Межгосударственный стандарт ГОСТ 31644-2012 "Продукция соковая. Определение 5-гидроксиметилфурфурола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 сентября 2012 г. N 438-ст) (с изменениями и дополнениями)

Межгосударственный стандарт ГОСТ 31644-2012
"Продукция соковая. Определение 5-гидроксиметилфурфурола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 сентября 2012 г. N 438-ст)

С изменениями и дополнениями от:

30 августа 2016 г.

Juice products. Determination of 5-Hydroxymethylfurfural (HMF) by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method

Дата введения - 1 июля 2013 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки и нектары, концентрированные соки, пюре и концентрированные пюре, морсы и концентрированные морсы, сокосодержащие напитки, соковую продукцию из фруктов и овощей обогащенную и для детского питания (далее - соковая продукция) и устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола (5-ГМФ).

Нижний предел измерений массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола составляет 1  (). Верхний предел измерений массовой концентрации (массовой доли) 50  ().

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в раздел 2 внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст раздела в предыдущей редакции

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на межгосударственные стандарты:

ГОСТ ИСО 5725-1-2003*(1) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ISO 3696-2013*(2) Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы контроля

ГОСТ ИСО 5725-6-2003*(3) Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-79*(4) Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4198-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия

ГОСТ 6552-80 Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 18270-72 Кислота уксусная особой чистоты. Технические условия

ГОСТ 22967-90 (СТ СЭВ 2486-80, СТ СЭВ 3399-81) Шприцы медицинские инъекционные многократного применения. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-2014 Продукты переработки фруктов и овощей. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ 26671-2014 Продукты переработки фруктов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, а также по соответствующим, ежемесячно издаваемым, информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, раздел 3 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 января 2017 г.

См. текст раздела в предыдущей редакции

3 Сущность метода

Метод основан на количественном определении 5-гидроксиметилфурфурола с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и спектрофотометрическим детектированием в ультрафиолетовой области спектра при длине волны 284 нм.

4 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, материалы, реактивы

4.1 Хроматограф жидкостный высокоэффективный со спектрофотометрическим детектором (рабочий диапазон длин волн поглощения от 200 до 600 нм) и программно-аппаратным комплексом сбора и обработки результатов типа "Millenium 2000".

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, пункт 4.2 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

4.2 Спектрофотометр со значениями характеристик не ниже следующих:

спектральный рабочий диапазон - 200 - 800 нм;

пределы допускаемой абсолютной погрешности измерений по шкале длин волн 0,1 нм;

пределы допускаемой воспроизводимости измерений по шкале длин волн 0,08 нм;

пределы допускаемой абсолютной погрешности измерений спектрофотометра 0,5%.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, пункт 4.3 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

4.3 Колонка хроматографическая длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем, размером частиц 5 мкм*(5), и обеспечивающая требуемую эффективность разделения.

4.4 Микрошприцы для ВЭЖХ вместимостью 25, 100 и 250 мкл.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в пункт 4.5 внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

4.5 Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIMLR 76-1 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания 0,1 мг.

4.6 Мини-насос лабораторный (к установке для дегазации элюента).

4.7 Центрифуга лабораторная с величиной фактора разделения (g-фактор) 800 - 1000.

4.8 Фильтры мембранные с диаметром пор 0,20 и 0,45 мкм для фильтрования подвижной фазы и проб.

4.9 Пипетки 1-2-1,1-2-5, 1-2-10 2-го класса точности по ГОСТ 29169.

4.10 Пипетки градуированные 1-2-25 по ГОСТ 29227 вместимостью 25  или дозаторы пипеточные с аналогичным или изменяемым объемом доз с относительной погрешностью дозирования 1%.

4.11 Колбы мерные с одной отметкой вместимостью 25, 50, 100, 500, 1000  по ГОСТ 1770.

4.12 Цилиндр мерный вместимостью 1000  по ГОСТ 1770.

4.13 Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336:

колбы круглодонные вместимостью 1000 ;

воронка лабораторная;

стаканы вместимостью 50, 100, 250, 500, 1000 .

4.14 Емкости для проб (виалы) вместимостью 2 - 6 .

4.15 Кюветы кварцевые для спектрофотометрии с длиной оптического пути 10 мм.

4.16 Установка для дегазации элюента.

