Приложение 2. Аналитический отчет о ходе реализации в 2013 году российской части научно-технической программы Союзного государства "Разработка технологий и организация опытного производства высокоэффективных и биологически безопасных лекарственных средств нового поколения и пищевых продуктов на основе лактоферрина человека, получаемого из молока животных-продуцентов" ("БелРосТрансген-2")

Приложение 2.

Аналитический отчет
о ходе реализации в 2013 году российской части научно-технической программы Союзного государства "Разработка технологий и организация опытного производства высокоэффективных и биологически безопасных лекарственных средств нового поколения и пищевых продуктов на основе лактоферрина человека, получаемого из молока животных-продуцентов" ("БелРосТрансген-2")

Научно-техническая программа союзного государства "БелРосТрансген-2" утверждена Постановлением Совета Министров Союзного государства от 26 июня 2009 г. N 23.

Цель программы "БелРосТрансген-2" - разработка технологий производства лекарственных средств нового поколения и пищевых продуктов на основе результатов реализации программы "БелРосТрансген".

Программа "БелРосТрансген-2" направлена на создание в государствах-участниках современного фармацевтического биопроизводства высокоэффективных и биологически безопасных лекарственных средств, пищевых добавок и пищевых продуктов нового поколения, конкурентоспособных с лучшими зарубежными образцами.

Реализация программы позволит обеспечить населения Российской Федерации и Республики Беларусь новыми лекарственными средствами, пищевыми и диетическими продуктами, что в свою очередь будет способствовать повышению уровня медицинского обслуживания и улучшению здоровья населения обеих стран-участниц.

Основными задачами программы "БелРосТрансген-2" являются:

- получение, отбор и формирование в Российской Федерации и Республике Беларусь популяции животных-продуцентов лекарственного белка человека лактоферрина;

- исследование качества и биологической активности рекомбинантного лактоферрина человека по основным направлениям его применения;

# лактоферрина человека по основным направлениям его применения;

- разработка способов выделения лекарственного белка лактоферрина человека из молока животных-продуцентов для создания высокоэффективных лекарственных средств нового поколения и пищевых продуктов;

- организация опытных производств лекарственных средств и пищевых продуктов в Российской Федерации и Республике Беларусь.

Государственным заказчиком-координатором программы "БелРосТрансген-2" является Министерство образования и науки Российской Федерации, государственными заказчиками являются Национальная академия наук Беларуси, Министерство здравоохранения Российской Федерации, и Министерство здравоохранения Республики Беларусь.

Программа "БелРосТрансген-2" рассчитана на 5 лет (2009 - 2013 годы).

Общий объем финансирования программы "БелРосТрансген-2" за счет средств бюджета Союзного государства составит 500 000 тыс. рублей, в том числе за счет долевых отчислений Российской Федерации - 325 000 тыс. рублей; за счет долевых отчислений Республики Беларусь - 175 000 тыс. рублей.

Головными исполнителями Программы являются от Российской Федерации - Федеральное Государственное бюджетное учреждение науки Институт биологии гена Российской академии наук (г. Москва, Россия) (далее - ИБГ РАН),

Объем финансирования российской части программы "БелРосТрансген-2" за счет средств бюджета Союзного государства в 2013 году был запланирован 75 000 тысяч российских рублей за счет отчислений Российской Федерации - 90 000 тыс. рублей.

В 2013 году реализация программы "БелРосТрансген-2" проводилась в соответствие с "Системой программных мероприятий" Программы.

Информация о ходе выполнения мероприятий программы "БелРосТрансген-2" российской стороной.

Основные результаты выполнения работ:

- мероприятие 1.1. Наработка, оптимизация и проверка генных конструкций, обеспечивающих экспрессию генов лактоферрина человека в молочной железе животных-продуцентов

Создана новая экспрессионная конструкция LTF12, отличительной особенностью которой является наличие регуляторного наноэлемента, обладающего энхансерной активностью. Оформлен паспорт на новую генную конструкцию. Для проверки эффективности ее работы была проведена микроинъекция конструкции в пронуклеусы зигот экспериментальных животных (мышей) (из 7 животных 2 мыши оказались трансгенными). Для генных конструкций использованных нами ранее, в среднем, соотношение составляло 5/1. Таким образом, эффективность получения трансгенных животных при использовании новой генной конструкции LTF12 в проведенном эксперименте, увеличилась примерно на 5%. Определен уровень продукции лактоферрина в молоке мышей, трансгенных по новой конструкции LTF12, который составил 27 и 35 г/литр, что соответствует диапазону продукции полногеномной конструкции LTF5, который составляет 20-40 г/литр. Составлены рекомендации по перспективности генетических конструкций и регуляторных элементов, которые используются в LTF12, являющейся оптимальной конструкцией для промышленного производства лактоферрина человека. Данная разработка патентоспособна.

