Приложение Г (обязательное). Метод определения содержания глюкозы и ксилозы

Приложение Г
(обязательное)

Метод
определения содержания глюкозы и ксилозы

Г.1 Область применения

Метод распространяется на растворимый кофе и устанавливает метод определения массовых долей общей глюкозы и ксилозы с использованием высокоэффективной анионообменной хроматографии

Г.2 Сущность метода

Метод основан на определении общего количества углеводов, присутствующих в растворе после гидролиза водным раствором соляной кислоты, с помощью ионной хроматографии

Г.3 Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, материалы, реактивы

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г 2-го класса точности по ГОСТ OIML R 76-1.

Насос водоструйный по ГОСТ 25336.

Фильтры бумажные складчатые средней плотности из лабораторной фильтровальной бумаги по ГОСТ 12026.

Фильтры сменные мембранные диаметром пор 0,2 мкм.

Хроматограф жидкостный, не содержащий металлических частей, с колонкой, заполненной анионообменным сорбентом, устойчивым к действию щелочей, с предколонкой (защитной колонкой), заполненной тем же сорбентом, устройством для послеколоночного добавления щелочи в подвижную фазу и импульсным амперометрическим детектором с золотым электродом в комплекте с устройством регистрации и обработки хроматографических данных.

Патроны концентрирующие с рабочим объемом 1 - 2 , заполненные обращенно-фазовым сорбентом с октадецильными группами и анионообменным сорбентом.

Колбы мерные 2-100-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры градуированные высокие 1-100-2, 1-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 2-1-2-5, 2-1-2-10, 2-1-2-25 по ГОСТ 29227.

Термометры жидкостные стеклянные по ГОСТ 28498.

Часы по ГОСТ 26272.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., раствор массовой долей 50%.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., плотностью 1190 , стандартный раствор молярной концентрации 1,00 .

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деминерализованная (удельное сопротивление не менее 18 МОм/см).

Глюкоза по ГОСТ 6038.

Ксилоза с содержанием основного вещества не менее 99%.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, посуды и материалов, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам, и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов, по качеству не хуже вышеуказанных.

Г.4 Приготовление растворов

Г.4.1 Элюент 1(S1) - дистиллированная или деминерализованная (удельное сопротивление не менее 18 МОм/см) вода

Воду фильтруют через сменный мембранный фильтр с отверстиями диаметром 0,2 мкм. Дегазируют продувкой гелием в течение 20 - 30 мин.

Г.4.2 Элюент 2(S2) - раствор гидроокиси натрия молярной концентрации 300

К 985  дегазированной воды прибавляют пипеткой 15,6  раствора гидроокиси натрия.

Срок хранения раствора в герметичной посуде не более 1 мес.

Г.4.3 Приготовление основных градуировочных растворов углеводов

Готовят свежие растворы глюкозы и ксилозы. Взвешивают (100,00,1) мг каждого углевода в отдельные мерные колбы вместимостью 100  и доводят до метки дегазированной водой. Получают основные градуировочные растворы массовой концентрации 1000 .

Г.4.4 Приготовление рабочих градуировочных растворов углеводов

Рабочие градуировочные растворы готовят разведением основных градуировочных растворов до массовых концентраций углеводов, близких к ожидаемым массовым концентрациям их в анализируемом растворе. Допускается приготовление смешанных градуировочных растворов из основных растворов, если известно время удерживания каждого углевода в оптимальных условиях хроматографирования.

Г.5 Порядок проведения анализа

Г.5.1 Подготовка пробы для измерения

Взвешивают (300,00,1) мг растворимого кофе в мерную колбу вместимостью 100 . Прибавляют 50  соляной кислоты (стандартный раствор молярной концентрации 1,00 ) и перемешивают. Помещают колбу на кипящую водяную баню на 2,5 ч.

Уровень нагреваемого раствора пробы должен быть всегда ниже уровня воды в бане. Через каждые 30 мин раствор встряхивают вручную. Содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, выдерживая колбу под струей водопроводной воды. Доводят до метки водой и фильтруют раствор через складчатый бумажный фильтр. 3  фильтрата пропускают через концентрирующий патрон, заполненный анионообменным сорбентом. Первый кубический сантиметр фильтрата отбрасывают.

Г.5.2 Хроматографический анализ

Градуировочные и испытуемые растворы углеводов фильтруют через мембранные фильтры диаметром пор 0,2 мкм.

Хроматографический анализ градуировочных и анализируемых растворов проводят в соответствии с параметрами, приведенными в таблицах Г.1 и Г.2.

Идентификацию и оценку количества углеводов в растворе пробы проводят сравнением со временем удерживания и площадями соответствующих пиков градуировочных растворов.

Таблица Г.1 - Условия анализа

Наименование операции, показателя, оборудования	Параметры
Объем анализируемого раствора, инжектируемый в хроматограф, Скорость протока подвижной фазы, Скорость послеколоночного добавления элюента S2, Температура, °С Детектор	20 1,0 0,6 18 - 25 Кювету сравнения заполняют элюентом 2 (S2) Устанавливают оптимальные условия, рекомендованные изготовителем

Таблица Г.2 - Режим элюирования и регенерации колонки

Элюирование	Время, мин	Элюент 1 (S1),	Элюент 2 (S2),	Последовательность операций
Изократическое	0	100,0	0	Начало сбора данных
	50,0	100,0	0	Окончание сбора данных
	50,1	0	100,0	Начало промывки
	65,1	0	100,0	Окончание промывки
	65,1	100,0	0	Начало вывода на рабочий режим
	80,0	100,0	0	Окончание вывода на рабочий режим

Чтобы учесть изменения во времени удерживания и значениях пиков, через каждые четыре анализа анализируемых растворов вводят градуировочный раствор.

Г.6 Обработка результатов

Массовую долю углевода в растворимом кофе, , % в пересчете на сухое вещество, вычисляют по формуле

,

(Г.1)

где 100 - коэффициент перевода в проценты;

А - площадь пика конкретного углевода в испытуемом растворе;

- масса углевода в градуировочном растворе, г;

V - объем анализируемого раствора, ;

- площадь пика конкретного углевода в градуировочном растворе;

- масса продукта в анализируемом растворе в пересчете на сухое

вещество, г;

- объем градуировочного раствора с учетом разделения, .

Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

За окончательный результат принимают среднеарифметическое значение двух параллельных измерений с округлением до второго десятичного знака.

Относительное стандартное отклонение сходимости от среднего из двух параллельных определений не должно превышать 4,5% при массовой доле углеводов более 0,3%.

Относительное стандартное отклонение воспроизводимости двух независимых результатов измерений массовых долей углеводов, выполненных в разных лабораториях в разное время, не должно превышать 14,3% от среднего из двух независимых результатов измерений при массовых долях углеводов более 0,3%.

Г.7 Оформление результатов анализа

В протоколе анализа указывают:

- метод отбора проб;

- метод анализа;

- результаты анализа для каждого углевода с указанием фактических значений показателей сходимости и воспроизводимости.

Должны быть также отражены все детали анализа, которые могли повлиять на результат. Протокол должен содержать всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы.