Приложение F (обязательное). Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, которые широко используют в микробиологии воды

Приложение F
(обязательное)

Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, которые широко используют в микробиологии воды

Для проведения испытаний отбирают определенные штаммы с целью гарантирования схожести результатов в разных лабораториях и облегчения демонстрации различий между средами (от партии к партии, а также в зависимости от изготовителя). Данные штаммы, приведенные в таблице F.1, прошли всестороннюю оценку с целью гарантирования их пригодности и стабильности при эксплуатации.

В случае, когда приводится более чем один штамм в каждом аспекте эксплуатационных испытаний (производительность, селективность, специфичность), должны как минимум использоваться штаммы, обозначенные символом b. Коммерческие и некоммерческие поставщики предполагают использование дополнительных штаммов, например, указанных в таблице F.1, чтобы более обоснованно гарантировать качество поставляемых питательных сред.

Эти критерии должны быть включены в конкретные стандарты при их разработке и пересмотре в будущем. Валидированной партией питательной среды является партия, которая демонстрирует удовлетворительные эксплуатационные характеристики. Номера штаммов, указанные в таблице F.1, заимствованы из каталога универсальных идентификаторов штаммов, составленных Всемирным центром данных по микроорганизмам (WDCM) [20]. Данный каталог содержит данные о контрольных штаммах, представленных каждым номером WDCM, а также контактные данные о культурных коллекциях. Все приведенные среды описаны в европейских и международных стандартах.

Если имеют место различия в характеристиках штаммов, исследуют возможные воздействия на питательную среду (например, при получении одной и той же среды от различных производителей) и приобретают дополнительную контрольную культуру из коллекции культур, в которой данная культура первоначально находилась. Пользователи могут запрашивать соответствующую информацию, касающуюся изменчивости штаммов, у РГ 5 "Питательные среды" ISO/TK 34/ПК 9 через секретариат ISO/TK 34/ПК 9.

Таблица F.1 - Тест-микроорганизмы и эксплуатационные критерии для питательных сред, широко используемых в микробиологии воды