4.17 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

4.18 Исключен с 1 января 2017 г.

Информация об изменениях:

См. текст пункта 4.18

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, пункт 4.19 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

4.19 Вода для лабораторного анализа 1-й степени чистоты по ГОСТ ISO 3696.

4.20 Ацетонитрил для ВЭЖХ.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, пункт 4.21 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

4.21 Калий фосфорнокислый однозамещенный (дигидрофосфат) () по ГОСТ 4198, ч.д.а.

4.22 5-гидроксиметилфурфурол особой чистоты с массовой долей основного вещества не менее 97% или 5-гидроксиметилфурфурол с массовой долей основного вещества не менее 99%.

4.23 Шприц медицинский 5  по ГОСТ 22967.

4.24 Стаканчики для взвешивания СВ-24/10 (30 х 50).

4.25 Фильтры обеззоленные.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, раздел 4 дополнен пунктом 4.26, вступающим в силу с 1 января 2017 г.

4.26 Кислота ортофосфорная с массовой долей основного вещества не менее 98% по ГОСТ 6552, ч.д.а.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, раздел 4 дополнен пунктом 4.27, вступающим в силу с 1 января 2017 г.

4.27 Иономер (рН-метр) с погрешностью измерения 0,05 ед. рН.

5 Отбор и подготовка проб

Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка проб - по ГОСТ 26671.

6 Подготовка к проведению определения

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, подраздел 6.1 изложен в новой редакции, вступающей в силу с 1 января 2017 г.

См. текст подраздела в предыдущей редакции

6.1 Приготовление подвижных фаз (элюентов) для жидкостной хроматографии

6.1.1 Подвижная фаза А

В мерной колбе по ГОСТ 1770 вместимостью 1000  последовательно смешивают 840  воды для лабораторного анализа 1-й степени чистоты по ГОСТ ISO 3696, 150  ацетонитрила (см. 4.20) и 10  уксусной кислоты особой чистоты по ГОСТ 18270. Раствор переносят в емкость для элюента (см. 4.16) с завинчивающейся крышкой и перемешивают. Полученный раствор дегазируют на установке для дегазации элюента (см. 4.16) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения раствора при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ при комнатной температуре без воздействия света - одна неделя.

6.1.2 Подвижная фаза Б

6.1.2.1 Приготовление раствора дигидрофосфата калия (рН = 3,0) молярной концентрации 50 ммоль/

6,8 г дигидрофосфата калия взвешивают в стакане вместимостью 100  с точностью до третьего десятичного знака, растворяют в приблизительно 80  воды для лабораторного анализа, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 , доводят водой для лабораторного анализа по ГОСТ ISO 3696 до метки и перемешивают. Раствор переносят в мерный стакан вместимостью 1000  и доводят рН до значения 3,0 ед. рН фосфорной кислотой, регистрируя показания иономером. Полученный раствор дегазируют на установке для дегазации элюента (см. 4.16) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

6.1.2.2 Приготовление подвижной фазы (элюента)

В мерный цилиндр вместимостью 1000  приливают 950  раствора дигидрофосфата калия (рН = 3), приготовленного по 6.1.2, 50  ацетонитрила (см. 4.20) и перемешивают. Полученный раствор дегазируют на установке для дегазации элюента (см. 4.16) под вакуумом в течение 15 мин с одновременной фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

Срок хранения раствора при условии визуального отсутствия нерастворимых веществ, при комнатной температуре без воздействия света - 5 сут.

Примечание - Подвижную фазу Б используют в случае, если подвижная фаза А не обеспечивает необходимую степень разделения пиков ГМФ и патулина на хроматограмме (коэффициент разрешения для хроматографических пиков ).

6.2 Подготовка проб для определения

6.2.1 Определение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в осветленных соках и сокосодержащих напитках, не содержащих нерастворимые в воде вещества, проводят без предвари тельного разбавления пробы дистиллированной водой.

Определение 5-гидроксиметилфурфурола в соковой продукции (при его вероятно высокой массовой концентрации) проводят после предварительного разбавления пробы дистиллированной водой в соотношении: с осветленными соками или сокосодержащими напитками 1:3 - 1:10, сконцентрированными соками 1:25 - 1:50.