- мероприятие 1.2. Исследование спектра, биологических активностей лактоферрина человека, полученного из молока животных-продуцентов.

В отчетный период исследованы образцы лактоферрицинов. Из 32 г лактоферрина было получено 0,8 г лактоферрицина Л-1-49, что составляет 50% от теоретического выхода. Из 0,4 г лактоферрицина Л-1-49 был получен и очищен фрагмент лактоферрицин Л-1-11 в количестве 48 мг, что составляет 60% от теоретического. Полученные пептиды были охарактеризованы электорофоретически, ВЭЖХ, по растворимости. Исследована стабильность антимикробной активности у 2 образцов лактоферрицинов, которые хранились в течение трех месяцев при температуре 4°С.

Исследованы образцы препаратов ЛФ в смеси со стандартными наполнителями (мальтодекстрином, поливинилпирролидоном, фибригамом) и свечей с полиэтиленгликолевой основой. Оценка биологической активности проводилась диско-диффузионным методом на трех умеренно устойчивых к доксициклину клинических изодятах St. aureus и Candida. Показано, что большинство из образцов содержали железо и один препарат обладал железосвязывающей способностью. Все исследуемые образцы лактоферрина и его фрагментов обладают противомикробным и противогрибковым действием.

Обобщая результаты многолетних исследований по изучению противораковых свойств лактоферрина человека, определено влияние Неолактоферрина (Неолакт) на токсическое и противоопухолевое действие цитостатиков. Микроскопическое исследование показало, что Неолакт уменьшал токсическое действие цисплатина в печени, почках, тонком и толстом кишечнике мышей. В экспериментах с перевиваемой опухолью РШМ-5 было показано, что Неолакт несколько снижал терапевтический эффект цисплатина.

- мероприятие 1.3. Биохимические и генетические исследования животных-продуцентов.

Исследованы зоотехнические, биохимические и генетические показатели животных, родившихся в первом полугодии 2013 года.

Изучена плодовитость, молочная продуктивность, и уровень экспрессии лактоферрина у коз-продуцентов в зависимости от происхождения в ряду поколений. Уровень продукции лактоферрина в молоке животных-продуцентов устойчиво сохраняется.

Проведена сравнительная характеристика роста и развития молодняка в ряду поколений коз-продуцентов. Расчет индексов телосложения показали, что трансгенные козлики сложены компактно, имеют туловище, соответствующее хорошему развитию дыхательных и пищеварительных органов и характеризуются прочными конечностями, что также указывает на крепость конституции. По всем остальным показателям данные соответствовали видовым нормам и практически не отличались от средних показателей сверстников.

Обобщены результаты биохимических и генетических исследований животных-продуцентов. Начат перевод трансгенных козлов на племенную основу. Проведена зоотехническая характеристика лактирующих коз-продуцентов и их молочная продуктивность в зависимости от рациона кормления. Средний ежедневный удой этих коз-продуцентов в 2013 году составил 1,1 л. Для повышения молочной продуктивности до 3,0 л в день они переводятся на племенную основу.

- мероприятие 2.1. Формирование и эксплуатация инфраструктуры биотехнологических комплексов, необходимой для выполнения опытно- экспериментальных работ по получению, размножению и исследованию популяции животных- продуцентов в Российской Федерации и Республике Беларусь.

Продолжены работы по обеспечению функционирования инфраструктуры биотехнологического центра на базе Ставропольского НИИ животноводства и кормопроизводства РАСХН.. Помещения комплекса обеспечены кормами, водой, электроэнергией, теплом. Заготовлены грубые корма (сено, солома), концентраты (зерно, ячмень) и сочные корма из расчета на 30 козлов-производителей и 60 экспериментальных коз.

На базе молочной козоводческой фермы ООО "Нефедовское" проведен комплекс мероприятий по подготовке и завозу высокопродуктивных коз и козлов зарубежной селекции.

Подведены основные итоги эксплуатации биотехнологического комплекса в Российской Федерации в рамках реализации программы Союзного государства "БелРосТрансаген-2".

Разработаны "Рекомендации по формированию и содержанию инфраструктуры биотехнологических комплексов Российской Федерации".

- мероприятие 2.2. Экспериментальные работы по получению первичных животных-продуцентов.

