Приложение 1. Рекомендуемая методика испытаний концентрирующих патронов Диапак

Приложение 1

Рекомендуемая методика испытаний концентрирующих патронов Диапак

Введение

Каждая партия концентрирующих патронов Диапак П-3, Диапак С16М, Диапак Н, Диапак С, а также партии сорбентов Диасорб А и Диасорб АУ подвергаются выходному контролю в соответствии с ТУ-4215-002-05451931-94 на их соответствие требованиям, предъявляемым к специализированным патронам для твердофазной экстракции микотоксинов. Этим метрологически обеспечивается их производство.

Применение настоящих испытаний рекомендуется проводить в следующих случаях:

- если результат проверки правильности проведения пробоподготовки методом стандартной добавки не соответствует нормативу коэффициента извлечения;

- если патроны Диапак подвергались неправильному хранению или нарушена целостность упаковки;

- в случаях дополнительного сверхнормативного использования регенерируемых патронов (Диапак Н, Диапак П-3).

Приведенные ниже методики проверки патронов Диапак позволяют выявить ошибку по стадиям пробоподготовки. При соответствии характеристик патронов Диапак нормативным требованиям следует искать ошибки в правильности подготовки растворителей и приготовлении растворов, контроле условий упаривания и перерастворения анализируемых проб.

Если среди стадий подготовки пробы присутствует подготовка на патроне Диапак С, рекомендуется начинать анализ возможной потери целевого компонента именно с этого патрона. Это связано с чувствительностью силикагеля к качеству используемых растворителей и прежде всего с содержанием в них воды. Такая специфика сильной зависимости активности патрона Диапак С от условий его хранения и качества используемых растворителей может потребовать оптимизации количества элюента, используемого при работе с этими патронами в конкретной лаборатории.

1. Испытание патронов Диапак А-3 и Диапак П-3 по афлатоксину и зеараленону

Испытание патронов Диапак А-3 проводится совместно с Диапак П-3 из-за низких концентраций афлатоксина и зеараленона, а также их температурной лабильности, приводящей к невозможности концентрирования упариванием. Патрон Диапак П-3 может быть испытан независимо от Диапак А-3, что рекомендуется выполнять потребителю через каждые 10 проб после соответствующей регенерации по п. 5.3.3.

Приготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов 1,0 испытательной смеси, содержащей 0,4 мкг афлатоксина и 4,0 мкг зеараленона в произвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 перенести в сердцевидную колбу и упарить растворители досуха в токе азота при температуре 40°С. Не медленно перерастворить остаток в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению. Ориентировочные значения концентраций: 0,4 - для афлатоксина и 4,0 - для зеараленона. Ввести раствор не менее двух раз в хроматографическую систему и рассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждого из микотоксинов, .

Подготовить патроны Диапак А-3 и Диапак П-3 в соответствии с п.п. 5.3.1 и 5.3.3.

Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 упарить аналогично, перерастворить в 25 мл экстрагента (смеси ацетонитрил-вода - 84:16) и нанести на патрон Диапак А-3 в соответствии с п. 5.1.1. Полученные 20 мл элюата сконцентрировать на патроне Диапак П-3 в соответствии с п. 5.1.1. Концентрат перерастворить и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту, получив значение .

Рассчитать значение по формуле (1). Значение . Коэффициент извлечения, , должен быть не менее 90% - для афлатоксина и 85% - для зеараленона.

При испытании одного патрона Диапак П-3 вторую аликвоту объемом 0,25 после упаривания перерастворить в 40 мл смеси экстрагент-вода (1:1) (смеси ацетонитрил-вода 42:58) и сконцентрировать в соответствии с п. 5.1.1. Рассчитать значение , принимая . Коэффициент извлечения, должен быть не менее 95% - для афлатоксина и 95% - зеараленона.