Определение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в осветленных соках и сокосодержащих напитках, содержащих нерастворимые в дистиллированной воде вещества, проводят после фильтрования пробы через обеззоленный фильтр "белая лента" или ее центрифугирования по 4.7 с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

Затем 1 - 2  пробы отбирают в медицинский шприц по 4.23 через иглу, после этого заменяют иглу на фильтр с диаметром пор 0,45 или 0,20 мкм и отфильтровывают в виалу по 4.14.

6.2.2 Определение массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола в соках и сокосодержащих напитках с объемной долей мякоти до 10,0% включительно (соки и нектары из цитрусовых, ананаса, персика, абрикоса и др.) или содержащих нерастворимые в воде вещества, проводят после тщательного перемешивания пробы стеклянной палочкой, а затем центрифугирования с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

Соки и сокосодержащие напитки с объемной долей мякоти свыше 10,0% (из манго, томата, банана и др.) предварительно разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:5 для осветления раствора. Для этого в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50  мерным цилиндром по ГОСТ 1770 отбирают 10  пробы и доводят дистиллированной водой до метки. После этого пробу гомогенизируют перемешиванием стеклянной палочкой и центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин. В случае неполного осаждения нерастворимых в дистиллированной воде частиц с плотностью менее единицы пробу вновь фильтруют через обеззоленный фильтр "белая лента" или центрифугируют с фактором разделения не менее 990 g в течение 15 мин.

Затем 1 - 2  пробы с осветленным раствором отбирают в медицинский шприц через иглу, заменяют иглу на фильтр с диаметром пор 0,45 или 0,20 мкм и отфильтровывают в виалу.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в пункт 6.2.3 внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

6.2.3 Определение массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в концентрированных соках проводят после предварительного разбавления пробы дистиллированной водой весовым методом в соотношении 1:5. Для этого на весах с пределом допускаемой абсолютной погрешности + 0,2 мг в стакане вместимостью 50  по 4.24 взвешивают 5 - 7 г концентрированного сока с записью результата до третьего знака после запятой, прибавляют дистиллированную воду до получения общей массы пробы 25 - 35 г с записью результата до третьего знака после запятой. Делением общей массы пробы на массу концентрированного сока до разбавления водой вычисляют величину разбавления (разведения), которую учитывают при обработке результатов. В случае, если концентрированный сок представляет собой пюре, при разбавлении которого образуются нерастворимые в дистиллированной воде вещества, пробу дополнительно центрифугируют в соответствии с аналогичными требованиями 6.2.2.

Затем 1 - 2  пробы с осветленным раствором отбирают в медицинский шприц через иглу, заменяют иглу на фильтр с диаметром пор 0,45 или 0,20 мкм и отфильтровывают в виалу.

6.2.4 Для определения массовой концентрации 5-гидроксиметилфурфурола подготовку проб проводят по 6.2.1, 6.2.2, для определения массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола подготовку проб проводят по 6.2.3.

6.3 Приготовление стандартных растворов 5-гидроксиметилфурфурола

6.3.1 Приготовление основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола массовой концентрацией 1000 

В стакане вместимостью 50  взвешивают 0,025 г 5-гидроксиметилфурфурола по 4.22 с точностью до третьего знака после запятой, растворяют ориентировочно в 15  ацетонитрила по 4.20, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 , доводят ацетонитрилом до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора при температуре 4 °С - 1 мес, при комнатной температуре - 1 нед.

6.3.2 Приготовление рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола массовой концентрацией 1 - 7 мг/дм3

Из основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола готовят рабочий стандартный раствор 5-гидроксиметилфурфурола для определения точной массовой концентрации основного стандартного раствора Для этого в мерную колбу вместимостью 50  приливают ориентировочно 20  ацетонитрила, вносят пипеточным дозатором 50 - 350 мкл основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола, подготовленного по 6.3.1, доводят ацетонитрилом до метки и тщательно перемешивают.

Для определения точной массовой концентрации основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола регистрируют спектр поглощения рабочего раствора 5-гидроксиметилфурфурола относительно воды для лабораторного анализа по 4.19 в диапазоне длин волн 210 - 350 нм. Определяют значение абсорбции максимума (около 284 нм) и рассчитывают точную массовую концентрацию рабочего стандартного раствора по уравнению

,

(1)

где - массовая концентрация или массовая доля рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола, ;

А - оптическая плотность раствора 5-гидроксиметилфурфурола в максимуме поглощения;

М - молекулярная масса 5-гидроксиметилфурфурола, равная 126 г/моль;

- молярный коэффициент поглощения 5-гидроксиметилфурфурола, равный 16830 [] ;

L - толщина слоя раствора в кювете, см.