В 2013 году осуществлялся постоянный контроль за состоянием послеоперационных животных. Обеспечено полноценное питание животных. Для минеральной подкормки использовали мел, костную муку и поваренную соль. Для поддержания тонуса оперированных животных проводили витаминизацию, для чего вводили комплексный витаминный препарат "Тетравит". Для определения беременности у коз провели ультразвуковое исследование. Во время окотов организованы круглосуточные дежурства. В результате родились две козочки от двух реципиентов. Алализ образцов кожи на содержание гена лактоферрина человека оказался отрицательным. Разработана и утверждена Инструкция по технологии получения первичных трансгенных коз, включающая в себя разделы по гормональному вызыванию суперовуляции и работе с зиготами коз.

В конце ноября 2013 года была проведена гормональная подготовка этих животных. Для проведения эксперимента 2013 года было подготовлено 20 животных (6 доноров и 14 реципиентов). Вымыто для проведения экспериментов 22 клетки (5,5 клеток на козу или 27,5% от числа овулировавших клеток). Из 11 микроинъецированных клеток было 10 поделившихся (91%), которые были по 2 клетки пересажены 5 реципиентам.

- мероприятие 2.3. Формирование популяции животных-продуцентов. Организация банка спермы.

С целью формирование популяции животных-продуцентов использован банк спермы трансгенных козлов и племенных козлов-улучшателей по молоку. Полученный молодняк в количестве 35 голов выращивался в строгом соответствии с нормами и содержался на цельном козьем молоке в течение 2-х месяцев.

Создан банк семени, оснащенный современным оборудованием. На длительное хранение помещено 920 доз семени от трансгенных по гену лактоферрина козлов.

Для обеспечения здоровья подопытных животных изготовлено и передано на хранение для использования в экспериментальных целях в "Трансгенбанк" 3000 доз вакцины для профилактики остроконтагиозного заболевания овец и коз. Совместно с НО "Золотая коза" в ООО "Нефедовское" были проведены пробные обработки коз новой вакциной в сентябре, октябре, ноябре и декабре, которые показали хорошие результаты. Всего было проведено 4 обработки 22 голов козлят. Разработаны "Рекомендации по созданию промышленных стад коз-продуцентов".

- мероприятие 3.1. Разработка технологии получения из молока животных-продуцентов различных форм лекарственных средств, содержащих лактоферрин человека.

Разработана технология получения средств для перорального применения (капсулированная форма). Изготовлена лабораторная серия капсул неолактоферрина. Составлен проект ТУ на капсульную форму.

Разработана технология получения лекарственных мазей, гелей на основании проведенных на предыдущих этапах Программы исследований. Составлен проект ТУ на "Гелевую композицию на основе лактоферрина человека (ЛФЧ) для лечения угрей обыкновенных".

В отчетный период на основе лактоферрина человека были разработаны технологические подходы к получению ректальных и вагинальных суппозиториев. Для подбора состава (рецептуры) по вспомогательным веществам и технологии производства была разработана фармакологическая форма и выработана опытная партия: "Лактоферрин" суппозитории вагинальные 100 мг, содержащие полиэтиленгликоль. На основании полученных технологических данных был разработан проект ТУ, состоящий из лабораторного регламента на производство и проекта инструкции по применению. Проведены исследования приготовленных опытных образцов суппозиторных форм. Показано, что белок остался не денатурированным, и растворялся в водных растворах.

В процессе разработки технологии получения глазных капель приготовлены и протестированы капельные препараты лактоферрина человека с использованием органических и неорганических добавок с целью повышения устойчивости белка лактоферрина в водном растворе. Показано, что водный препарат, в котором концентрация поливалентной кислоты или ее соли составляет 0,005% (вес/объем) или более, пригоден для создания препарата глазных капель. Концентрация лактоферрина в 0.01-3.0% (вес/объем) считается оптимальным для всех составов.

На основе полученных данных разработаны проекты ТУ на две лекарственные формы глазных капель для лечения катаракты ("Катаферрин") и воспалительных заболеваний глаз ("Окоферрин").

- мероприятие 3.2. Разработка технологий для производства пищевых продуктов на основе молока коз, содержащего лактоферрин человека.

Проведено исследование по оценке концентрации лактоферрина в предназначенных для цели функционального питания продуктах. Исследованы образцы четырех видов молочных продуктов, предназначенных для функционального питания. Определены и систематизированы требования для адаптации товарных продуктов в соответствии с физиологическими особенностями организма человека, его морфофункциональным и иммунологическим состоянием.

