Инструкция по применению фаготетразолового метода (ФТМ) индикации возбудителя чумы (утв. Министерством здравоохранения СССР 16 февраля 1970 г. N 836-70)

2. Материалы и методика

а) Чумной бактериофаг (титр ). Выпускается институтами Министерства здравоохранения СССР.

б) 0,04% раствор метилтиазолилтетразолий бромида (MTT)*. Готовится на фосфатном буфере рН-7,2 с содержанием 33% этанола и 0,85% хлористого натрия. МТТ сначала растворяется в этаноле.

в) Бульон Хоттингера pH-7,0-7,1, аминн. азот не менее 250 мг%.

г) Ацетон (х.ч.) и толуол (х.ч.).

Пробу** материала разводят на бульоне Хоттингера и разливают в 2 пробирки по 2 мл. В первую пробирку (опытную) добавляют 0,5 мл чумного фага, во вторую (контрольную) - 0,5 мл бульона и термостатируют при 28 или 37°С в течение 30 минут или 7 часов. После термостатирования в обе пробирки добавляют 0,5 мл (строго одинаковые объемы) раствора МТТ; смесь тщательно перемешивают и оставляют до появления окраски, но не более чем на 25 мин. При наличии живых микробов после добавления тетразолия в опытной пробирке (с фагом) восстановление последнего не происходит или замедляется и смесь остается неокрашенной или она менее окрашена в сравнении с контролем. Если после добавления тетразолия через 25 минут нет отчетливой окраски, то для усиления аналитического эффекта в обе пробирки добавляют 1 мл ацетона и после перемешивания - 0,5 мл толуола и тоже тщательно перемешивают. Через 1 минуту в пробирках появляются окрашенные кольца, интенсивность которых при наличии индикаторной к фагу культуры будет различной.

В тех случаях, когда в пробе содержится большое количество микробов (), которое можно предварительно установить различными приемами (тетразоловая проба, реакция на белок и др.), термостатирование проб ограничивается 30 минутами.

3. Оценка анализа

Наличие P. pestis в пробе считается в том случае, если в контрольной (без фага) пробирке интенсивность окраски больше чем в опытной. В этом случае ответ является окончательным. При отрицательном ответе необходимо накопление материала путем посева на элективную среду (пластины агара, содержащего генцианвиолет и стимулятор роста P. pestis) с последующей постановкой фаготетразоловой реакции, которой и заканчиваются исследования.

ФТМ позволяет специфически индицировать P. pestis в присутствии равного и меньшего количества посторонней микрофлоры.

Чувствительность метода без подращивания - живых микробных клеток, при 7-часовом подращивании - микробных клеток.

Начальник Главного санитарно- эпидемиологического управления Министерства здравоохранения СССР

А. Павлов

______________________________

* Можно использовать другую соль тетразолия.

** Отбор проб осуществляется по общепринятым методикам.