Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде "Определение антио и фосфамида в кормах" (утв. Министерством здравоохранения СССР)

Характеристика препаратов

Антио (формотион) - О,О-диметил-S-(N-метилформилкарбамоилметил) дитиофосфат

Антио хорошо растворим в спирте, эфире, хлороформе, ацетоне, в растворителях ароматического ряда; плохо растворим в предельных углеводородах и воде, устойчив в неполярных растворителях, неустойчив в щелочной среде. Препарат выпускается в виде 25%-ного эмульгирующего концентрата и является высокоэффективным инсектицидом-акарицидом контактного и системного действия.

Он широко применяется в сельском хозяйстве для защиты различных культур (хлопок, рис, хлебные злаки, цитрусовые, фруктовые, картофель, свекла и др.) от сосущих и грызущих вредителей.

В организме животных, а также на обработанных культурах антио под воздействием УФ-света и высокой температуры превращается в более токсичное соединение - фосфамид.

Фосфамид (рогор, диметоат, Би-58) - О,О-диметил-S-(N-метилформилкарбамоилметил) дитиофосфат

В чистом виде фосфамид представляет собой белое кристаллическое вещество с температурой плавления 51-62°С. Хорошо растворим в большинстве органических растворителей, в воде (39 г/л), но плохо растворим в предельных углеводородах. Фосфамид как и антио также широко используется в сельском хозяйстве на тех же культурах против различных вредителей.

Принцип метода*

Метод основан на извлечении антио и фосфамида из кормов хлороформом; очистке экстрактов от коэкстрактивных веществ перераспределением в несмешивающихся растворителях; концентрировании экстрактов и хроматографировании в тонком слое силикагеля в подвижной фазе: хлороформ-ацетон (9:1). Обнаружение антио и фосфамида производят аммиачно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра с предварительной обработкой хроматограмм раствором щелочи. Чувствительность метода - 0,2 мг/кг, процент определения в среднем составляет .

Реактивы и растворы

1. Ацетон

2. Хлороформ

3. Едкий натр или едкое кали

4. Серебро азотнокислое, х.ч.

5. Силикагель марки КСК

6. Гипс

7. Сульфат натрия безводный

8. Антио - 90%

9. Фосфамид - 96%

10. Аммиак 25%-ной концентрации уд. вес 0,9

11. Стандартные ацетоновые растворы антио и фосфамида, содержащие 100 мкг/мл действующего вещества

Проявляющие реактивы

1. 20%-ный раствор едкого натра или кали.

2. Аммиачно-ацетоновый раствор азотнокислого серебра. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, приливают 5 мл аммиака 25%-ной концентрации и доводят объем раствора до 100 мл ацетоном.

Приборы и посуда

Хроматографическая камера (можно использовать эксикатор)

Весы аналитические

Делительные воронки на 150 мл

Пульверизаторы

Шуттель-аппарат

Шприцы медицинские на 1 мл

Фильтры бумажные

Чашки фарфоровые выпарительные на 20 и 100 мл

Водяная баня

Стеклянные пластинки 9x12 см

Конические колбы о притертыми пробками на 150 и 200 мл

Воронки для фильтрования

Мерные пипетки на 2,5 и 10 мл

Микропипетки

Сушильный шкаф

Фарфоровая ступка

Сито на 100 меш

Мельница для измельчения гранулированного силикагеля

Стеклянные палочки

Камера для опрыскивания хроматограмм

Приготовление пластинок с тонким слоем сорбента

Стеклянные пластинки размером 9x12 см моют хромовой смесью, затем водопроводной и дистиллированной водой и сушат в вертикальном положении. Сухие пластинки перед нанесением сорбционной массы протирают спиртом или эфиром. Для приготовления сорбционной массы берут 35 г силикагеля КСК, просеянного через сито 100 меш, 2 г гипса, 90 мл дистиллированной воды и все переносят в коническую колбу с притертой пробкой и встряхивают в течение 15 минут. Приготовленную массу в количестве 10 г (2 чайные ложки) наносят на пластинку и равномерно распределяют по поверхности. Пластинки сушат в течение 16-20 часов при комнатной температуре в горизонтальном положении. Готовые пластинки хранят в эксикаторе.

Ход определения

Исследуемую пробу кормов (сено, картофельная и морковная ботва, листья капусты, свекла, картофель, овес, ячмень, комбикорма и т.д.) измельчают, отбирают по 10 г, помещают в коническую колбу и заливают 40 мл хлороформа и экстрагируют встряхиванием дважды в течение 30 и 3 минут.

Экстракты отделяют фильтрованием через бумажный фильтр в фарфоровую выпарительную чашку, объединяют и концентрируют без нагрева в вытяжном шкафу досуха.

Для извлечения антио и фосфамида из сухого остатка проводят экстрагирование дистиллированной водой четырежды порциями по 2 мл, тщательно растирая остаток стеклянной палочкой. Экстракты собирают через бумажный фильтр в делительную воронку, объединяют и пестициды экстрагируют из водного раствора хлороформом дважды порциями по 10 мл, встряхивая в течение минуты.

Хлороформные экстракты сливают в фарфоровую выпарительную чашку через фильтр с безводным сульфатом натрия, объединяют и выпаривают досуха как описано выше.

Сухой остаток растворяют в 0,2 мл хлороформа и с помощью медицинского шприца или микропипетки наносят на пластинку со слоем сорбента. Эту процедуру выполняют трижды.

Для идентификации пятен ядохимикатов и их количественной оценки на ту же пластинку наносят стандартные растворы антио и фосфамида, содержащие предполагаемые количества в пробе и пластинку помещают в хроматографическую камеру с подвижной фазой: хлороформ-ацетон (9:1).

После подъема фронта растворителя на 10 см от линии старта, пластинку вынимают и сушат в вытяжном шкафу до испарения растворителя. Для обнаружения пестицидов хроматограмму опрыскивают из пульверизатора до насыщения слоя сорбента 20%-ным раствором едкого натра или едкого кали и помещают на 5 минут в сушильный шкаф при температуре 100°С.

После охлаждения пластинку опрыскивают аммиачно-ацетоновым раствором азотнокислого серебра и опять помещают в сушильный шкаф на 10 минут при той же температуре.

На белом фоне пластинки антио и фосфамид проявляются в виде темно-серых пятен с для антио и для фосфамида.

Количественное определение пестицидов проводят путем визуального сравнения интенсивности окраски пятен пробы и их величины с пятнами стандартных растворов.

Содержание ядохимикатов (Х) в мг/кг рассчитывают по формуле:

, где:

А - количество ядохимиката, найденное путем сравнения со стандартными пятнами (мкг);

В - вес исследуемой пробы (г).

______________________________

* Разработан А.Ф. Конюховым во Всесоюзном институте экспериментальной ветеринарии, Москва.

Утвержден 30 декабря 1976 г. N 1547-76