Отработана технология входного и промежуточного контроля качества лактоферрина человека в процессе опытно-промышленного выделения. Разработаны Методические рекомендации. Проведены исследования промежуточных продуктов в процессе опытно-промышленного выделения.

Разработана оригинальная технология микрофильтрации козьего молока с целью сохранения биологической активности лактоферрина человека. На основании полученных результатов разработан проект ТУ на "Молоко козье, содержащее лактоферрин человека, бактериально санированное".

- мероприятие 4.1. Разработка нормативной документации на рекомбинантный лактоферрин человека для использования как основы лекарственных средств и пищевых продуктов.

Проведен экологический мониторинг мест содержания, проанализирован режим эксплуатации коз-продуцентов (проверены животноводческие помещения, проведен анализ сбалансированности кормов и другое). Проведён анализ молока коз-продуцентов с целью определения соответствия его экологическим требованиям. В молоке не обнаружено загрязнения токсичными элементами, радоинуклеидами, антибиотиками, пестицидами, микробиологические показатели в норме. Проверка наличия трансгена в пробах почвы, воды и молоке показала, что уровень ниже придела чувствительности метода ПЦР (Акты прилагаются). Разработаны методические рекомендации по условиям содержания, контролю параметров окружающей среды и качества кормов для коз-продуцентов рекомбинантного лактоферрина человека с молоком.

- мероприятие 4.2. Организация опытных производств лекарственных средств в Российской Федерации и Республике Беларусь. Разработка проекта нормативной документации на конечную продукцию.

Наработаны путем проведения двухстадийной очистки с помощью миниантител опытные образцы высокоочищенного лактоферрина человека рекомбинантного белка, природного лактоферрина человека и лактоферрина коз. Проведен сравнительный анализ очищенных препаратов лактоферрина с помощью различных физико-химических методов (масс-спектрометрии, спектр кругового дихроизма). Показана идентичность вторичных структур природного и рекомбинантного лактоферринов человека.

По результатам исследований с моноклональными антителами подготовлена рукопись статьи в журнал Protein Expression and Purification.

Проведена серия экспериментов для отработки методов выделения субстанции Неолактоферрина на опытно-промышленной установке. Составлены рекомендации по совершенствованию технологии. Наработано 270 грамм субстанции.

Для разработки проекта нормативной документации на конечную продукцию и последующей организации опытных производств лекарственных средств, проведены клинические наблюдения по применению ополаскивателя, содержащего лактоферрин человека, в комплексной терапии дисбиоза полости рта. Из проведенных наблюдений можно сделать вывод, что включение в комплекс ежедневных гигиенических мероприятий ротовых ванночек с новым препаратом "Неолактоферрин-Дента" позволило улучшить состояние пародонта, гигиеническое состояние полости рта, устранить запах изо рта и уменьшить выраженность ксеростомии. Даны практические рекомендации по протоколу применения препарата. Данный препарат разрешен к использованию в качестве гигиенического средства.

Заключительным разделом выполненных работ по данному мероприятию стало составление планов доклинических (GLP) исследований лекарственных форм на основе лактоферрина человека, получаемого из молока коз-продуцентов и разработка протоколов клинических исследований 1 фазы пяти оригинальных препаратов на основе лактоферрина человека.

- мероприятие 4.3. Организация опытных производств пищевых продуктов в Российской Федерации и Республике Беларусь. Разработка проекта нормативной документации на конечную продукцию.

Разработаны технические параметры, необходимые для производства лактоферрина человека в пищевой промышленности, и подготовлены методические рекомендации, включающие требования к подготовке молочного сырья, необходимый набор оборудования, описание стадий и технологическую схему процесса выделении лактоферрина человека. Для разработки новых продуктов функционального питания изучена перспективность использования лактоферрина совместно с бифидобактериями. Разработана экспериментальная методика оценки влияния неолактоферрина на рост бифидо- и лактобактерий. Проведены выработки готовых молочных продуктов, содержащих лактоферрин человека. Разработан проект ТУ на "Йогурт, обогащенный лактоферрином".

Проведены наработки опытных партий готовых продуктов функционального питания детей. Полученные готовые пакетики саше проверены на качество.

Для разработки нормативной документации на конечную продукцию функционального питания для новорожденных детей на основе Неолактоферрина, совместно с НЦЗД РАМН проведено обоснование выбора дозировок и способов введения лактоферрина человека в продукты питания для детей грудного и раннего возраста. Определены группы пациентов, которым рекомендован к назначению лактоферрина человека.

Проведен выбор оптимального способа введения лактоферрина человека в питание детей в зависимости от возраста и состояния здоровья - добавлением лактоферрина непосредственно перед употреблением. На основании проведенного исследования определены показания по введению лактоферрина человека в рацион питания детей.

