Межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15950-2016 "Удобрения. Определение N-(1,2-дикарбоксиэтила)-D,L-аспаргиновой кислоты методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 сентября 2016 г. N 1097-ст)

Fertilizers. Determination of N-(1,2-dicarboxyethyl)-D,L-aspartic acid using high-performance liquid chromatography

Дата введения - 1 марта 2017 г.

Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский институт стандартизации, материалов и технологий" (ФГУП "ВНИИ СМТ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии указанного в пункте 5 стандарта

2 Внесен Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 527 "Химия"

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 марта 2016 г. N 86-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 8 сентября 2016 г. N 1097-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 15950-2016 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 марта 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 15950:2010 "Удобрения. Определение N-(1,2-дикарбоксиэтила)-D,L-аспаргиновой кислоты (иминодиянтарной кислоты, IDHA) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC)" ("Fertilizers - Determination of N-(1,2-dicarboxyethyl)-D,L-aspartic acid (Iminodisuccinic acid, IDHA) using high-performance liquid chromatography (HPLC)", IDT).

Европейский стандарт разработан Европейским комитетом по стандартизации CEN/TC260 "Удобрения и известковые материалы".

Официальные экземпляры европейского регионального стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, и европейских региональных стандартов, на которые даны ссылки, имеются в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных европейских региональных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 Введен впервые

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения N-(1,2-дикарбоксиэтила)-D,L-аспаргиновой кислоты (иминодиянтарной кислоты (IDHA)) в удобрениях.

Метод применим ко всем удобрениям, содержащим IDHA как хелатообразователь, в количестве больше 0,5% (г/100 г).

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа. Для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

EN 1482-2:2007 Fertilizers and liming materials - Sampling and sample preparation - Part 2: Sample preparation (Удобрения и известковые материалы. Отбор и подготовка проб. Часть 2. Подготовка проб)

EN 12944-1:1999 Fertilizers and liming materials and soil improvers - Vocabulary - Part 1: General terms (Удобрения, известковые материалы и улучшители почвы. Словарь. Часть 1. Общие термины)

EN 12944-2:1999 Fertilizers and liming materials and soil improvers - Vocabulary - Part 2: Terms relating to fertilizers (Удобрения, известковые материалы и улучшители почвы. Словарь. Часть 2. Термины, относящиеся к удобрениям)

EN ISO 3696:1995 Water for analytical laboratory use - Specific ation and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по EN 12944-1:1999 и EN 12944-2:1999.

4 Сущность метода

Экстрагируют IDHA с водой и определяют с помощью ВЭЖХ с обратной фазой УФ-детектированием при 260 нм, после полного преобразования хелатообразователя в хелаты железа (III) добавлением избытка раствора нитрата железа (III) (подробную информацию см. в разделе 8 и далее). В ВЭЖХ-хроматограмме IDHA представлена двумя основными пиками: первым, представляющим R,S-изомер (50%), и вторым, представляющим R,R- и S,S-изомеры (каждый по 25%).

5 Влияющие факторы

Другие хелатообразователи, такие как DPTA, o,o-EDDHA или o,p-EDDHA не влияют на определение IDHA. На результат определения IDHA на некоторых видах оборудования может влиять значение EDTA, особенно с определенными колонками ВЭЖХ (см. таблицу А.2).

6 Реактивы

Используют реактивы только известной степени чистоты.

6.1 Вода, дистиллированная или деминерализованная (степени чистоты 1 в соответствии с EN ISO 3696).

6.2 Гидросульфат тетра-n-бутиламмония () для ион-парной хроматографии.

Допускается использовать бромид или хлорид тетра-n-бутиламмония. В таких случаях необходимо устанавливать рН (см. 6.9).

6.3 Гидроксид тетра-n-бутиламмония, () = 40% в воде.

6.4 Девятиводный нитрат железа (III), ч.д.а.

6.5 Азотная кислота, () = 65%, ч.д.а.

6.6 Соляная кислота, с (HCI) = 1 и с (HCI) = 0,1 .

6.7 Гидроксид натрия, с (NaOH) = 1 и с (NaOH) = 0,1 .

6.8 Буферный раствор, рН = 8,0.

Добавляют раствор бора молярной концентрацией 0,1 в соляной кислоте или гидроксиде натрия до достижения рН = 8,0 в качестве борного/боратного буфера.

Примечание - Могут быть использованы готовые буферные растворы доступные на рынке. Буферный раствор не должен содержать фосфатов или хелатообразователей, таких как EDTA или другие.

6.9 Раствор элюента

В мерной колбе вместимостью 1 растворяют 2,5 г гидросульфата тетра-n-бутиламмония (6.2) (равно 7,36 мкмоль), 1,7  гидроксида тетра-n-бутиламмония (6.3) и 0,04  азотной кислоты (6.5) в воде и доводят до метки, рН данного раствора примерно 2,5.

