Методические указания "Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнений кожи" (утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 1 ноября 1979 г. N 2102-79)

Методические указания
"Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнений кожи"
(утв. заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 1 ноября 1979 г. N 2102-79)

I. Общие положения

1.1. В связи с широкой химизацией народного хозяйства, интенсивным использованием новых химических веществ, увеличением масштабов производства возросла опасность контакта и проникновения химических веществ через кожные покровы.

Каждое четвертое вещество, содержание которого нормировано в воздухе рабочей зоны имеет пометку "опасно при поступлении через кожу". Однако, до настоящего времени нет единого документа, который позволил бы:

- получать сравнимые данные по оценке реальной опасности возникновения острых и хронических проявлений воздействия химических веществ на кожные покровы в экспериментальных и производственных условиях;

- учесть возможность интоксикации при поступлении вредного вещества через кожу при клинико-гигиенической корректировке предельно допустимых концентраций веществ в воздухе рабочей зоны, особенно в тех случаях, когда концентрации вредных веществ не превышают гигиенических нормативов;

- регламентировать загрязнение кожных покровов работающих веществами, способными проникать через кожу;

- обосновать необходимость технологических и специальных защитных мероприятий, направленных на полное или максимальное исключение контакта кожных покровов работающих с вредными веществами.

1.2. Настоящие указания позволяют унифицировать методы и подходы к изучению местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия химических соединений и к установлению гигиенического норматива содержания их на кожных покровах.

1.3. Предельно допустимый уровень загрязнений кожи (ПДУ) устанавливается для всей поверхности кожных покровов. В отдельных случаях при загрязнении только кистей рук - нормативы устанавливаются для кистей рук. При этом необходимо подтверждение отсутствия загрязнений кожи различных участков тела работающих по результатам смывов.

1.4. Методические указания предназначены для специалистов научно-исследовательских институтов, врачей токсикологических лабораторий санитарно-эпидемиологических станций. С целью контроля за соблюдением ПДУ загрязнений кожи - для врачей СЭС и санитарно-химических лабораторий промышленных предприятий.

1.5. Гигиеническая регламентация загрязнения кожных покровов вредными химическими веществами позволит научно обосновать оздоровительные, лечебно-профилактические мероприятия по профилактике профессиональной заболеваемости и разработать эффективные средства индивидуальной защиты.

2. Общие требования к изучению местного раздражающего и кожно-резорбтивного действия химических веществ

2.1. Изучение местного раздражающего действия и резорбции вещества через кожу должно проводиться:

- для всех новых, внедряемых в производство химических соединений;

- для химических соединений, широко применяемых в промышленности, но не изученных при воздействии на кожные покровы.

Изучению подлежат вещества, находящиеся в жидком или твердом агрегатном состоянии. Устанавливать ПДУ для газообразных веществ нецелесообразно, т.к. соблюдение ПДК вещества в воздухе рабочей зоны предохраняет организм от токсического воздействия при проникновении его через кожные покровы.

2.2. Перед проведением исследований необходим тщательный анализ физико-химических свойств соединений, параметров токсичности при других путях поступления вещества, некоторых специальных параметров (липофильность, коэффициент распределения октанол (вода, масло/вода), особенностей технологического процесса для построения рабочей гипотезы о наличии и степени раздражающего эффекта, возможности проникновения через кожу, особенностях его распределения и прогнозирования токсичности.

2.3. Изучение воздействия химических веществ на кожные покровы с последующим обоснованием гигиенических нормативов проводится в 4 этапа:

I. Исследование и оценка местного действия.

II. Ориентировочная оценка кожно-резорбтивного действия.

III. Количественная оценка кожной резорбции с установлением:

а) среднесмертельной дозы - и среднеэффектного времени гибели животных - ;

б) порога и зоны острого действия;

в) коэффициента кумуляции - ;

г) порога и зоны хронического действия;

д) предельно допустимого уровня загрязнения кожи - ПДУ.

IV. Клинико-гигиеническое обоснование предельно допустимого уровня загрязнений кожи.

2.4. Выбор животных.

2.4.1. В качестве подопытных животных используются белые крысы с исходной массой 180-200 г, мыши (18-22 г), морские свинки (200-300 г), кролики (2,0-3,0 кг). Эксперимент проводят не менее, чем на двух видах животных, обязательными являются опыты на белых крысах.