2. Испытание патронов Диапак АУ-3 по дезоксиниваленолу и Т-2 токсину

Приготовить из имеющихся стандартных растворов микотоксинов 1,0 испытательной смеси, содержащей по 20 мкг дезоксиваленола и Т-2 токсина в произвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 перенести в сердцевидную отгонную колбу и упарить досуха на ротационном испарителе при температуре . Перерастворить остаток в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению. Ориентировочное значение концентраций: 20 - для дезоксиниваленола и Т-2 токсина. Для градуировки хроматографической системы ввести раствор не менее двух раз и рассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков каждого из микотоксинов, .

Подготовить патрон Диапак АУ-3 по п. 5.3.2.

Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 упарить аналогично, перерастворить в 20 мл экстрагента (смеси ацетонитрил-вода 84:16) и нанести на патрон Диапак АУ-3, в соответствии с п. 5.5.2. После упаривания досуха остаток перерастворить и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту, получив значение . Рассчитать значение по формуле 1. Значение .

Коэффициент извлечения должен быть не менее 95% - для дезоксиниваленола и Т-2 токсина.

3. Испытания патрона Диапак Н

Концентрирующие патроны Диапак Н являются универсальными регенерируемыми патронами для окончательной очистки афлатоксина , зеараленона, дезоксиниваленола и Т-2 токсина, поэтому испытание рекомендуется выполнять через каждые 10 проб после очередной регенерации по п. 5.3.4. Патроны Диапак Н обеспечивают тонкую очистку указанных микотоксинов с высокими метрологическими характеристиками ( не менее 90%), поэтому значения менее 90% чаще всего свидетельствуют об ошибках в приготовлении элюентов или о недостаточной чистоте растворителей.

3.1. Испытание по афлатоксину и зеараленону

Сухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси по п. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести по условиям п. 5.1.2 на подготовленный (см. п. 5.3.4) патрон Диапак Н. После элюирования и упаривания Пробы З и Пробы А немедленно перерастворить их в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 1, получив значение и по каждому из микотоксинов.

Рассчитать значение по формуле (1). Значение . Коэффициент извлечение должен быть не менее 90% - для афлатоксина и зеараленона.

3.2. Испытания по дезоксиниваленолу и Т-2 токсину

Сухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси по п. 2 перерастворить в 0,5 мл хлороформа и нанести по условиям п. 5.1.2 на подготовленный патрон Диапак Н. После элюирования и упаривания Пробу Д и Пробу Т перерастворить в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 2, получив значения и по каждому из микотоксинов.

Рассчитать значения по формуле (1). Значение . Коэффициент извлечения должен быть не менее 90% для дезоксиниваленола и Т-2 токсина.

4. Испытания патрона Диапак С

Концентрирующие патроны Диапак С являются одноразовыми патронами для окончательной очистки афлатоксина и зеараленона, а также афлатоксина и патулина. Патроны Диапак С обеспечивают тонкую очистку указанных микотоксинов с хорошими метрологическими характеристиками . Для достижения указанных характеристик необходимо установить оптимальный объем элюирования моделированием порционного элюирования ( порции по 3 мл) целевых фракций в ходе настоящих испытаний.

Оптимальную схему элюирования, т.е. необходимое число порций по 3 мл, потребитель устанавливает по достижению суммарного коэффициента извлечения не ниже указанного норматива. Установленный объем элюирования подлежит проверке при смене партии растворителей и их смесей, используемых для тонкой очистки микотоксинов.

4.1. Испытания по афлатоксину и зеараленону

Подготовить патрон Диапак С в соответствии с п. 5.3.5.

Сухой остаток упаренной второй аликвоты испытательной смеси по п. 1 немедленно перерастворить в 0,5 мл бензола и нанести на патрон Диапак С в соответствии с п. 5.1.3. После элюирования и раздельного упаривания трех фракций Пробы З и трех фракций Пробы А немедленно перерастворить их в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 1, получив по три значения и одному S' по каждому из микотоксинов.

Рассчитать по формуле (1) для каждой из трех фракций Проб З и А . Суммарный коэффициент извлечения должен быть не менее 90% - для афлатоксина и 85% - для зеараленона. Определить минимально возможное число последовательных фракций, обеспечивающее суммарный не ниже норматива. Найденное число фракций (от 1 до 3) и определяет оптимальный объем элюирования данных микотоксинов с патрона Диапак С данной партии с приготовленными растворителями.