По точной массовой концентрации рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола рассчитывают точную массовую концентрацию основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола по уравнению

,

(2)

где - точная массовая концентрация рабочего стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола;

r - величина разбавления (разведения) основного стандартного раствора при приготовлении рабочего раствора.

Срок хранения раствора при комнатной температуре - не более 3 сут, при температуре 2°С - 4°С - 3 мес, при температуре минус 20 °С - 6 мес.

6.4 Приготовление градуировочных растворов 5-гидроксиметилфурфурола массовой концентрацией 1,0 - 32,0 

Из основного стандартного раствора 5-гидроксиметилфурфурола по 6.3.1 массовой концентрацией 1000  готовят градуировочные растворы N 1 - 4.

Градуировочный раствор N 1 готовят из основного стандартного раствора в соответствии с таблицей 1. Для приготовления градуировочных растворов N 2 - 4 отбирают пипетками соответствующие аликвоты градуировочного раствора N 1, помещают их в мерные колбы и доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивая.

Стандартные градуировочные растворы 5-гидроксиметилфурфурола готовят для построения градуировочной зависимости по четырем точкам, от меньшей массовой концентрации или массовой доли к большей, в соответствии с таблицей 1.

Стандартные градуировочные растворы 5-гидроксиметилфурфурола готовят непосредственно перед проведением измерений.

Таблица 1 - Приготовление стандартных градуировочных растворов 5-гидроксиметилфурфурола

N п/п	N стандартного раствора	Компонент	Вместимость мерной колбы,	Способ приготовления	Массовая концентрация (массовая доля), ()
1	1	5-ГМФ	50	Отбирают 1,6  основного стандартного раствора 5-ГМФ массовой концентрацией* 1000  в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают	32,0
2	2	5-ГМФ	25	Отбирают 0,78** раствора N 1 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают	1,0
3	3	5-ГМФ	25	Отбирают 3,13 раствора N 1 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают	4,0
4	4	5-ГМФ	25	Отбирают 12,5  раствора N 1 в мерную колбу, доводят дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают	16,0
* В данном случае значения массовой концентрации и массовой доли совпадают, поскольку плотность приготавливаемых растворов близка к единице. ** Объемы 5-ГМФ менее 1  вносят с помощью микрошприцов вместимостью 100 или 250 мкл по 4.4, предварительно градуированных по дистиллированной воде.

7 Выполнение измерений методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в пункт 7.1 внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст пункта в предыдущей редакции

7.1 Условия хроматографического анализа

Колонка аналитическая: длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная октадецилсиликагелем, с размером частиц 5 мкм по 4.3.

Элюент: подвижная фаза А по 6.1.1 или Б по 6.1.2.

Температура колонки: комнатная.

Детектирование: УФ, 284 нм.

Скорость подачи элюента: 1,0 /мин.

Объем вводимой пробы: 10 - 20 мкл.

7.2 Условия проведения измерений

Измерения проводят в следующих лабораторных условиях: температура окружающего воздуха (255)°С;

атмосферное давление (9710) кПа;

относительная влажность (6515)%;

частота переменного тока (505) Гц;

напряжение в сети (22010) В.

7.3 Построение градуировочной зависимости

Проводят хроматографический анализ всех градуировочных растворов. Регистрируют площади пиков 5-гидроксиметилфурфурола и строят градуировочный график - зависимость площади пика от массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола в градуировочном растворе.

Процедуры построения градуировочной зависимости выполняют в соответствии с руководством по эксплуатации оборудования и руководством пользователя программным обеспечением. Градуировочную зависимость выражают линейным уравнением

(3)

Правильность построения градуировочной зависимости контролируется значением достоверности аппроксимации ():

.