Для изучения местного раздражающего действия в острых опытах кролики должны быть породы "Шиншилла", морские свинки - светлой масти.

2.4.2. Количество животных в группе не менее 8-10 особей. Среди животных одной группы максимальная разница в массе должна составлять не более 10%,

2.5. Подготовка животных к эксперименту.

2.5.1. Участок аппликации должен составлять 5% общей поверхности кожи животных, что соответствует 2/3 хвоста у крыс и мышей, или участку кожи на спине крыс 4х4 см, кроликов 7х8 м, морских свинок 5х5 см.

2.5.2. За 1-2 дня до эксперимента тщательно выстригают ножницами или электромашинкой шерсть на спине. Применение депилятория недопустимо. В опыт пригодны животные с чистой) здоровой кожей без механических повреждений. Для изучения местного действия шерсть выстригают на симметричных участках спины по обе стороны от позвоночника, оставляя шерстяной покров между ними в 2 см. Правый бок служит для аппликации изучаемого вещества, левый - для контроля.

Для изучения кожной резорбции исследуют один бок животного, при этом контролем служит другая группа животных.

2.5.3. На время экспозиции для исключения слизывания вещества с кожи и поступления его через органы дыхания животных фиксируют, фиксация должна осуществляться наиболее физиологичным способом. С этой целью применяют специальные станки, либо полужесткие воротники (из резины, пластика или линолеума); морских свинок и белых крыс помещают в индивидуальные домики.

2.5.4. Время экспозиции - 4 часа для всех видов животных кроме мышей, контакт для которых составляет 2 часа. Время наблюдения после однократной и повторной аппликации - две недели.

2.6. Способ нанесения.

2.6.1. Исследуемое вещество наносится на 5% участок кожи животного в строго дозированных количествах из расчета на 1 кг массы тела и на 1  поверхности кожного покрова, равномерно распределяя его на всей поверхности.

2.6.2. Изучаемые соединения наносят, как правило, в нативном виде. В случае невозможности нанесения вещества perse, а также при наличии выраженного раздражающего либо токсического эффекта применяют разведение химического вещества. В качестве растворителей и разбавителей следует использовать дистиллированную воду, модельную среду, имитирующую потовую жидкость (приложение 1). При невозможности разведения вещества в перечисленных выше растворителях допускается применение растительного и вазелинового масла, этилового спирта и ацетона.

2.6.3. Нанесение вещества осуществляется открытым способом при температуре окружающей среды 18-24°С. Для летучих веществ (температура кипения до 160°С) следует использовать закрытый способ: компрессный метод Ведрова и Долгова, метод наклейки капсул и часовых стекол, применение камер КНИД-1 (приложение 2).

2.6.4. Контрольные животные должны находиться в одинаковых условиях. На соответствующие участки кожи им наносится растворитель или разбавитель, используемый в опыте. При изучении местного действия контролем служит противоположный участок кожи того же животного.

2.7. Способ смыва.

2.7.1. После окончания экспозиции необходимо остатки вещества удалить теплой водой с мылом, избегая грубых приемов и манипуляций, способных вызывать повреждение кожи.

2.7.2. Для установления количественных параметров токсичности при резорбции вещества через кожу необходимы сведения о количестве вещества, проникшего в организм. С этой целью следует определить остаточные количества вещества на коже. Определение вещества в смывах проводится сразу после экспозиции при установлении , и (не менее 8 раз в течение хронического эксперимента).

2.7.3. Общие методические требования к проведению смывов с кожи животных сводятся к использованию специфического избирательного химического метода как для проведения смыва, так и анализа его. Жидкость, применяемая для смыва должна:

- обладать способностью растворять искомые вещества;

- быть безвредной как для кожи, так и целостного организма (например, этиловый спирт, слабая кислота, слабая щелочь).

2.7.4. Ватным тампоном, смоченным в жидкости, проводится смыв с участка кожи, на котором проводили аппликацию вещества. Манипуляцию повторяют не менее 2-х раз; последним сухим - промокают участок кожи. Все тампоны складывают в стаканчик с притертой пробкой.