Селективные среды для подсчета микроорганизмов путем сравнения с неселективной контрольной средой
Среда(a)	Тип(e)	Микроорганизм	Международный стандарт	Функция	Инкубирование	Контрольный штамм	Номер WDCM(c)	Контрольная среда	Метод контроля	Критерии	Характерная реакция
CoMert	L	Escherichia coli/ колиформные бактерии	ISO 9308-2	Производительность	(202) ч/ (362)°С	Escherichia coli	00013(b) 00090	TSA	Количественный	0,5	Желтая окраска и флуоресценция (E. Coli)
						Klebsiella pneumoniae	00206	TSA	Количественный	0,5	Желтая окраска, такая же или более интенсивная, чем образец сравнения (колиформные бактерии)
				Селективность
						Pseudomonas aeruginosa(d)	-	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	Более бледная желтая окраска, чем у образца сравнения
GVPC(f)	S	Legionella	ISO 11731 и ISO 11731-2	Производительность	2 - 5 сут/ (362)°С	Legionella pneumophila	00107(b) 00180	BCYE	Количественный	0,5	Бело-серо-сине-малиновые колонии с полным ореолом с характерным внешним видом гладкого стекла
					5 - 10 сут/ (362)°С	Legionella anisa	00106
				Селективность	3 сут/ (362)°С	Enterococcus faecalis(d)	00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
						Pseudomonas aeruginosa(d)	00026 или 00025	-	Качественный	Полное и частичное ингибирование (0 - 1)	-
						Escherichia coli(d)	00026 или 00025
Lactose ТТС	S	Escherichia coli/ колиформные бактерии	ISO 9308-1	Производительность	(213) ч/ (362)°С	Escherichia coli Enterobacter aerogenes Citrobacter freundii	00179(b) 00012 00013 00175 00006	TSA	Количественный	0,5	Желтая окраска среды под мембраной
				Селективность		Enterococcus faecalis(d)	00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
				Специфичность		Pseudomonas aeruginosa(d)	00025 или 00026	-	Качественный	-	Красные колонии, синяя окраска среды
mCP	S	Clostridium perfringens	Директива Совета 96/83/EC	Производительность	(213) ч/ (441)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080 00174	TSA или другая неселективная среда для анаэробных бактерий	Количественный	0,5	Желтые колонии; тест на фосфатазу положительный
				Специфичность		Clostridium bifermentans	00079	-	Качественный	-	Синие колонии; тест на фосфатазу отрицательный
				Селективность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Pseudomonas CN	S	Pseudomonas aeruginosa	ISO 16266	Производительность	(444) ч/ (362)°С	Pseudomonas aeruginosa	00024(b) 00025 00026	TSA	Количественный	0,5	Сине-зеленые колонии, флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете при длине волны 360 20 нм
				Селективность		Escherichia coli(d) Enterococcus faecalis(d)	00012 или 00013 00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Slanetz and Barttey	S	Кишечные энтерококки	ISO 7899-2	Производительность	(444) ч/ (362)°С	Enterococcus faecalis Enterococcus faecium(d)	00009(b) 00087 00176 00177 00178	TSA	Количественный	0,5	Красно-коричнево-розовые колонии
				Селективность		Escherichia coli(d) Staphylococcus aureus(d)	00012 или 00013 00032 или 00034	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Sulfite Iron Tryptose Sulfite (TS)	S	Сульфит-восстанавливающие анаэробные бактерии (клостридии)	ISO 6461-2	Производительность	(444) ч/ (371)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080	TSA, агар с кровью или другая неселективная среда для анаэробных бактерий	Количественный	0,5	Черные колонии
				Специфичность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	-	Отсутствие почернения
TSC	S	Clostridium perfringens	ISO 14189	Производительность	(213)ч/ (441)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080 00174	TSA, агар с кровью или другая неселективная среда для анаэробных бактерий	Количественный	0,5	Черные колонии
				Селективность		Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Селективные среды для подсчета микроорганизмов путем сравнения с партией, принятой ранее (для использования в особых случаях)
CoMert	L	Escherichia coli/ колиформные бактерии	ISO 9308-2	Производительность	(202) ч/ (362)°С	Escherichia coli	00013(b) 00090	Партия среда CoMert ранее валидирована	Количественный	0,7	Желтая окраска и флуоресценция (Е. Coli)
						Klebsiella pneumoniae	00206	Партия среда CoMert ранее валидирована	Количественный	0,7	Желтая окраска, такая же или более интенсивная, чем образец сравнения (колиформные бактерии)
				Селективность		Pseudomonas aeruginosa(d)	00207 или 00025	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	Более бледная желтая окраска, чем образец сравнения
GVPC(f)	S	Legionella	ISO 11731 и ISO 11731-2	Производительность	2 - 5 сут/ (362)°С	Legionella pneumophila	00107(b) 00180	Партия среда GVPC уже валидирована	Количественный	0,7	Бело-серо-сине-малиновые колонии с полным ореолом с характерным внешним видом гладкого стекла
