Приложение 5. Методика определения токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов

Приложение 5

Методика определения токсичности фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов
(утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 4 июня 1980 г.)

При санитарной оценке концентрированных кормов их необходимо исследовать на токсичность, которая может быть обусловлена за счет наличия в кормах химических соединений и микотоксинов. Для этой цели в соответствии с ГОСТ отбирают средние пробы кормов и отправляют в лабораторию на исследование, в котором определяют общую токсичность, а также исследуют на присутствие микотоксинов.

1. Реактивы, посуда, приборы

Ацетон, ч., ч.д.а., ГОСТ 2603.

Гексан, ТУ 609-3375-73.

Хлороформ для наркоза (свежеперегнанный).

Химические стаканы емкостью 700-800 мл, диаметром от 11 до 18 см.

Делительные воронки на 250 мл.

Колбы плоскодонные с притертой пробкой для экстракции емкостью 500 мл.

Баня водяная или песочная электрическая.

Шуттель-аппарат.

Фарфоровые чашки.

Пипетки градуированные на 10 мл.

Цилиндры стеклянные емкостью на 100 мл.

Фильтры обеззоленные, ТУ-09-1678-72.

2. Определение общей токсичности

2.1. Принцип методики.

Принцип методики основан на извлечении из фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов ацетоном жиро- и водорастворимых фракций токсических веществ и последующем воздействии этих фракций на аквариумных рыб-гуппи (см. приложение). Методика позволяет определить токсичность концентрированных кормов в течение суток.

2.2. Ход анализа на общую токсичность.

Пробу фуражного зерна (ячмень, овес, пшеница, горох, кукуруза, просо) 50 г тщательно измельчают на лабораторной мельнице (отруби и комбикорма экстрагируют без измельчения), помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании на шуттель-аппарате в течение двух часов. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в фарфоровую чашку и выпаривают под тягой на водяной бане (Т° 55-60°) досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетона и переносят его в химический стакан (емкостью 700-800 мл, диаметром 11-15 см) с 500 мл воды из аквариума комнатной температуры (17-20°). Экстракты из комбикормов, кукурузы, гороха и проса после растворения в воде помещают в бытовой холодильник на 40-45 мин при Т° 6-7°С. По истечении срока экстракты фильтруют через небольшой слой ваты, подогревают до исходной температуры (17-20°), помещают 5 рыб-гуппи, независимо от пола, взрослых, за которыми ведут наблюдения, отмечая их гибель через 24 часа (гуппи, вышедшие из опыта, выбраковываются).

3. Определение микотоксинов

3.1. Принцип методики

Методика основана на извлечении ацетоном микотоксинов из фуражного зерна, продуктов его переработки и комбикормов, частичной очистке экстракта гексаном от липидов и некоторых неполярных хлор- и фосфорорганических соединений с последующей переэкстракцией микотоксинов хлороформом и исследованием на рыбах-гуппи. Методика позволяет определить токсичность в течение 24-30 часов.

Примечание: Если фуражное зерно, продукты его переработки и комбикорм окажутся токсичными, такие партии кормов немедленно исключаются из рациона и проводят дополнительные дифференциальные исследования на хлор- и фосфорорганические соединения, препараты ртути, алкалоиды (по ранее разработанным методикам) и микотоксины.

3.2. Ход анализа на микотоксины.

Пробу фуражного зерна 50 г тщательно измельчают на лабораторной мельнице (отруби и комбикорма экстрагируются без измельчения), помещают в плоскодонную колбу с притертой пробкой, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют при встряхивании на шуттель-аппарате в течение двух часов или в статическом состоянии - 20 часов. Экстракт фильтруют через бумажный обеззоленный фильтр в фарфоровую чашку и упаривают под тягой на водяной бане (55-60°) до объема 45-50 мл. Остаток переносят в делительную воронку, в которую добавляют 100 мл воды. Содержание чашки смывают 5 мл ацетона, сливают в делительную воронку и встряхивают одну минуту. Затем в воронку вносят 50 мл гексана и встряхивают 1-2 минуты. После разделения слоев - нижний сливают в другую делительную воронку и дважды экстрагируют 40 мл хлороформа (в каждом случае встряхивают две минуты). Гексановую фракцию, при необходимости, исследуют на хлор- и фосфорорганические соединения. После разделения слоев хлороформные фракции (нижний слой) сливают в фарфоровую чашку и упаривают под тягой на водяной бане (55-60°) до исчезновения хлороформа (досуха). Сухой остаток растворяют 5 мл ацетона и переносят его в химический стакан с 500 мл воды (17-20°), взятой из аквариума. В раствор экстракта помещают пять гуппи независимо от пола и возраста за которыми ведут наблюдение, отмечая их гибель через 24 часа.

4. Результаты определения

В зависимости от степени токсичности исследуемого корма гуппи погибают в сроки, указанные в таблице.

В качестве контроля используют однопроцентный водный раствор ацетона, в котором гуппи в течение суток должны остаться живыми. Контроль ставится с целью определения качества ацетона.

Оценка степени токсичности исследуемого корма

Степень токсичности кормов	Количество погибших гуппи, штук	Время гибели (в часах)
Нетоксичный	Не более 1	В течение 24
Слабо токсичный	2-4	"       24
Токсичный	5	"       24

Взамен метода, утвержденного Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 16 февраля 1975 г., методики, утвержденной 10 декабря 1976 г., и изменений от 31 октября 1977 г.