2.7.5. Для малолетучих соединений количество веществ, проникшее в организм рассчитывают по формуле: (I), где

С - количество вещества, проникшее в организм в мг/кг;

А - количество вещества, нанесенное на кожу в мг;

В - количество вещества в смыве в мг;

М - масса тела в г.

или (II), где

С - количество вещества, проникшее в организм в ;

А - количество вещества, нанесенное на кожу в мг;

В - количество вещества в смывах в мг;

S - участок аппликации вещества на коже в .

Для летучих соединений следует в формулы I и II вносить поправку на испарение (приложение N 3).

2.7.6. При наличии возможности определения вещества или его метаболитов в биосредах расчет проникшего в организм вещества производят, исходя из определяемых количеств.

3. Оценка местного действия химического вещества на кожу

3.1. Исследования проводят в острых (однократных) опытах. На кожу первоначально наносится 20  вещества. Реакция кожи регистрируется по окончании экспозиции, через 1 и 16 часов после однократной аппликации.

3.2. Функциональные нарушения кожи характеризуются появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры и скорости проницаемости эпидермиса, снижением сопротивления кожи постоянному электрическому току, уменьшением ее нейтрализующей способности. Способность оценки функционального состояния кожи по выраженности эритемы и величине отека изложены в приложении N 4. Степень нарушения кожного покрова зависит от выраженности раздражающих свойств химического вещества, его концентрации и длительности воздействия. Оценка выраженности раздражающих свойств при однократной аппликации проводится по следующей классификации:

Классы	Средний суммарный балл выраженности эритемы и величины отека	Выраженность раздражающего действия
1	2	3
0	0	Отсутствие раздражающего действия.
1	0,1-2,0	Слабораздражающее действие.
2	2,1-4,0	Умеренное раздражающее действие.
3	4,1-6,0	Выраженное раздражающее действие.
4	6,1-8,0	Резко выраженное раздражающее действие. Чрезвычайно сильное раздражающее действие.
5		Неразбавленное вещество вызывает некроз
6		50% раствор вызывает некроз.
7		25% раствор вызывает некроз.
8		10% раствор вызывает некроз.
9		5% раствор вызывает некроз.
10		Растворы менее 5% вызывают некроз.

3.3. Для веществ, относящихся к 1-4 классам по степени выраженности раздражающего действия на кожу, необходимо установление минимального разбавления, вызывающего раздражающий эффект у 50% животных (порог однократного действия вещества), и минимального разбавления, не вызывающего раздражения кожи.

Вещества, относящиеся к 5-10 классам, изучению кожно-резорбтивного действия не подлежат.

3.4. Для веществ, относящихся к 4-10 классам по раздражающему действию на кожу, ставится пометка "местное действие" (м.д.), т.е. опасны при попадании на кожу и слизистые оболочки глаз.

4. Оценка кожно-резорбтивного действия химических веществ

4.1. Ориентировочная оценка кожно-резорбтивного действия.

4.1.1. Задачей данного этапа исследований является получение альтернативного ответа о возможности развития интоксикации.

4.1.2. Проведение эксперимента следует начинать с погружения хвостов мышей и крыс в исследуемый продукт ("пробирочный" метод, приложение 6), так как это дает возможность оценить воздействие на кожу максимально возможных количеств вещества.

4.1.3. Нанесение вещества на кожу спины начинают с 20  при отсутствии местного раздражающего действия (класс 0). Для веществ 1-4 классов необходимо использовать минимальное разбавление вещества, не вызывающее раздражающего эффекта в острых опытах.

4.1.4. Для установления видовой чувствительности используют не менее 2-х видов лабораторных животных (крысы обязательны).

4.1.5. Учет реакции ведется по гибели животных или по развитию клинических признаков интоксикации.

4.1.6. В случаях отсутствия клинических признаков воздействия после однократной аппликации изучение кожной резорбции проводится в подостром эксперименте (20 аппликаций) в течение 4-х недель по 5 раз в неделю.

4.1.7. Изучение состояния подопытных животных проводится через 5, 10, 20 аппликаций с привлечением интегральных и специфических показателей, оказавшихся чувствительными при ингаляционном и пероральном путях поступления. Целесообразно проводить определение исследуемого вещества и его метаболитов в биосредах.

4.1.8. Если на данном этапе не выявлено резорбтивного действия вещества, дальнейшие исследования по изучению кожного воздействия прекращаются.

