Межгосударственный стандарт ГОСТ 33777-2016 "Вещества поверхностно-активные. Метод определения фитотоксичности на семенах высших растений" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 июня 2016 г. N 760-ст)

Surface-active agents. Method for determination of phytotoxicity for higher plants seeds

Дата введения - 1 января 2017 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Разработан Обществом с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский институт бытовой химии "Росса" (ООО "Росса НИИБХ"), Техническим комитетом по стандартизации ТК 354 "Бытовая химия" и ООО "НПФ ВНИИПАВ и СП"

2 Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 354 "Бытовая химия"

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 87-П от 20 апреля 2016 г.)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 июня 2016 г. N 760-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 33777-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2017 г.

5 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на анионные, неионогенные, катионные и амфолитные поверхностно-активные вещества (далее - ПАВ) и их смеси и устанавливает метод определения класса фитотоксичности ПАВ.

Сущность метода заключается в графическом определении пороговой массовой концентрации (ПК) испытуемого ПАВ в растворе, при которой среднее значение длин главных корней семян тест-растений равно среднему значению длин корней семян тест-растений в питьевой воде.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ OIML R 111-1-2009 Государственная система обеспечения единства измерений. Гири классов , , , , , , и Часть 1. Метрологические и технические требования

ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 12038-84 Семена сельскохозяйственных культур. Методы определения всхожести

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27025-86 Реактивы. Общие указания по проведению испытаний

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 28950-91 Инструменты чертежные. Общие технические требования и методы испытания

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 32509-2013 Вещества поверхностно-активные. Метод определения биоразлагаемости в водной среде

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом, следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 фитотоксичность: Способность химических веществ (в т.ч. ПАВ), растворенных в воде, угнетать (ингибировать) прорастание семян высших растений.

3.2 область угнетения прорастания семян: Область значений массовых концентраций водных растворов испытуемого ПАВ, в которой средние значения длин главных проросших корней меньше, чем в питьевой воде.

Примечание - Для углеводородных ПАВ область угнетения прорастания семян тест-растений наблюдается в области массовых концентраций ПАВ в водном растворе, обуславливающих появление мицелл (т.н. ККМ), а именно 10-300 .

3.3 область стимулирования прорастания семян: Область значений массовых концентраций водных растворов испытуемого ПАВ, в которой средние значения длин главных проросших корней больше, чем в питьевой воде.

Примечание - Для отдельных углеводородных ПАВ область стимулирования наблюдается в области массовых концентраций 2 - 50  (в области достижения предельной адсорбции молекул ПАВ на границе вода - воздух).

3.4 тест-объект: Семена высших растений (рисунок 1).

Примечание - Для оценки фитотоксичности используют семена двух видов высших растений: одного однодольного и одного двудольного. В качестве однодольного растения используют овес (Avena sativa), в качестве двудольного - редьку масличную (Brassica rapa).

Рисунок 1

3.5 главный корень: Корень максимальной длины.

3.6 пороговая массовая концентрация, ПК, : Минимальная массовая концентрация ПАВ в воде замачивания, при которой проявляется фитотоксический эффект.

Примечание - ПК рассчитывают по активному веществу ПАВ (индивидуальных или технических).

3.7 фитотоксический эффект: Угнетение роста корней семян растений в растворе испытуемого ПАВ по сравнению с проращиванием семян тех же растений в питьевой воде.

3.8 коэффициент разбавления, KR: Кратность разбавления раствора испытуемого ПАВ с массовой концентрацией 1000  до значения ПК.

4 Общие указания

4.1 Общие указания по проведению испытаний - по ГОСТ 27025.

4.2 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.

4.3 При выполнении испытаний в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

- температура окружающего воздуха в помещении: (221)°С;

- температура в термостате: (221)°С;

- атмосферное давление: (84 - 106) кПа;

- относительная влажность: 60% - 80%.

5 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы

Весы неавтоматического действия с неавтоматическим установлением показаний высокого (II) класса точности с действительной ценой деления 0,05 мг и максимальной нагрузкой 200 г по ГОСТ OIMLR 76-1.

Набор гирь (1 г - 100 г) по ГОСТ OIML R 111-1.

Термостат, обеспечивающий поддержание температуры в пределах от 20°С до 30°С.

Термометр жидкостный стеклянный с диапазоном измерений температуры от 0°С до 100°С и ценой деления шкалы 1°С по ГОСТ 28498.

Колба 2-100-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки 2-2-2,2-2-50 по ГОСТ 29169.

Чашка Петри ЧБН-1-100 по ГОСТ 25336.

Бумага листовая для офисной техники.

Пинцет по ГОСТ 21241.

Линейка по ГОСТ 427.

Часы.

Кронциркуль разметочный по ГОСТ 28950.

Вода питьевая.

Семена овса, используемые для сыроедения, по действующей технической документации.

Семена редьки масличной по действующей технической документации.

