости с расслоившимся продуктом охлаждают до температуры °C для перевода жира в твердое состояние. Верхний твердый слой жира осторожно переносят в чистый стакан вместимостью 50 , помещают в термостат при температуре °C и выдерживают до прозрачного состояния. Затем жир фильтруют через сухой складчатый фильтр. Жир должен быть прозрачным.

7.1.2 Сухие молочные продукты

В стакан вместимостью 200 взвешивают г продукта и добавляют 100 дистиллированной воды температурой °C. Смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой до однородной консистенции и оставляют на 10-15 мин для набухания белков. Далее вносят безводный сульфат натрия и размельчают с помощью миксера до тех пор, пока не образуется зернистая масса.

7.1.3 Концентрированное молоко, сгущенное молоко и мороженое

В стакан вместимостью 200 взвешивают г продукта. Мороженое предварительно освобождают от глазури и других отделяемых компонентов. В пробу продукта добавляют 100 дистиллированной воды, нагревают смесь на водяной бане до температуры 75°C, добавляют 15 раствора сульфата меди (II) и продолжают нагревать до получения сгустка, который фильтруют через фильтровальную бумагу, промывают его теплой водой до обесцвечивания фильтрата. Осторожно сливают осадок, перемешивают его с безводным сульфатом натрия до получения зернистой массы.

7.1.4 Жиры, масло и пасты масляные

В стакан вместимостью 100 помещают г продукта и выдерживают в термостате при температуре °C до разделения продукта на жир и воду. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40°C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.

7.1.5 Сметана и продукты на ее основе

В пластиковую или стеклянную бутыль вместимостью 500 помещают пробу продукта, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. При этом продукт разделяется на два слоя: верхний - жировой, содержащий почти весь жир, и нижний - белковый. Центрифужные емкости с расслоившимся продуктом нагревают до температуры °C. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40°C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.

7.1.6 Творог и творожные продукты

В пластиковую или стеклянную бутыль вместимостью 500 помещают г продукта и добавляют 300 смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 2:1 (по объему). Бутыль закрывают крышкой, закрепляют на лабораторном перемешивающем устройстве и перемешивают в течение 0,5 - 1,0 ч.

Полученный экстракт фильтруют в стакан вместимостью 200 через сухой складчатый фильтр. Для отделения жировой фракции стакан помещают на 1 ч на водяную баню или в сушильный шкаф при температуре °C.

7.1.7 Сыр и сырные продукты

Пробу продукта измельчают в ступке с раствором безводного сульфата натрия до получения зернистой массы.

7.1.8 Из пробы продукта, подготовленной по 7.1.1 - 7.1.7, пентаном экстрагируют жир. Пентан удаляют выпариванием на водяной бане при температуре °C до получения прозрачного жира. Не допускают выплескиваний и кипения.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, введенным в действие приказом Росстандарта от 23 ноября 2015 г. N 1944-ст, раздел 7 дополнен подразделом 7.2, вступающим в силу с 1 мая 2016 г.

7.2 Приготовление раствора калия гидроокиси с массовой долей 40%

В мерную колбу вместимостью 100 помещают г калия гидроокиси, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора в бутыли из темного стекла при температуре °С - не более 1 мес.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, введенным в действие приказом Росстандарта от 23 ноября 2015 г. N 1944-ст, раздел 7 дополнен подразделом 7.3, вступающим в силу с 1 мая 2016 г.

7.3 Приготовление спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10

В мерную колбу вместимостью 100 помещают г дигитонина и растворяют в небольшом количестве этилового ректификованного спирта. Объем раствора доводят этиловым ректификованным спиртом до метки.

Срок хранения раствора в бутыли из темного стекла при температуре °С - не более 1 мес.

8 Условия проведения измерений

При проведении измерений в лаборатории необходимо соблюдать следующие условия:

- температура окружающего воздуха	... °C;
- относительная влажность воздуха	... от 30% до 80%;
- атмосферное давление	... от 84 до 106 кПа.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, введенным в действие приказом Росстандарта от 23 ноября 2015 г. N 1944-ст, раздел 9 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 мая 2016 г.

См. текст раздела в предыдущей редакции

9 Проведение измерений

9.1 В коническую колбу вместимостью 500 помещают от 100 мг до 15 г жира, выделенного в соответствии с требованиями раздела 7, добавляют 10 раствора гидроокиси калия с массовой долей 40% и 20 этилового спирта.

Присоединяют к колбе воздушный холодильник и нагревают смесь на водяной бане до получения прозрачного раствора, Затем продолжают нагревание еще 30 мин или 1 ч.