Совместно с ЗАО "Партнер" разработана экспериментальная методика оценки влияния Неолактоферрина на рост бифидо- и лактобактерий. Проведены выработки готовых молочных продуктов, содержащих лактоферрин человека. Разработан проект ТУ на "Йогурт, обогащенный лактоферрином".

На завершающем этапе программы "БелРосТрансген-2" разработаны 8 готовых продуктов пищевого и гигиенического назначения на основе Неолактоферрина. Для всех указанные готовых продуктов утверждены ТУ и получены Сертификаты соответствия и Декларации соответствия.

Информация о финансировании Программы.

В 2013 году финансовые средства выделялись своевременно, в соответствии с бюджетной росписью, в полном объеме (75 000,0 тыс. российских рублей).

В Российской Федерации в отчетный период работы по программе выполнялись в соответствии с утвержденным календарным планом к дополнительному соглашению N 6 от "12" марта 2013 г. к государственному контракту от "27" июля 2009 г. N 01.916.12.0001, заключенному Министерством образования и науки Российской Федерации с Федеральным государственным бюджетным учреждением науки Институтом биологии гена Российской академии наук. Заключение контрактов с соисполнителями Программы в 2013 году осуществлялось головным исполнителем ИБГ РАН на основании п. 32, ст. 55, гл. 6 Федерального закона от 21 июля 2005 г. N 94-ФЗ "О размещении заказов на поставки товаров, выполнение работ, оказание услуг для государственных и муниципальных нужд" (в ред. Федерального закона от 21.04.2012 N 79-ФЗ) с учетом специфики мероприятий программы и анализа возможностей организаций в данной сфере деятельности.

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Дату названного Федерального закона N 79-ФЗ следует читать как "21 апреля 2001 г."

Все средства, выделенные из бюджета Союзного государства и предназначенные для реализации программы "БелРосТрансген-2", были использованы головным исполнителем и соисполнителями в Российской Федерации по целевому назначению в соответствии с системой программных мероприятий.

Сведения об использовании средств по мероприятиям программы за период ее реализации приведены в таблице.

Год реализации		Наименование мероприятия Программы
		1. Научные разработки и исследования	2. Экспериментальные работы по получению и размножению животных-продуцентов	3. Технологические разработки	4. Организация опытных производств лекарственных средств и пищевых продуктов для проведения научно-исследовательских работ, проведение маркетинговых исследований.	Всего
2013	план	19 000,0	14 000,0	7 000,0	35 000,0	75 000,0
	кассовые расходы	19 000,0	14 000,0	7 000,0	35 000,0	75 000,0

Сведения об использовании средств по направлениям расходования в рамках программы за 2013 год приведены в таблице.

	Утверждено бюджетных ассигнований на год	кассовые расходы (по ф. Союз-1)
	(тыс. российских руб.)	(тыс. российских руб.)
2013 г
текущие расходы, в том числе, приобретение спецоборудования	75000,0	75000,0 2463,62
строительство	-	-
итого:	75 000,0	75 000,0

В результате успешной разработки опытно-промышленной технологии выделения лактоферрина человека из молока коз-продуцентов оказалось возможным получать до 80% этого белка высокого качества, соответствующего природному белку.

Созданное опытное стадо коз - продуцентов в полном объеме регулярно обеспечивает проведение запланированных исследований необходимым количеством молока для выделения лактоферрина человека.

Молоко и выделенный лактоферрин - высокоценные продукты, которые после необходимого сертифицирования должны быть переданы заинтересованным промышленным предприятиям для создания товарной продукции и ее последующей реализации. Это позволит определить рынок инновационной продукции, как в России, так и за рубежом. Получаемый производителями доход может быть учтен и использован для покрытия эксплуатационных расходов в целях реализации научных и технологических задач Программы Союзного государства "БелРосТрансген-2".

В 2013 году проведены работы по формированию Перечня имущества и карт имущества, приобретенного и созданного за счет средства бюджета Союзного государства по итогам выполнения программных мероприятий Программы в целом, в соответствии с положениями Методики выявления и инвентаризации имущества, созданного и приобретенного за счет средств бюджета Союзного государства, имущества, переданного государствами-участниками в собственность Союзного государства, и иного имущества, поступившего в собственность Союзного государства.

Научные достижения российского коллектива ученых, разрабатывающих Программу получения лактоферрина человека, опубликованы в научной печати. Материалы исследований были доложены на международных конференциях и семинарах.