Приложение В (справочное). Обмен пробами для валидации метода культивирования

Приложение В
(справочное)

Обмен пробами для валидации метода культивирования

Для проверки применяемости метода культивирования, установленного в настоящем стандарте, было проведено три испытания: i) испытание 1 с использованием пробы пыли, ii) испытание 2 с использованием загрязненного материала и iii) испытание 3 с использованием чашек Петри, полученных методом осаждения. Все пробы для испытаний были подготовлены одной референтной лабораторией и отосланы с курьером в лаборатории, участвующие в испытании. В испытании участвовали семь референтных лабораторий, персонал которых был подробно ознакомлен с методом культивирования. Персонал других 25 - 30 лабораторий, участвующих в испытании, был в большей или меньшей степени ознакомлен с методом культивирования.

При испытании 1 проба пыли была разделена на фракции, и ее порции с размером частиц 100 мкм были отправлены в лаборатории, участвующие в испытании. Культивирование осуществляли на агаре DG18 и агаре на солодовом экстракте в соответствии с настоящим стандартом. Результаты приведены на рисунке В.1.

Результаты, полученные в семи референтных лабораториях, хорошо согласуются. Однако для других лабораторий стандартное отклонение результатов анализа было значительно больше. Разнообразие видов в пробе пыли было очень высоким, что не позволило провести подробный статистический анализ результатов измерений. Таким образом, результаты измерений приведены только для видов грибков.

Испытание 2 проводили путем культивирования грибков шести различных видов на образце материала (древесина) для уменьшения разнообразия видов в пробе. Использовали грибки следующих видов: Aspergillus restrictus, Aspergillus sydowii, Aspergillus versicolor, Penicillium brevicompactum, Penicillium expansum и Acremonium strictum. Образец древесины был гомогенизирован и разослан на анализ в лаборатории, участвующие в испытании. Культивирование осуществляли на агаре DG18 и агаре на солодовом экстракте в соответствии с настоящим стандартом. Результаты измерений приведены на рисунке В.2.

Результаты, полученные в семи референтных лабораториях, также хорошо согласовывались. Стандартное отклонение результатов, полученных другими лабораториями, участвовавшими в испытании, снова было значительно выше. В большинстве лабораторий были проблемы с определением вида главным образом Aspergillus restrictus и Acremonium strictum.

В испытании 3 использовали пробы, отобранные методом осаждения на чашки Петри с агаром из воздуха замкнутого помещения и соответствующего атмосферного воздуха. Все пробы воздуха объемом 100 л были отобраны одной референтной лабораторией в течение одного дня с использованием пяти импакторов одновременно. Сначала были отобраны пробы атмосферного воздуха (чашки Петри с номерами от 1 до 140 включительно), а затем воздуха замкнутого помещения (чашки Петри с номерами от 280 до 420 включительно). В замкнутом помещении находился источник выделения Aspergillus versicolor. По две чашки Петри с агаром DG18 и по две чашки Петри с агаром на солодовом экстракте, полученные для воздуха замкнутого помещения и атмосферного воздуха, были отправлены в каждую лабораторию, участвующую в испытаниях для культивирования и обнаружения грибков. Каждая лаборатория получила набор чашек Петри, полученных в начале отбора проб, и одну чашку Петри, полученную в конце отбора проб. Результаты приведены на рисунках В.3а) и В.3b).

"Рисунок В.1 - Результаты подсчета колоний в пробе пыли"

"Рисунок В.2 - Результаты подсчета колоний на образце материала"

"Рисунок В.3 - Результаты подсчета колоний на чашках Петри с агаром, полученных при отборе проб методом осаждения в воздухе замкнутого помещения"

"Рисунок В.3 - Окончание"