					5 - 10 сут/ (362)°С	Legionella anisa	00106
				Селективность	3 сут/ (362)°С	Enterococcus faecalis(d)	00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
						Pseudomonas aeruginosa(d) Escherichia coli(d)	00026 или 00025 00012 или 00013	-	Качественный	Полное или частичное ингибирование (0 - 1)	-
Lactose ТТС	S	Escherichia coli/ колиформные бактерии	ISO 9308-1	Производительность	(213) ч/ (362)°С	Escherichia coli Enterobacter aerogenes Citrobacter freundii	00179(b) 00012 00013 00175 00006	Партия среда Lactose ТТС уже валидирована	Количественный	0,7	Желтая окраска среды под мембраной
Lactose ТТС	S	Escherichia coli/ колиформные бактерии	ISO 9308-1	Селективность	(213) ч/ (362)°С	Enterococcus faecalis(d) Pseudomonas aeruginosa(d)	00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
				Специфичность			00025 или 00026	-	Качественный	-	Красные колонии, синяя окраска среды
mCP	S	Clostridium perfringens	Директива Совета 98/83/EC	Производительность	(213) ч/ (441)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080 00174	Партия среды mCP уже валидирована	Количественный	0,7	Желтые колонии; тест на фосфатазу положительный
				Специфичность		Clostridium bifermentas	00079	-	Качественный	-	Синие колонии: тест на фосфатазу отрицательный
				Селективность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Pseudomonas CN	S	Pseudomonas aeruginosa	ISO 16266	Производительность	(444)ч/ (362)°С	Pseudomonas aeruginosa	00024(b) 00025 00026	Партия среды Pseudomonas CN уже валидирована	Количественный	0,7	Сине-зеленые колонии, флуоресцирующие в ультрафиолетовом свете при длине волны 360 20 нм
				Селективность		Escherichia coli(d) Enterococcus faecalis(d)	00012 или 00013 00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Slanetz and Bartley	S	Кишечные энтерококки	ISO 7899-2	Производительность	(444) ч/ (362)°С	Enterococcus faecalis Enterococcus faecium(d)	00009(b) 00087 00176 00177 00178	Партия среды Slanetz and Bartley уже валидирована	Количественный	0,7	Красно-коричнево-розовые колонии
Slanetz and Bartley	S	Кишечные энтерококки	ISO 7899-2	Селективность	(444) ч/ (362)°С	Escherichia coli(d) Staphylococcus aureus(d)	00012 или 00013 00O32 или 00034	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Sulfite Iron Tryptose Sulfite (TS)	S	Сульфитвосстанавливающие анаэробные бактерии (клостридии)	ISO 6461-2	Производительность	(4414) ч/ (371)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080	Партия среды Sulfite iron или TS уже валидирована	Количественный	0,7	Черные колонии
				Специфичность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	-	Отсутствие почернения
TSC	S	Clostridium pertingens	ISO 14189	Производительность	(213) ч/ (441)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080 00174	Партия среды TSC уже валидирована	Количественный	0,7	Черные колонии
				Селективность		Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Неселективные среды для подсчета микроорганизмов
YEA	S	Общая микрофлора	ISO 6222	Производительность	(444) ч/ (362)°С	Escherichia coli(d) Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00012 или 00013 00003	Партия среды YEA уже валидирована	Количественный	0,7	-
Bolton Preston	L	Campylobacter	ISO 17995	Производительность	(444)ч/ (371)°С микроаэробная атмосфера	Campylobacter jejuni(d) Campylobacter coli(d) + Escherichia coli(d) + Proteus mirabilis	00156 00005 00004 00012 или 00013 00023	-	Качественный	более 10 колоний на mCCDA	Мелкие, плоские или выпуклые колонии с гладкой поверхностью
Bolton Preston	L	Campylobacter	ISO 17995	Селективность	(444) ч/ (371)°С микроаэробная атмосфера	Escherichia coli(d) Proteus mirabilis	00012 или 00013 00023	-	Качественный	Полное ингибирование на TSA (0)	-
MUG/ECg	L	Escherichia coli колиформные бактерии	ISO 9308-3	Производительность	48 ч/ (440,5)°С	Escherichia coli	00179	Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды MUG/EC приведена в ISO 9308-3:1998, приложение Е
MUD/SFh	L	Кишечные энтерококки	ISO 7899-1	Производительность	(444) ч/ (440,5)°С	Enterococcus faecalis Entorococcus hirae Entorococcus faecium	00176 00089 00178	Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды MUG/SF приведена в ISO 7899-1:1998, приложение Е
				Селективность		Aerococcus vindans Lactiococcus lactis Staphylococcus epidermidis	00061 00016 00132
RVS	L	Salmonella	ISO 19250	Производительность	(243) ч/ (41,51)°С	Salmonella Enteritidis(d),(j) Salmonella Typhimunum(d),(j) + Escherichia coli(d) + Pseudomonas aerugnosa	00030 00031 00012 или 00013 00025	-	Качественный	> 10 колоний на XLD или другой выбранной среде	Колонии, характерные для каждой среды (см. стандарт)
				Селективность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	Частичное ингибирование не более 100 колоний на TSA	-
