4 Метод В. Жидкость - жидкостное разделение диметилформамидом (ДМФА) и очистка на колонке, заполненной оксидом алюминия

4 Метод В. Жидкость - жидкостное разделение диметилформамидом (ДМФА) и очистка на колонке, заполненной оксидом алюминия

4.1 Сущность метода

(См. ссылки [4], [5]).

Хлорорганические соединения вместе с жиром экстрагируют из пробы по методике, описанной в ISO 3890-1/IDF 75-1 (А.6), затем остатки разделяют, используя диметилформамид. После добавления раствора сульфата натрия хлорорганические соединения далее разделяют н-гексаном. Органическую фазу очищают, применяя хроматографию на нейтральном оксиде алюминия с использованием н-гексана в качестве элюирующего растворителя. Элюат выпаривают и анализируют, используя газожидкостную хроматографию (ГЖХ).

Для молока и масла описаны специальные методы.

4.2 Реактивы

Применяют реактивы только установленной аналитической квалификации, если не установлено иное, а также дистиллированную или деминерализованную воду или воду эквивалентной чистоты.

4.2.1 н-гексан [] с температурой кипения 68 - 70°С.

Проверяют методом газовой хроматографии на чистоту при рабочих условиях. Перегоняют над гидроксидом калия, если необходимо.

4.2.2 Ацетон [] общего назначения, лабораторного качества.

4.2.3 Диметилформамид (ДМФА).

Проверяют н-гексановый экстракт ДМФА водного раствора ДМФА на наличие интерферирующих пиков, используя газожидкостную хроматографию. Если необходимо, повторно перегоняют растворитель и собирают фракцию с температурой кипения 152 - 154°С.

4.2.4 н-гексан, насыщенный диметилформамидом.

4.2.5 Диметилформамид, насыщенный н-гексаном.

4.2.6 Песок, промытый кислотой.

Нагревают при температуре 500°С в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.

4.2.7 Сульфат натрия () гранулированный, безводный.

Нагревают при температуре 500°С в течение 4 ч, затем охлаждают и хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой.

4.2.8 Оксид алюминия () нейтральный, активированный.

Нагревают оксид алюминия до температуры 500°С в течение 4 ч, затем охлаждают. Осторожно добавляют 7 частей воды к 93 частям оксида алюминия (массовая доля) и тщательно перемешивают твердую фазу в закрытом сосуде в течение не менее 90 мин. Сосуд хранят хорошо закупоренным и используют оксид алюминия в течение 10 дней.

4.2.9 Раствор сульфата натрия, 2-процентный раствор.

4.3 Оборудование

Применяют обычное лабораторное оборудование.

4.3.1 Прибор Сокслета для экстрагирования.

4.3.2 Роторный испаритель (Kuderna-Danish или эквивалентный) с колбой вместимостью 500  и прикрепленной градуированной пробиркой.

4.3.3 Высокоскоростной смеситель.

4.3.4 Хроматографические колонки внутренним диаметром 12 мм и длиной 300 мм с запорными кранами из политетрафторэтилена (ПТФЭ).

4.3.5 Микроколонка Snyder*(3).

4.4 Методика

4.4.1 Экстракция жира и хлорорганических соединений

4.4.1.1 Общие методы

См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (приложение А).

4.4.1.2 Специальные методы

4.4.1.2.1 Молоко

В вихревую мешалку вместимостью 250  наливают в следующем порядке: 40  хорошо перемешанного молока, 80  ацетона (4.2.2) и 80  н-гексана (4.2.1). Гомогенизируют смесь в течение 3 мин. Затем немедленно переливают ее в центрифужную пробирку вместимостью 250 , промывают лопасти мешалки 10  н-гексана, затем 5  воды и добавляют их в пробирку.

Пробирку вращают в центрифуге с частотой вращения 2500 об/мин в течение 5 мин. Отделяют н-гексановый слой и пропускают его через короткую колонку, заполненную безводным сульфатом натрия (4.2.7). Промывают содержимое пробирки последовательно двумя порциями н-гексана по 25  и пропускают промывные воды через колонку. Объединенные экстракты концентрируют в роторном испарителе (4.3.2) примерно до 15 . Раствор переливают в делительную воронку вместимостью 100 , делают метку 25  и доводят объем до 25  (см. также метод 7.4.1.2.2 для молока).

4.4.1.2.2 Масло

Растворяют 5 г очищенного молочного жира (расплавленного и декантированного через фильтр) в 10  н-гексана. Переносят раствор в делительную воронку вместимостью 100 , используя последовательно 3 порции н-гексана объемом 5 .

4.4.2 Разделение жира и хлорорганических соединений с применением ДМФА

Экстрагируют жир из 25  раствора гексана (4.4.1), используя 10  диметилформамида (ДМФА), насыщенного н-гексаном (4.2.5) путем встряхивания в делительной воронке. Через 2 - 3 мин. переносят нижний слой ДМФА во вторую делительную воронку вместимостью 100  (оставляя межфазную эмульсию в первой делительной воронке). Процесс экстракции раствора н-гексана повторяют еще с двумя порциями ДМФА (4.2.5) объемом по 10 . Соединяют экстракты ДМФА и промывают их 10  н-гексана, насыщенного ДМФА (4.2.4).

Отделяют 10  н-гексана и опять промывают 10  ДМФА (4.2.5). Отбрасывают н-гексан и добавляют промытый ДМФА в первоначальные 30  экстракта ДМФА в делительную воронку вместимостью 500  (или желательно 350 ). Добавляют 6 н-гексана (4.2.1) и 200  раствора сульфата натрия (4.2.9) и энергично встряхивают в течение 2 мин.

Дают отстояться в течение 20 мин. для расслоения. Собирают фазу н-гексана посредством легкого вращения. Сливают водный слой, вытирают досуха делительную воронку фильтровальной бумагой и выливают н-гексан в градуированную пробирку со шлифом, в которой должно находиться 15  растворителя. Делительную воронку ополаскивают небольшим количеством н-гексана и добавляют промывную жидкость в пробирку.

Соединяют пробирку с микроколонкой Snyder (4.3.5) и выпаривают экстракт н-гексана до объема приблизительно 2 .

4.4.3 Очистка на колонке, заполненной оксидом алюминия с н-гексаном

Суспензию из 5 г приготовленного оксида алюминия (4.2.8) в н-гексане (4.2.1) выливают в хроматографическую колонку (4.3.4), содержащую тампон из ваты, промытой растворителем (ISO 3890-1/IDF 75-1, А.5.15). Дают оксиду алюминия осесть и покрывают его слоем 30  безводного сульфата натрия (4.2.7). Сливают н-гексан до тех пор, пока мениск не достигнет верха слоя сульфата натрия. Наносят экстракт н-гексана (4.4.2) на колонку и промывают колонку порциями н-гексана объемом 2 .

Элюируют 50  н-гексана (4.2.1) при скорости потока не более 5 , собирая элюат в градуированную пробирку роторного испарителя (4.3.2). Элюат выпаривают до объема приблизительно 5 . Отсоединяют градуированную пробирку, подсоединяют микроколонку Snyder (4.3.5) и выпаривают элюат до объема 1 .

4.5 Газовая хроматография

См. ISO 3890-1/IDF 75-1 (пункт 6.2). Относительно предварительных испытаний см. ISO 3890-1/IDF 75-1 (разделы 10 - 14).