6 Подготовка к выполнению испытаний

6.1 Приготовление растворов испытуемого ПАВ

Необходимые для испытания растворы ПАВ с массовой концентрацией от 1000  до 1  (приблизительно) готовят следующим образом: из испытуемого ПАВ готовят раствор с массовой концентрацией 1000 .

Затем пипеткой 2-2-50 отмеряют 50  приготовленный раствор, помещают в мерную колбу вместимостью 100 , доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Получают раствор с массовой концентрацией ПАВ 500 .

Пипеткой 2-2-50 вновь отмеряют 50  полученного раствора с массовой концентрацией ПАВ 500 , помещают в следующую колбу вместимостью 100 , доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Получают раствор с массовой концентрацией 250 .

Аналогичным образом готовят остальные растворы с массовой концентрацией 125,0 ; 62,5 ; 31,2 ; 15,6 ; 7,8 ; 3,9 ; 2,0 ; 1,0 .

При расчете массы навески для приготовления растворов учитывают массовую долю основного вещества ПАВ, определяемую в соответствии с нормативным или техническим документом.

Для приготовления растворов используют питьевую воду.

6.2 Подготовка семян

Для испытаний используют неповрежденные, недеформированные, непротравленные семена овса и редьки масличной, имеющие всхожесть не менее 95%.

Семена растений проверяют на всхожесть по ГОСТ 12038.

Отбирают по 120 - 180 семян каждого вида растений, однородных по форме и имеющих разброс по массе 10%.

6.3 Подготовка чашек Петри

Для испытаний используют 12 чашек Петри: одна - контрольная (с питьевой водой) и одиннадцать - с растворами испытуемого ПАВ, приготовленными по 6.1.

Перед каждым испытанием чашки Петри обрабатывают раствором перманганата калия с массовой долей 1% (или хромовой смесью) и промывают питьевой водой.

Примечание - При испытаниях на фитотоксичность средств, содержащих перфтор ПАВ (или ПАВ других элементоорганических соединений), используют одноразовые чашки Петри.

7 Выполнение испытаний

В каждую чашку, покрытую одним слоем бумаги, с помощью пинцета помещают по 10 - 15 отобранных по 6.2 семян овса. Затем в каждую из одиннадцати чашек пипеткой 2-2-2 приливают 2  раствора испытуемого ПАВ определенной концентрации, приготовленного по 6.1, в одну из чашек - питьевую воду (контрольный опыт). Раствор (или вода) должен покрывать только половину каждого семени.

Чашки Петри с увлажненными семенами помещают в термостат (или в помещение) с контролируемой температурой. Испытания проводят при температуре (22,00,5)°С. Длительность испытаний - 3 сут до появления главного корня семени.

По истечении срока экспозиции проросшие семена из чашек Петри помещают на бумагу и измеряют длины () главных корней с помощью разметочного кронциркуля и линейки.

Результаты измерений оформляют в виде таблицы 1.

Таблица 1

N чашек с семенами	0	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
Массовая концентрация раствора испытуемого ПАВ, ()	0	1000	500	250	125	62,5	31,2	15,6	7,8	3,9	1,95	1
lg()
Средняя длина корней ()*, мм, в конце испытаний (через 72 ч)
* вычисляют по формуле , где - длина главного корня каждого семени в чашке, мм; - сумма длин главных корней; n - количество семян в чашке

Аналогично проводят испытание с семенами редьки масличной.

8 Обработка результатов испытаний

8.1 Критерии оценки результатов испытаний

Изменения длин главных корней проросших семян тест-растений в контролируемых условиях в водных растворах ПАВ обусловлены адсорбцией молекул ПАВ на поверхностях смачиваемых семян и описываются зависимостями, аналогичными зависимостям адсорбции молекул ПАВ от концентрации ПАВ на границе вода - воздух

;

,

где - длина проросшего корня в водном растворе ПАВ, мм;

- массовая концентрация водного раствора ПАВ, ;

- поверхностное натяжение водного раствора ПАВ, .

Угнетение прорастания семян наблюдается при концентрациях ПАВ от 0,1 до 0,5 критической концентрации мицеллообразования, т. е. в интервале 10 - 500 .

8.2 Определение пороговой массовой концентрации (ПК)

Пороговую массовую концентрацию (ПК, ) определяют графически (рисунок 2). По результатам испытаний (таблица 1) строят зависимость - = f ().

Параллельно оси (lg ) проводят прямую линию контроля.

От точки пересечения - и (по точкам) строят прямую до оси ординат (lg ).

Область пересечения прямых - и соответствует lg (ПК). По значению lg (ПК) вычисляют значение ПК.

Рисунок 2

По значению ПК и максимальной массовой концентрации (1000 ) ПАВ рассчитывают коэффициент разбавления () lg

.

Результаты испытаний приводят в протоколе испытаний (приложение Б).

По величине , с учетом класса биоразлагаемости ПАВ (определяется по ГОСТ 32509) устанавливают класс фитотоксичности ПАВ (приложение А).