RVS	L	Salmonella	ISO 19250	Селективность	(243) ч/ (41,51)°С	Enterococcus faecalis(d)	00009 или 00087	-	Качественный	менее 10 колоний на TSA	-
Неселективные жидкие среды
DRCM	L	Сульфитвосстанавливающие анаэробные бактерии (клостридии)	ISO 6461-1	Производительность	(444) ч/ (361)°С анаэробная атмосфера	Clostridium perfringens	00007(b) 00080	-	Качественный	Мутность (1 - 2)	Почернение
				Специфичность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	Мутность (0 - 1)	Отсутствие почернения
Раствор хлорида натрия Пептонный разбавитель	L	Разбавители	ISO 8199	Разбавитель	45 мин - 1 ч/ 20 - 25 °С	Escherichia coli(d) Staphylococcus aureus	00012 или 00013 00034	TSA	Количественный	30% колоний/ (30% от первоначального количества)	-
Пептонный солевой раствор
Раствор Ringer с концентрацией, сниженной в 4 раза
Фосфатный буферный раствор
Селективные среды для выделения
mCCDA	S	Campylobacter	ISO 17995	Производительность	(444) ч/ (41,51)°С микроаэробная атмосфера	Campylobacter jejuni(d) Campylobacter coli(d)	00156 или 00005 00004	-	Качественный	Значительный рост (2)	Мелкие, плоские или выпуклые колонии с гладкой поверхностью
				Селективность		Escherichia coli(d)	00012, или 00013, или 00179, или 00090	-	Качественный	Полное или частичное ингибирование (0 - 1)	Характерные колонии отсутствуют
						Staphylococcus aureus(d)	00032 или 00034	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
XLD	S	Salmonella	ISO 19250	Производительность	(243) ч/ (362)°С	Salmonella Typhimunum(d),(j) Salmonella Enteritidis(d),(j)	00031 00030	-	Качественный	Значительный рост (2)	Колонии с черным центром и слегка прозрачной зоной, окрашенной в красноватый цвет из-за изменения цвета среды
				Селективность		Escherichia coli(d)	00012 или 00013	-	Качественный	Рост или частичное ингибирование (0 - 1)	Желтые колонии
						Enterococcus faecalis(d)	00009 или 00087	-	Качественный	Полное ингибирование (0)	-
Многоцелевые среды
BPW(k)	L	Разбавитель для подсчета всех микроорганизмов	ISO 6887	Разведение	45 мин - 1 ч/ 20 - 25°С	Escherichia coli(d) Staphylococcus aureus	00012 или 00013 00034	TSA	Количественный	30% колоний/ (30% первоначального количества)	-
		Предварительное обогащение для выявления Salmonella	ISO 19250	Производительность	(182) ч/ (362)°С	Salmonella Typhimunum(d),(j) Salmonella Enteritidis(d),(j)	00031 00030	-	Качественный	Мутность (0 - 2)	-
Контрольные среды для подсчета микроорганизмов
BCYE	S	Подсчет колоний	ISO 11731 и ISO 11731-2	Производительность	2 - 5 сут/ (362)°С	Legionella pneumophila	00107(b)	Партия среды BCYE уже валидирована	Количественный	0,7	Бело-серо-сине-малиновые колонии с полным ореолом с характерным внешним видом гладкого стекла
TSA(l)	S	Подсчет колоний	-	Производительность	В соответствии с методом, в котором TSA используют в качестве контрольной среды	Escherichia coli(d) Clostridium Perfringens Pseudomonas Aeruginosa Enterococcus faecalis	00012 00013 00090 00179 00007 00024 00087	Партия среды TSA уже валидирована	Количественный	0,7	Колонии, характерные для каждого вида
(a) Полные наименования сред и соответствующие им аббревиатуры сред приведены в таблице F.2. (b) Данный штамм используется как необходимый минимум. (c) Для получения информации о номерах штаммов культурных коллекций и контактной информации следует обратиться по адресу http:/www.wfcc.info, где имеется ссылка на каталог контрольных штаммов. (d) Безальтернативный штамм; один из данных штаммов используют как необходимый минимум. (e) L: жидкая среда; S: плотная среда; SS: полужидкая среда. (f) Более подробная информация о контроле качества среды для Legionella, включая хранение контрольных штаммов, приведена в ISO 11731. (g) Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды MUG/EC приведена в ISO 9308-3:1998, приложении Е; селективность не установлена в данном стандарте. (h) Более подробная информация о контроле качества и критериях качества среды MUG/SF приведена в ISO 7899-1:1998, приложении Е. (i) Некоторые национальные ограничения и директивы требуют использования иных сероваров. При выборе сероваров Salmonela ссылаются на соответствующие требования национальных нормативных документов. (j) Рост/мутность характеризуют следующим образом: 0 - отсутствие роста/отсутствие мутности; 1 - незначительный рост/незначительная мутность; 2 - выраженный рост/выраженная мутность (см. 7.4.1.2, 8.4.1). (k) В случае, когда среду BPW используют для двух и более различных применений, проводят как минимум испытание с обогащением Salmonella (если лаборатория проводит испытания данного микроорганизма). (l) Штамм(ы) выбирают в соответствии с методом, в котором TSA используют в качестве контрольной среды.