Если значение суммарного меньше нормативного значения, то это свидетельствует об ошибках в приготовлении элюирующих смесей и/или о недостаточной чистоте растворителей, в особенности с точки зрения содержания в них воды.

4.2. Испытание по афлатоксину

Приготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 испытательной смеси, содержащей 0,1 мкг афлатоксина в произвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 перенести в сердцевидную колбу и упарить раствор в токе азота при температуре 40°С. Немедленно перерастворить остаток в растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению. Ориентировочные значения концентраций афлатоксина соответственно. Для проведения градуировочного эксперимента ввести раствор не менее двух раз в хроматографическую систему и рассчитать среднее арифметическое значение площадей пиков афлатоксина , .

Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 упарить, как описано выше, перерастворить в 6 мл хлороформа и нанести в условиях п. 6.5 на подготовленный (см. п. 6.3.2) патрон Диапак С. После элюирования и раздельного упаривания трех последовательных фракций Пробы М немедленно перерастворить их в растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту, получив три значения по афлатоксину .

Рассчитать по формуле (1) для каждой их трех фракций Пробы М . Суммарный коэффициент извлечения для афлатоксина должен быть не менее 85%. Найти оптимальный объем элюирования афлатоксина с патрона Диапак С по алгоритму, приведенному в п. 4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.

4.3. Испытание по патулину

Приготовить из имеющегося стандартного раствора 1,0 испытательной смеси, содержащей 4,0 мкг патулина в произвольной смеси бензола и ацетонитрила. Аликвоту смеси объемом 0,25 перенести в сердцевидную колбу и упарить растворитель в токе азота при температуре . Немедленно перерастворить остаток в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению. Ориентировочное значение концентрации патулина: 4,0 . Для проведения градуировочного эксперимента ввести раствор не менее двух раз в хроматографическую систему и рассчитать среднее арифметическое значение площади пика патулина, .

Вторую аликвоту смеси объемом 0,25 упарить аналогично, перерастворить в 3 мл 15%-ного этилацетата в бензоле и нанести в условиях п. 7.5.2 на подготовленный (см. п. 7.3.2) патрон Диапак С. После элюирования и раздельного упаривания трех последовательных фракций Пробы П немедленно перерастворить их в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 4.3, получив три значения по патулину.

Рассчитать значение по формуле (1) для каждой их трех фракций Пробы П. . Суммарный коэффициент извлечения для патулина должен быть не менее 75%. Найти оптимальный объем элюирования патулина с патрона Диапак С по алгоритму, приведенному в п. 4.1. Там же приведен алгоритм поиска ошибок.

5. Испытание патрона Диапак П-3 по патулину

Вторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.3 объемом 0,25 после упаривания перерастворить в охлажденной до воде, подкисленной уксусной кислотой до рН 4,0, и сконцентрировать в условиях п. 7.5.1 на подготовленном (см. п. 7.3.1) патроне Диапак П-3. После элюирования и высушивания упарить этилацетатный экстракт досуха в токе азота при температуре , немедленно перерастворить в 0,25 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 4.3, получив значения и .

Рассчитать значение по формуле (1). Значение . Коэффициент извлечения для патулина должен быть не менее 80%.

6. Испытание патрона Диапак С16М по афлатоксину

Вторую аликвоту испытательной смеси по п. 4.2 объемом 0,25 после упаривания перерастворить в 20 мл 5%-ного ацетонитрила в воде и нанести в соответствии с п. 6.4.1 на подготовленный по п. 6.3.1 патрон Диапак С16М. После элюирования и высушивания упарить хлороформный экстракт М на ротационном испарителе при температуре не выше 40°С, немедленно перерастворить его в 0,25-1,0 растворителя, соответствующего конечному хроматографическому определению, и проанализировать аналогично градуировочному эксперименту по п. 4.2, получив значения () и () для афлатоксина . Рассчитать по формуле (1) . Коэффициент извлечения, , по афлатоксину должен быть не менее 95%.