Межгосударственный стандарт ГОСТ 31477-2012 "Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2012 г. N 488-ст)

Meat and meat products. Immune method of determination of animal (pork, beef, mutton) proteins

Дата введения - 1 июля 2013 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом мясной промышленности имени В.М. Горбатова Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова Россельхозакадемии)

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 41 от 23 - 24 мая 2012 г.)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Азербайджан	AZ	Азстандарт
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Кыргызстан	KG	Кыргызстандарт
Молдова	MD	Молдова-Стандарт
Российская Федерация	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 12 октября 2012 г. N 488-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.

5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53514-2009

6 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка.

Стандарт предназначен для идентификации свиного, говяжьего или бараньего белка в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9656-75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 20903-75 Кюветы прямоугольные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования

ГОСТ 25011-81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26678-85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю "Национальные стандарты", составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Сущность метода

Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных - вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.

4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода

4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1% до 85%.

4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.

Таблица 1

Наименование показателя	Диапазон измерений массовой доли, %	Границы относительной погрешности, , %	Предел повторяемости, , %	Предел воспроизводимости, , %
Массовая доля животного белка, %	От 1 до 85 включ.	30	24	38

5 Отбор проб

5.1 Отбор проб - по [1].

5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0°С до 5°С до полного завершения испытания в течение суток.

Допускается хранение проб при температуре от минус 20°С до минус 10°С в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исследование.

6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы

Спектрофотометр типа "Аквилон"*, обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм.

Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.

Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более 0,1 мг.

Микроизмельчитель тканей или гомогенизатор с частотой вращения 8000 - 24000 об/мин.

Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.

Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.

Аппарат встряхивающий.

Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.

Дозатор пипеточный переменного объема.

Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250  по ГОСТ 1770.

Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250  по ГОСТ 1770.

Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.

Диагностическая сыворотка.

Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18% для использования в качестве контрольного образца.

Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85%.

Кислота борная по ГОСТ 9656, ч.

2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9%.

Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N', N'-тетрауксусной кислоты (трилон Б) по ГОСТ 10652, ч.д. а.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

7 Подготовка к выполнению измерений

7.1 Приготовление растворов

7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора

Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б массой 1,5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250  и при перемешивании добавляют 100 - 150  дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.

7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора

В мерную колбу вместимостью 250  с помощью мерного цилиндра вносят 50  концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1  0,012 г ТРИС, 0,001 г трилона Б и 0,0044 г борной кислоты.

7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы

7.2.1 Навеску пробы массой 5,0 г перемешивают с 5  рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5°С до 8°С, периодически встряхивая в течение 5 мин.

7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.

7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика

Навески по 25,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г соевого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100, 30, 15 и 3,5 г соевого изолята.

Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Получают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1,3%; 5,0%; 17,5%; 41,4%; 58,5% и 86,1%.

Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.

8 Проведение измерений

8.1 Измерение испытуемых растворов

8.1.1 20  экстракта пробы смешивают с 400  рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при = 405 нм (контроль), затем добавляют 20  диагностической сыворотки, содержащей антитела, к определяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического белка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см.

8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.

8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в этих растворах.

8.2 Построение градуировочного графика

Градуировочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1 массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясорастительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2 - 4.

Таблица 2

Оптическая плотность среды () при 405 нм	0,070	0,075	0,100	0,158	0,200	0,260
Массовая доля свиного белка в образце С, % от общего белка	1,3	5,0	17,5	41,4	58,5	86,1

Таблица 3

Оптическая плотность среды () при 405 нм	0,065	0,085	0,110	0,135	0,155	0,175	0,200	0,225	0,250	0,275
Массовая доля говяжьего белка в образце С, % от общего белка	1	10	20	30	40	50	60	70	80	90

Таблица 4

Оптическая плотность среды () при 405 нм	0,060	0,090	0,115	0,130	0,160	0,170	0,190	0,230	0,260	0,280
Массовая доля бараньего белка в образце С, % от общего белка	11	110	220	330	440	550	660	770	880	990

9 Обработка результатов

9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка , %, относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формуле

,

(1)

где С - среднеарифметическое значение массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе, %;

- массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля, %.

9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

,

(2)

где и - результаты параллельных определений массовой доли животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка, определенные по градуировочному графику, %;

- предел повторяемости, приведенный в таблице 1.

Результат вычислений округляют до целого числа.

10 Требования безопасности

10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.

_____________________________

* Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта.

Библиография

[1]

ИСО 17604:2003

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Отбор проб с туши для микробиологического анализа