4.1.9. В случае гибели животных при однократном воздействии или при наличии изменений показателей, используемых в подостром эксперименте, выходящих за порог вредного действия, (приложение N 7), к ПДК вещества в воздухе рабочей зоны вносится пометка "Опасно при поступлении через кожу". Для указанной группы веществ должен устанавливаться ПДУ загрязнения кожи. С этой целью приступают к следующему этапу исследований - количественной оценке кожно-резорбтивного поступления вредных химических веществ в организм.

4.2. Количественная оценка кожно-резорбтивного действия.

4.2.1. Установление среднесмертельной дозы и среднеэффективного времени гибели животных .

4.2.1.1. Для выбора начальных доз с целью определения следует использовать уравнения, учитывающие корреляционную связь между параметрами токсичности органических веществ при различных путях:

а) (r = 0,84, n = 107)

б) (r = 0,81, n = 60)

в) (r = 0,75, n = 60)

4.2.1.2. Расчетные значения могут быть получены из формулы: (r = 0,80, G = 0,59, n = 11)

Наиболее часто определяется следующая зависимость между и

cut в мг/кг	cut в мин
50	5
51-300	3-15
301-2000	15-120
2000	120

4.2.1.3. Кроме смертельных эффектов следует учитывать клинические признаки интоксикации, время их появления, выраженность и другие объективные показатели.

4.2.1.4. Расчет проводится по методу Литчфилда и Уилкоксона в мг/кг, а также в .

Степень опасности химического вещества при кожном пути поступления по величинам устанавливается в соответствии с ГОСТом 12.I.007.76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

4.2.2. Определение порога и зоны острого действия.

4.2.2.1. В эксперименте для определения должно быть исследовано не менее 3-х уровней. Разрыв между ними определяет степень токсичности вещества и его кумулятивные свойства.

4.2.2.2. Выбор показателей для определения воздействия вещества должен проводиться с учетом изменений, выявленных при ингаляционном и других путях поступления вещества.

4.2.2.3. Порог вредного действия устанавливается по интегральным и специфическим показателям.

4.2.2.4. Зона острого действия вычисляется по отношению:

.

4.2.3. Исследование кумулятивных свойств.

4.2.3.1. Изучение кумуляции вещества проводится при 20-кратном нанесении на кожу 1/5, 1/10, или 1/20 в течение месяца.

4.2.3.2. Кумулятивные свойства вещества характеризуются коэффициентом кумуляции: отношением при многократном нанесении к при однократной аппликации на кожу.

4.2.4. Определение порога хронического действия.

4.2.4.1. Опыты проводятся на белых крысах по 4 часа в день 5 раз в неделю на протяжении 4-х месяцев.

4.2.4.2. Выбор уровней воздействия должен основываться на знании свойств вещества (быстрое обезвреживание, метаболизирование, способность к кумуляции и др.). Исследования проводят не менее, чем на двух уровнях воздействия ниже .

4.2.4.3. Для изучения проявлений воздействия необходимо применять комплекс функциональных, биохимических и морфологических показателей, связанных с характером биологического действия вещества. Наряду с применением интегральных и специфических показателей, характеризующих действие яда на организм, целесообразно изучение скорости всасывания вещества через кожу, кинетики и метаболизма его в организме. Исследование состояния животного необходимо проводить в динамике.

4.2.4.4. Зона хронического действия вычисляется по отношению

.

4.2.5. Обоснование ПДУ загрязнения кожи.

4.2.5.1. ПДУ загрязнений кожных покровов в рассчитывается с учетом величины экспериментального порога хронического действия и коэффициента запаса.

4.2.5.2. Обоснование коэффициента запаса производится с учетом:

- среднесмертельной дозы

- времени контакта с кожей, приводящей к 50% гибели -

- порога () и зоны () острого действия;

- коэффициента кумуляции -

- порога () и зоны () хронического действия.

Коэффициент запаса возрастает:

- с увеличением абсолютной токсичности;

- с уменьшением величины и увеличением скорости всасывания вещества через кожу;

- с уменьшением зоны острого действия;

- с увеличением кумулятивных свойств вещества;

- с увеличением зоны хронического действия.

Как правило, коэффициент запаса колеблется от 3 до 20.