В случаях, когда вместо гидросульфата тетра-n-бутиламмония используют бромид или хлорид тетра-n-бутиламмония, взвешивают 2,37 г или 2,05 г бромида или хлорида соответственно и доводят азотной кислотой (6.5) приблизительно до рН 2,5.

6.10 Дериватизирующий реагент

В мерной колбе вместимостью 100  растворяют 4,4 г гидросульфата тетра-n-бутиламмония (6.2) (равно 12,95 мкмоль) и 1,5 г девяти водного нитрата железа (III) (6.4) в воде и доводят до метки, рН данного раствора примерно 1,5.

В случаях, когда вместо гидросульфата тетра-n-бутиламмония используют бромид или хлорид тетра-n-бутиламмония, взвешивают 4,17 г или 3,60 г бромида или хлорида соответственно и доводят азотной кислотой (6.5) рН приблизительно до 1,5.

7 Аппаратура

Лабораторное оборудование и стеклянная посуда для приготовления растворов и разбавлений.

7.1 Аналитические весы, способные взвешивать с погрешностью не более 0,1 мг.

7.2 рН-метр с электродом.

7.3 Система HPLC с детектором на диодной матрице (ДМД) или УФ-детектором.

7.4 Мембранные фильтры, микромембранные фильтры, стойкие к воздействию водных растворов, с пористостью 0,45 мкм.

8 Отбор и подготовка проб

Отбор проб не является частью метода настоящего стандарта. Рекомендуемый отбор проб представлен в [2].

Подготовка проб должна быть проведена в соответствии с EN 1482-2.

Для измельчения образца с высоким содержанием хелатообразователей не рекомендуется использовать высокоскоростную лабораторную мельницу. Удобнее использовать ступку для измельчения образца до размера частиц менее чем 1 мм. Особое внимание необходимо уделять образцам NPK-удобрений ввиду их высокой гигроскопичности.

9 Проведение анализа

9.1 Параметры системы

- Аналитическая/разделительная колонка:	капиллярная кварцевая колонка с С18 или С8 обратной фазой, 5 мкм, 250 x 4,6 мм*
- Длина волны детектора	260 нм
- Элюент	в соответствии с 6.9
- Скорость потока	0,5
- Температура	постоянная от 20°С до 40°С
- Время работы	20 мин
- Объем вводимой пробы	20

9.2 Построение графика градуировки

9.2.1 Основной раствор IDHA: (IDHA) = 1000 

Взвешивают 338,3  (где R - это чистота тетранатриевой соли IDHA в процентах, в пересчете на 250,0 мг свободной кислоты) в стакан вместимостью 250 , добавляют примерно 150  воды (6.1) и растворяют все в ультразвуковой ванне или перемешиванием на магнитной мешалке в течение 15 мин. При использовании ультразвуковой ванны, раствор необходимо охладить до комнатной температуры перед следующим шагом.

Измеряют рН раствора. При помощи соляной кислоты (6.6) или гидроксида натрия (6.7) и рН-метра (7.2) доводят рН до 8,0 0,1. Затем добавляют 20  буферного раствора (6.8). Переносят в мерную колбу вместимостью 250 , доводят объем до метки и гомогенизируют. Данный раствор должен быть использован в день его приготовления.

9.2.2 Градуировочные растворы

Объем основного раствора (9.2.1) распределяют по шести лабораторным стаканам (вместимостью, например, 25 ) в соответствии с таблицей 1, доводят объем до 10  водой (6.1) и добавляют 3  дериватизирующего реагента (6.10).

Гомогенизируют и фильтруют раствор при помощи микромембранных фильтров (7.4) в виалу автодозатора.

Вводят растворы в хроматографическую систему. Строят график градуировки с помощью расчетного метода или подходящего метода вычисления на компьютере. Измеряют время удерживания и площади пиков двух изомеров IDHA для всех растворов. Рисуют график градуировки с суммой всех площадей пиков стандартных растворов по отношению к концентрации IDHA () в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1 - Приготовление градуировочных растворов

Наименование параметра	Объем основного раствора,	Объем воды,	Содержание IDHA,
Раствор 1	1,00	9,00	100
Раствор 2	2,00	8,00	200
Раствор 3	4,00	6,00	400
Раствор 4	6,00	4,00	600
Раствор 5	8,00	2,00	800
Раствор 6	10,00	0,00	1000

9.3 Приготовление анализируемого раствора

Взвешивают количество образца, измельченного до размера частиц менее 0,25 мм с точностью до 0,1 мг в соответствии с таблицей 2 и переносят в лабораторный стакан вместимостью 250 , добавляют примерно 150  воды (6.1) и растворяют все в ультразвуковой ванне или с помощью перемешивания на магнитной мешалке в течение 15 мин. При использовании ультразвуковой ванны, раствор необходимо охладить до комнатной температуры перед следующим шагом.