Из уравнения (3) следует, что площадь пиков стандартных растворов 5-гидроксиметилфурфурола S ( или ) и их массовая концентрация с () или массовая доля с () находятся в соответствующей функциональной зависимости

,

(4)

где k - градуировочный коэффициент,

,

(5)

где - площадь пика 5-гидроксиметилфурфурола при анализе i-го стандартного раствора, или ;

- массовая концентрация или массовая доля 5-гидроксиметилфурфурола при анализе i-го стандартного раствора, ().

Градуировочную зависимость строят при замене оборудования, колонок, изменении условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в подраздел 7.4 внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст подраздела в предыдущей редакции

7.4 Анализ проб

Измерения проводят не менее двух раз в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14).

Регистрируют площадь пика 5-гидроксиметилфурфурола. В случае, если массовая концентрация или массовая доля 5-гидроксиметилфурфурола в пробе настолько максимальна, что площадь соответствующего пика выходит за верхнюю границу диапазона градуировки хроматографа, подготавливают новую пробу с большим разбавлением и измерение повторяют.

Примеры хроматограмм раствора 5-гидроксиметилфурфурола приведены в приложении А.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в раздел 8 внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст раздела в предыдущей редакции

8 Обработка и оформление результатов определения

Массовую концентрацию или массовую долю 5-гидроксиметилфурфурола рассчитывают по градуировочным зависимостям с учетом степени разведения пробы.

Обработку хроматограмм и определение массовой концентрации (массовой доли) аскорбиновой кислоты с(Х), (), проводят с помощью программно-аппаратного комплекса сбора и обработки данных, с использованием градуировочной зависимости

,

(6)

или по формулам с использованием стандартного раствора массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, наиболее близкой к ожидаемой в анализируемой пробе

,

(7)

где k- градуировочный коэффициент, ;

с(Х) - массовая концентрация или массовая доля 5-гидроксиметилфурфурола в анализируемой пробе, ();

- массовая концентрация или массовая доля 5-гидроксиметилфурфурола в стандартном растворе, ();

- площадь пика анализируемого 5-гидроксиметилфурфурола, или ;

- вместимость мерной колбы, взятой для разбавления, ;

- площадь пика анализируемого 5-гидроксиметилфурфурола в стандартном растворе, или ;

- объем пробы, отобранный для анализа, ;

- масса анализируемой пробы после разбавления, г;

- масса анализируемой пробы до разбавления, г.

Все результаты обработки (с помощью программно-аппаратного комплекса или расчетные) должны сходиться.

Расхождение между двумя параллельными определениями (в процентах от среднего значения), выполненными в условиях повторяемости, не должно превышать предела повторяемости (сходимости) , приведенного в таблице 2, при вероятности Р = 0,95.

При соблюдении этого условия за окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений .

Расхождение между двумя результатами измерений, полученными в двух лабораториях при соблюдении условий воспроизводимости [ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.18)] относительно их среднеарифметического значения не должно превышать предела воспроизводимости (см. таблицу 2). При превышении предела воспроизводимости выполняют процедуры в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-6 (пункты 5.3.3, 5.3.4).

Границы относительной погрешности определения массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола , %, при соблюдении условий, регламентированных настоящим методом, при вероятности Р = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблице 2.

Таблица 2 - Основные метрологические характеристики

Наименование показателя	Значение показателя при диапазонах измерений массовой концентрации (массовой доли), ()
	От 1,0 до 10 включ.	Св. 10 до 50 включ.
Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами параллельных измерений) , %, при n = 2	13	2
Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами, полученными в условиях воспроизводимости) , %, при m = 2	20	6
Показатель точности (границы относительной погрешности при Р = 0,95) , %	15	5
Предел обнаружения метода, ()	0,1

Если массовая концентрация (массовая доля) 5-гидроксиметилфурфурола превышает 50  (), то определение массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола проводят после разбавления пробы по 6.2.1 - 6.2.3 с доведением массовой концентрации (массовой доли) 5-гидроксиметилфурфурола в пробе до диапазона от 1 до 50  ().

Окончательный результат определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола представляют в следующем виде:

, при Р = 0,95,

(8)

где - среднее значение результатов двух параллельных определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, ();

- границы абсолютной погрешности определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, (), рассчитанные по формуле

.

(9)

Числовое значение окончательного результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение абсолютной погрешности, содержащее не более двух значащих цифр.

