Приложение II. Определение веществ, экстрагированных водонасыщенным н-бутанолом

Приложение II
Определение веществ, экстрагированных водонасыщенным н-бутанолом

1. Сфера применения

Данный метод может применяться для анализа сухого женьшеня и экстрактов женьшеня (жидкой и порошкообразной форм).

2. Принципы

Сырой сапонин экстрагируется из продуктов из женьшеня с использованием в качестве растворителя водонасыщенного н-бутанола после удаления неполярных липидов и углеводов с использованием диэтилового эфира и дистиллированной воды.

3. Оборудование и аппаратура

3.1. Воронка делительная (250 мл);

3.2. Колба круглая плоскодонная (200 - 300 мл);

3.3. Колба коническая (200 - 300 мл);

3.4. Стандартное сито (N 80);

3.5. Фильтровальная бумага (N 2);

3.6. Воронка стеклянная;

3.7. Шейкер лабораторный;

3.8. Ротационный испаритель;

3.9. Водяная баня-термостат;

3.10. Электронные весы (точность до 0,1 мг);

3.11. Шкаф сушильный с термостатом (регулировка температуры с точностью 1°С);

3.12. Эксикатор (с силикагелем);

3.13. Мельница лабораторная;

3.14. Щипцы тигельные.

4. Реактивы

4.1. н-бутанол (требования к качеству реактива выше требований Европейской фармакопеи);

4.2. Диэтиловый эфир (требования к качеству реактива выше требований Европейской фармакопеи);

4.3. Вода дистиллированная.

5. Приготовление водонасыщенного раствора н-бутанола

5.1. Смешать н-бутанол и дистиллированную воду в соотношении 70:30.

5.2. Поместить в лабораторный шейкер на достаточное время, затем дать отстояться, чтобы верхний слой (слой водонасыщенного н-бутанола) и нижний слой (вода) полностью разделились.

5.3. После полного разделения слоев водонасыщенный н-бутанола поместить в сосуд для дальнейшего использования и плотно закрыть.

6. Предварительная обработка образцов

Образцы сухого женьшеня измельчают в лабораторной мельнице и просеивают через лабораторное сито N 80. Экстракт женьшеня для настоящего анализа используется без первичной подготовки.

7. Методика испытаний для сухого женьшеня

7.1. Взвесить около 5 г образца и поместить в круглую колбу (A). Затем добавить 50 мл водонасыщенного раствора н-бутанола. Провести экстрагирование с обратным холодильником на водяной бане с постоянной температурой 75 - 80°С в течение 1 часа и оставить на 30 минут.

7.2. Профильтровать и перелить в делительную воронку полученный в пункте 7.1 раствор.

7.3. Дважды повторить пункты 7.1 и 7.2 для получения в круглой колбе (А) твердых остатков.

7.4. Добавить 50 мл дистиллированной воды к смешанному раствору, полученному в соответствии с пунктами 7.2 - 7.3, и перемешать, используя лабораторный шейкер (приблизительно 15 минут). Дать отстояться, чтобы верхний слой (слой водонасыщенного н-бутанола) и нижний слой (вода) полностью разделились.

7.5. Переместить верхний слой (слой водонасыщенного н-бутанола) в заранее взвешенную коническую колбу (B), концентрировать в вакууме и высушивать (при 60°С) образец, пока жидкость полностью не удалится.

7.6. Добавить 50 мл диэтилового эфира в колбу (B), содержащую осадок, и снова провести экстрагирование на водяной бане с обратным холодильником при постоянной температуре 46°С в течение 30 минут.

7.7. Снять диэтиловый эфир из колбы (B) путем фильтрования образца через фильтровальную бумагу, затем собрать осадок на фильтровальной бумаге в колбе (B), растворив его метанолом.

7.8. Концентрировать содержимое колбы (B) до исчезновения запахов диэтилового эфира и метанола.

7.9. После сушки колбы (B) в сушильном шкафу при 105°С в течение 1 часа поместить колбу в эксикатор при комнатной температуре, оставить на 1 час и затем взвесить.

7.10. Содержание в сухом женьшене веществ, экстрагированных водонасыщенным н-бутанолом, рассчитывается по следующей формуле:

Содержание экстрагированных водонасыщенным н-бутанолом веществ (мг/г) ,

: масса колбы (мг);

: масса колбы после концентрирования и сушки (мг);

S: масса образца (г).

8. Методика испытаний для экстрактов женьшеня

8.1. Взвесить около 2 г образца и поместить в коническую колбу, добавить 60 мл дистиллированной воды для разведения образца и затем перенести его в делительную воронку (A).

8.2. Добавить 60 мл диэтилового эфира, несколько раз встряхнуть воронку и затем удалить газ, открыв пробку. Повторить процедуру пункта 8.2 два - три раза.

8.3. Перемешать содержимое делительной воронки, используя лабораторный шейкер (примерно 15 минут), и дать отстояться, чтобы верхний слой (диэтиловый эфир) и нижний слой (вода) полностью разделились.

8.4. Переместить нижний слой (вода) в другую делительную воронку (B), добавить 60 мл водонасыщенного раствора н-бутанола, перемешать содержимое так же, как описано в пункте 8.3, и дать отстояться, чтобы слои полностью разделились. Собрать надосадочный слой (слой водонасыщенного н-бутанола) и перенести в другую колбу.

* При этом нижний слой (вода) считается эмульсионным слоем на этом и двух последующих этапах разделения, но не на последнем этапе.

8.5. Повторить пункт 8.4 еще два раза с нижним слоем (вода), оставшимся в делительной воронке (B). На последнем этапе разделения надосадочный слой, включая эмульсию, медленно удалить, оставляя только верхний слой, открывая кран делительной воронки.

8.6. Собрать раствор (надосадочные слои от каждого этапа разделения), полученный в пунктах 8.4 - 8.6, в делительную воронку (B), добавить 50 мл дистиллированной воды и перемешать в тех же условиях, как описано в (c). Затем дать отстояться, пока верхний слой (н-бутанол) и нижний слой (вода) полностью не разделятся.

8.7. Перенести надосадочный слой (н-бутанол) в ранее взвешенную круглую колбу и концентрировать в вакууме (при 60°С), пока жидкость не удалится полностью.

8.8. Поместить круглую колбу в сушильный шкаф при 105°С на 1 час, затем поместить в эксикатор при комнатной температуре. Оставить на 1 час, затем взвесить.

8.9. Подсчитать содержание в экстракте женьшеня веществ, экстрагированных водонасыщенным н-бутанолом, используя тот же метод подсчета, что в пункте 7.10.