4.2.5.3. При наличии сенсибилизирующего, бластомогенного и других специфических проявлений отдаленных последствий действия яда коэффициент запаса обосновывается в соответствии с методическими указаниями к постановке исследований для обоснования ПДК в воздухе рабочей зоны.

5. Клинико-гигиеническое обоснование ПДУ загрязнений кожи

5.1. Данный этап проводится с целью корректировки полученных в эксперименте нормативов в конкретных производственных условиях. Для этого необходимо сопоставить количество вещества определяемое на кожных покровах с проявлением воздействия.

5.2. Отбирают группу работающих для изучения степени загрязнения кожи. В первую очередь это должны быть лица ведущих профессий, подвергающиеся по условиям производства наибольшему контакту с химическими веществами (например, в химической и нефтехимической промышленности - это аппаратчики и слесари, в машиностроительной и металлообрабатывающей промышленности - это станочники, работающие с растворителями). Число лиц в каждой группе - не менее 5 человек.

5.3. Общие методические требования к проведению смывов изложены в разделе 2.7 настоящих указаний и приложении N 6.

5.4. Стандартный участок кожи, с которого проводится смыв вещества, равен 10х10 см. Смывы следует проводить с различных участков тела, т.е. как с открытых, так и закрытых спецодеждой с учетом поверхности исследуемого участка. Смывы с кистей проводить обязательно. Общая площадь участков смыва должна составить 5% поверхности кожного покрова, которая для среднего взрослого человека составляет 800 . Например, смывы с кистей, лица, груди, спины, бедер и др. Смывы проводят не менее двух раз в смену (через час от начала работы и в конце работы).

5.5. Допускается проведение смывов только с кистей рук при соблюдении положений, изложенных в п. 1.2.

5.6. Для малолетучих веществ из полученных результатов вычисляется среднее за смену значение загрязнения исследуемого участка кожи по формуле:

(3), где

С - среднесменное количество вещества на стандартном участке кожи в ;

, , - количество вещества, определяемое в течение смены в смывах со стандартного участка в ;

n - количество смывов.

Данные среднесменных загрязнений, определяемых на стандартном участке, пересчитываются на всю поверхность данного участка кожного покрова по формуле:

(4), где

	- количество вещества в мг, определяемое на всей площади исследуемого участка.
	- среднесменное количество вещества на стандартном участке кожи в .
S	- площадь исследуемого участка.

5.7. Полученные результаты загрязнений кожных покровов с учетом площади исследуемых участков (приложение 8) позволяют определить загрязнение всей поверхности кожных покровов.

	- среднесменное количество вещества на всей поверхности кожного покрова в мг.
	- среднесменное количество вещества на исследуемом участке (кисти рук, спина, грудь и др.) в мг.
, ...	- площадь исследуемого участка в .
S общая	- площадь всей поверхности кожного покрова, в среднем равная 16120 .

5.8. Для малолетучих и водонерастворимых веществ следует учитывать возможность воздействия вещества после смены. С этой целью необходимо дополнительно проводить смывы вещества после душа.

5.9. Для определения реальной опасности вещества в условиях производства необходимо сопоставление экспериментально полученных пороговых доз с теми количествами вещества, которые могут попадать на кожу работающих в конкретных производственных условиях.

Показателями реальной опасности (ПО) острой и хронической интоксикации вещества в конкретных производственных условиях могут служить отношения количества вещества, попавшего на стандартный участок кожи к пороговым дозам при однократном и хроническом нанесении на кожу животных.

; , где

С - среднесменное количество вещества на стандартном участке в .

Чем больше единицы это соотношение, тем больше вероятность острого или хронического отравления.

5.10. Для клинического обоснования ПДУ загрязнений кожных покровов выбираются производства, где преимущественно имеет место кожный путь поступления вредного химического вещества. При наличии ингаляционного пути поступления концентрации химического вещества в воздухе рабочей зоны не должны превышать предельно допустимых уровней, либо работающие применяют средства индивидуальной защиты органов дыхания.

5.11. Для медицинского осмотра отбираются группы рабочих согласно пункту 5.2. Осмотр специалистами и исследование функционального состояния отдельных органов и систем проводится в зависимости от характера биологического действия вещества.

Зам. Главного государственного санитарного врача СССР

А.И. Заиченко