Приложение А (обязательное). Состав и приготовление питательных сред

Приложение А
(обязательное)

Состав
и приготовление питательных сред

А.1 Питательная среда K-агар*

А. 1.1 Состав:

- дрожжевой экстракт - 2,0 г;

- пептон мясной ферментативный - 5,0 г;

- глюкоза - 1,0 г;

- твин 80 - 1,0 г;

- агар питательный - от 15 до 18 г;

- вода - 1000 .

А.1.2 Приготовление

Компоненты среды растворяют в дистиллированной воде, стерилизуют путем автокпавирования в течение 15 мин при температуре 121°С, После автокпавирования охлаждают до температуры 50°С и доводят до (3,70,1) ед. рН соляной или ортофосфорной кислотой.

Готовую среду хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С в соответствии с ГОСТ 10444.1.

Готовая среда имеет бледно желтую окраску, слегка опалесцирует.

А.1.3 Ростовые характеристики эталонных штаммов через 3 - 5 сут при температуре 45°С - 46°С приведены в таблице А.1.

Таблица А.1

Штаммы микроорганизмов	Рост
Alicyclobacillus acidocaldarius (27009) Alicyclobacillus acidoterrestris (49028) Alicyclobacillus acidocaldarius (43030) Escherichia coli (25922) Staphylococcus aureus (25923)	Скудный или хороший Обильный Скудный или хороший Нет роста Нет роста
Примечание - В скобках указан номер штамма в коллекции АТСС (American Type Culture Collection - Американская коллекция типовых культур).

А.2 Питательная среда VSG-агар*

А.2.1 Состав:

- дрожжевой экстракт - 2,0 г;

- глюкоза - 1,0 г;

- крахмал растворимый - 2,0 г;

- агар питательный - 15,0 г;

- вода - 1000 .

А.2.2 Приготовление

Компоненты среды растворяют в дистиллированной воде, стерилизуют путем автокпавирования в течение 15 мин при температуре 121°С. После автокпавирования охлаждают примерно до температуры 50°С и доводят до (3,70,1) ед. рН соляной кислотой.

Готовую среду хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С в течение 1 сут.

Готовая среда имеет бледную окраску, слегка опалесцирует.

А.2.3 Ростовые характеристики эталонных штаммов через 3 - 5 сут при температуре 45°С приведены в таблице А.2.

Таблица А.2

Штаммы микроорганизмов	Рост
Alicyclobacillus acidocaldarius (27009) Alicyclobacillus acidoterrestris (49028) Alicyclobacillus acidocaldarius (43030)	Обильный Обильный Обильный
Примечание - В скобках указан номер штамма в коллекции АТСС.

А.3 Питательная среда YSG-бульон

Состав питательной среды YSG-бульон аналогичен составу среды YSG-агар, за исключением агара.

При приготовлении YSG-бульона рекомендуется отрегулировать рН перед автоклавированием (в отличие от приготовления YSG-агара).

А.4 Питательная среда ВАТ-Агар*

А.4.1 Состав:

- дрожжевой экстракт - 2,0;

- глюкоза - 5,0;

- хлорид кальция - 0,26066;

- магния сульфат - 0,50;

- аммония сульфат - 0,20;

- калия дигидрофосфат - 3,0;

- цинка сульфат - 0,00018;

- меди сульфат - 0,00016;

- марганца сульфат - 0,00015;

- кобальта хлорид - 0,00018;

- борная кислота - 0,00010;

- натрия молибдат - 0,00030;

- агар питательный - от 18 до 20 г (в зависимости от желирующих свойств агара);

- вода - 1000 .

А.4.2 Приготовление

Компоненты среды растворяют в дистиллированной воде, нагревают, при необходимости, для полного растворения и стерилизуют автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Кислотность среды доводят до (4,00,2) ед. рН с помощью соляной кислоты или раствора NaOH. После автоклавирования среду охлаждают примерно до температуры 50°С и разливают в стерильные чашки Петри.

Готовую среду хранят в холодильнике при температуре от 2°С до 8°С в течение 1 сут.

Готовая среда имеет бледно-янтарную окраску, слегка опалесцирует.

А.4.3 Ростовые характеристики эталонных штаммов через 3 - 5 сут при температуре 45°С или через два - три дня при температуре 65°С приведены в таблице А.4.

Таблица А.4

Штаммы микроорганизмов	Рост
Alicyclobacillus acidocaldarius (27009) Escherichia coii (25922) Staphylococcus aureus (25923) Saccharomyces cerevisiae (19615) Candida albicans (10231)	Хороший или обильный Нет роста Нет роста Нет роста Нет роста
Примечание - В скобках указан номер штамма в коллекции АТСС.

А.5 Питательная среда ВАТ-бульон

Состав питательной среды ВАТ-бульон аналогичен составу среды ВАТ-агар за исключением агара. При приготовлении ВAT-бульона рекомендуется выполнить регулировку рН перед автоклавированием (в отличие от приготовления ВАТ-агара).