Таблица F.2 - Аббревиатуры питательных сред, приведенных в таблице F.1

Аббревиатура среды	Полное наименование среды	Соответствующий международный стандарт
BCYE	Буферная агаровая среда с активированным углем и дрожжевым экстрактом	ISO 11731 и ISO 11731-2
Bolton	Бульон Болтона	ISO 17995
BPW	Буферная пептонная вода	ISO 6887 ISO 19250
DRCM	Дифференциальная усиленная среда для клостридий	ISO 6461-1
GVPC	Буферная агаровая среда с активированным углем, дрожжевым экстрактом, глицином, ванкомицином, полимиксином В и циклогексимидом	ISO 11731 и ISO 11731-2
Lactose TTC	Лактозная агаровая среда с трифенилтетразолия хлоридом и гептадецилсульфатом натрия	ISO 9308-1
mCCDA	Модифицированный агар с активированным углем, цефоперазоном и дезоксихолатом	ISO 17995
mCP	Мембранная агаровая среда для Clostridium perfringens	Директива Совета 98/83/EC
MUD/SF	Среда с 4-метилумбеллиферил--D-глюкозидом и SF	ISO 7899-1
MUD/EC	Среда с 4-метилумбеллиферил--D-глюкуронидом и ЕС	ISO 9308-3
Preston	Бульон Престона	ISO 17995
Pseudomonas CN	Агар с цетримидом и налидиксовой кислотой для Pseudomonas	ISO 16266
RVS	Соевый пептонный бульон Раппапорта - Вассилиадиса	ISO 19250
Slanetz and Bartley	Среда Сланеца и Бартли	ISO 7899-2
Sulfite Iron	Агар с сульфитом железа	ISO 6461-2
Tryptose Sulfite (TS)	Агар с триптозой и сульфитом	ISO 6461-2
TSA	Триптонный соевый агар	-
TSC	Агар с триптозой, сульфитом и циклосерином (без яичного желтка)	ISO 14189
XLD	Агар с ксилозой, лизином и дезоксихолатом	ISO 19250
YEA	Агар с дрожжевым экстрактом	ISO 6222