9.2 Добавляют 60 дистиллированной воды, затем 180 этилового спирта, нагревают смесь на водяной бане до 40°С. Добавляют 30 спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 , перемешивают вращательными движениями и охлаждают при температуре 5°С в течение 12 ч,

9.3 Собирают выделившийся дигитонин стерина, пропуская полученный раствор через фильтрующую воронку с диаметром лор 80 мкм и фильтровальную бумагу,

Промывают осадок на фильтре водой температурой 5°С до прекращения пенообразования, затем промывают последовательно с 25-50 этилового спирта и с 25-50 диэтилового эфира.

9.4 Полученный осадок вместе с фильтровальной бумагой помещают в сушильный шкаф и высушивают при температуре °С в течение 10-15 мин. Сухой остаток на фильтре является дигитонином стерина.

9.5 В коническую колбу вместимостью 25 помещают мг дигитонина стерина, добавляют 1 уксусного ангидрида, нагревают на глицериновой бане при температуре 130°С - 145°С до растворения дигитонина, после чего нагревание продолжают еще 2 мин. Затем раствор охлаждают до 80°С.

Не используют прямой нагрев раствора, так как возможно разбрызгивание.

9.6 К охлажденному до 80°С раствору (9,5) добавляют 4 этилового спирта, перемешивают, слегка нагревают для растворения стерил ацетата, который может кристаллизоваться.

9.7 Теплый раствор фильтруют через бумажный фильтр средней фильтрации, промывая этиловым спиртом. Полученный фильтрат постепенно нагревают до слабого кипения, В кипящий раствор аккуратно по каплям из пипетки с одновременным энергичным встряхиванием добавляют 1,0-1,5 дистиллированной воды до такого состояния, пока стерил ацетат не начнет выпадать в осадок, но при этом еще возвращаясь в раствор (до насыщенного раствора). В образующийся осадок стерил ацетата добавляют несколько капель этилового спирта, Охлаждают на воздуха 2 ч и затем окончательно в холодной воде 30 мин.

9.8 Выделившийся стерил ацетат фильтруют через фильтровальную бумагу высокой фильтрации, применяя фильтрующее устройство (колба Бунзена и воронка Бюхнера) с водоструйным насосом, и промывают кристаллы 1 этилового спирта (80% об.).

9.9 Выделившиеся кристаллы для повторного растворения нагревают с 1 этилового спирта. Охлаждают 15 мин на воздухе, затем 5 мин в холодной воде. Выкристаллизовавшийся стерил ацетат фильтруют по 9,8.

9.10 При необходимости (для лучшей очистки) рекристаллизацию и фильтрацию повторяют 3-4 раза.

9.11 В коническую колбу вместимостью 25 помещают 10 мг стерил ацетата, добавляют 1 этилового спирта, аккуратно перемешивают и добавляют 1-2 капли раствора гидроокиси калия с массовой долей 40%.

9.12 Раствор нагревают на кипящей водяной бане до начала закипания и растворения стерил ацетата.

9.13 Добавляют 10 дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 , добавляют 25 диэтилового эфира и встряхивают. После разделения смеси водный слой удаляют.

9.14 Оставшийся слой промывают тремя порциями по 5 дистиллированной воды. Затем переносят в коническую колбу вместимостью 50 и выпаривают насухо.

9.15 Остаток растворяют в 10 этанола (80% об.). Каплю раствора помещают на предметное стекло для микроскопии, равномерно распределяя ее по поверхности, закрывают покровным стеклом, выдерживают до начала кристаллообразования по краям предметного стекла, переворачивают и смотрят под микроскопом по мере кристаллизации при линейном увеличении в 200 раз. Формы кристаллов стеринов оценивают визуально, сравнивая их со сравнительным образцом.

Формы сравнительных образцов представлены в приложении А.

10 Обработка результатов измерений

Если при визуальном осмотре под микроскопом кристаллы стеринов имеют форму параллелограмма с тупым углом 100° (см. приложение А), что характерно для холестерина (сholesterol), то считают, что анализируемая проба не содержит растительного жира.

Если при визуальном осмотре под микроскопом хотя бы отдельные кристаллы стеринов имеют удлиненную шестиугольную форму с вершиной 108° (см. приложение А), характерную для растительных стеринов (phytosterol), или кристаллы имеют перевернутый угол ("ласточкин хвост") (см. приложение А), типичный для смеси холестерина и растительных жиров, то считают, что анализируемая проба содержит растительный жир.

11 Требования безопасности

При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:

- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005;

- требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;

- требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

_____________________________

* Дату введения стандарта в действие на территории государств устанавливают их национальные органы по стандартизации.

** На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.