9 Контроль точности результатов определения

9.1 Оперативный контроль повторяемости результатов определения

Оперативный контроль повторяемости результатов определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола проводят при получении каждого результата определения путем сравнения расхождения между результатами двух параллельных определений (в процентах от среднего значения) с пределом повторяемости (сходимости), приведенным в таблице 2.

Повторяемость результатов признают удовлетворительной при условии

.

(10)

При превышении предела повторяемости (сходимости) определение повторяют. При повторном превышении указанного предела выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, их устраняют и определение повторяют.

9.2 Оперативный контроль воспроизводимости результатов определения

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых определений, которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект определения, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости, приведенного в таблице 2. При превышении указанного предела воспроизводимости контрольное определение повторяют. При повторном превышении указанного предела воспроизводимости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

9.3 Оперативный контроль погрешности (точности) результатов определения

Оперативный контроль погрешности (точности) результатов определения осуществляют методом добавок с использованием проб соковой продукции, объем или масса которых должны соответствовать удвоенному количеству, необходимому для проведения измерений. Пробу делят на две равные части. В одну из них добавляют стандарт 5-гидроксиметилфурфурола в таких количествах, чтобы добавка составляла 50% - 150% исходного содержания компонента в пробе, но не превышала верхней границы диапазона определения массовой концентрации или массовой доли компонента с учетом границ погрешности определения (см. таблицу 2). Обе части пробы подвергают измерениям в точном соответствии с требованиями настоящего стандарта.

Результаты контрольных определений признают удовлетворительными, если погрешность определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в добавке не превышает норматива оперативного контроля погрешности (точности), то есть выполняется условие

,

(11)

где - среднее значение двух определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в пробе с добавкой, ();

- среднее значение двух определений массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола в пробе без внесения добавки, ();

- значение добавки 5-гидроксиметилфурфурола, ();

- норматив оперативного контроля погрешности, ();

При проведении внутрилабораторного контроля (Р = 0,95) значение рассчитывают по формуле

.

(12)

При проведении внешнего контроля (Р = 0,95) значение рассчитывают по формуле

,

(13

где - границы относительной погрешности определения массовой концентрации или массовой доли 5-гидроксиметилфурфурола, указанные в таблице 2.

При превышении норматива оперативного контроля погрешности проводят повторные контрольные измерения. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Периодичность контроля погрешности (точности) устанавливается самой лабораторией с учетом фактического состояния работ. При замене оборудования, колонок, реактивов, изменении условий хроматографического анализа или при выявлении несоответствия метрологическим требованиям результатов оперативного контроля или внутреннего аудита.

10 Требования безопасности

10.1 Условия безопасного проведения работ

При работе с химическими реактивами следует соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005 и ГОСТ 12.1.007.

Требования взрывобезопасности - в соответствии с ГОСТ 12.1.010.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила пожаровзрывобезопасности по ГОСТ 12.1.018, по электробезопасности - по ГОСТ 12.1.019 и инструкции по эксплуатации прибора.

10.2 Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений, обработке и оформлению результатов допускаются инженер-химик, техник или лаборант, имеющие высшее или среднее специальное образование, опыт работы в химической лаборатории и изучившие инструкцию по эксплуатации метода высокоэффективной жидкостной хроматографии. Первое применение метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в лаборатории следует проводить под руководством специалиста, владеющего теорией метода высокоэффективной жидкостной хроматографии и имеющего практические навыки в этой области.

Информация об изменениях:

Изменением N 1, утвержденным приказом Росстандарта от 30 августа 2016 г. N 966-ст, в сноски внесены изменения, вступающие в силу с 1 января 2017 г.

См. текст сносок в предыдущей редакции

____________

*(1) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002

*(2) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

*(3) В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002.

*(4) В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

*(5) Например, колонка хроматографическая "BDS Hypersil С18" (250 х 4,6 мм) компании Thermo; материал - силикагель с привитыми группами С18; колонка хроматографическая "AQUASIL С18" (250 х 4,6 мм) компании Thermo; материал - силикагель с привитыми группами С18. Данная информация является рекомендуемой, приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не исключает возможность использования других хроматографических колонок.

Библиография

С изменениями и дополнениями от:

30 августа 2016 г.

Исключена с 1 января 2017 г.

Информация об изменениях:

См. текст Библиографии