Таблица 2 - Приготовление анализируемого раствора

Сумма хелатированных микроэлементов в образце, % (например, Fe, Cu, Mn, Zn, Co)	Масса части образца, г
> 5	0,25
От 1 до 5 включ.	1,0
1	5,0

С помощью соляной кислоты (6.6) или гидроксида натрия (6.7) и рН-метра (7.2) доводят рН раствора до 8,0 0,1. Затем добавляют 20  буферного раствора (6.8). Переносят в мерную колбу вместимостью 250 , доводят объем до метки водой (6.1) и гомогенизируют. Фильтруют приблизительно 7 - 10  раствора с помощью микромембранных фильтров (7.4). Данный раствор должен быть использован в день его приготовления.

Переносят 5,00  в стакан (вместимостью, например 25 ) и добавляют 1,5  дериватизирующего реагента (6.10) и делают однородным. Фильтруют раствор с помощью микромембранных фильтров (7.4) в виалу автодозатора.

В случаях, когда не применяют автодозатор, вручную вводят 20  фильтрованного раствора.

9.4 Измерения

Проводят хроматографический анализ и идентифицируют изомеры IDHA по времени удерживания наблюдаемых пиков (см. рисунок В.2). Измеряют сумму площадей обоих пиков. Определяют концентрацию IDHA, используя график градуировки (см. рисунок В.3).

Для обеспечения достаточной воспроизводимости концентрация IDHA в анализируемых растворах должна соответствовать пределам градуировки.

10 Обработка результатов

10.1 Расчет содержания IDHA в г/100 г образца

Расчет может быть выполнен вручную или с помощью компьютера, с применением параметров градуировки относительно используемого количества.

В случаях расчета с помощью компьютера и с применением количеств основного раствора по таблице 1 концентрация IDHA в миллиграммах на кубический дециметр будет рассчитываться автоматически.

Рассчитывают массовую долю суммы R,S-, R,R- и S,S-изомеров IDHA (свободная кислота) , г/100 г, в соответствии с формулой (1)

,

(1)

где А - концентрация IDHA, рассчитанная системой из калибровочного графика, ;

E - масса образца для анализа, г.

10.2 Расчет содержания IDHA в мкмоль/100 г образца

Рассчитывают содержание IDHA , мкмоль/100 г, в соответствии с формулой (2)

,

(2)

где - массовая доля IDHA, г/100 г образца;

249,1 - молярная масса свободной кислоты IDHA.

11 Прецизионность

11.1 Межлабораторные испытания

Межлабораторные испытания были проведены в 2008 г. в два этапа с участием 11 и 10 лабораторий и с использованием девяти различных образцов удобрений. Повторяемость и воспроизводимость были рассчитаны в соответствии с [3].

Значения, полученные с помощью этих межлабораторных испытаний, не могут быть применены к концентрационным пределам и формам, которые отличаются от приведенных в приложении А.

11.2 Повторяемость

Абсолютное расхождение между двумя результатами независимых единичных анализов, полученными одним и тем же методом на идентичных объектах испытаний в одной и той же лаборатории одним и тем же исполнителем с использованием одного и того же оборудования в течение короткого промежутка времени, будет не более чем в 5% случаев превышать значения пределов повторяемости г, приведенные в таблице 3.

11.3 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между двумя результатами независимых единичных анализов, полученными одним и тем же методом на идентичных объектах испытаний, в разных лабораториях разными исполнителями с использованием разного оборудования, будет не более чем в 5% случаев превышать значения воспроизводимости R, приведенных в таблице 3.

Таблица 3 - Среднеарифметические значения, пределы повторяемости и воспроизводимости

В процентах
Образец		r	R
NPK 15-10-15	1,77	0,13	1,11
NPK 10-5-15	2,32	0,27	1,15
NPK 15-15-15	2,03	0,38	1,56
NPK 15-10-20	2,13	0,12	1,93
Cu (IDHA), твердый	40,59	1,91	9,22
Fe (IDHA), твердый	37,68	2,79	16,83
Fe (IDHA), раствор	11,71	0,86	2,81
Mn (IDHA), твердый	41,80	0,96	5,42
Zn (IDHA), твердый	40,80	1,51	11,91

12 Протокол испытаний

Протокол испытаний должен содержать:

a) всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

b) метод анализа, используемый со ссылкой на настоящий стандарт;

c) полученные результаты анализа;

d) дату проведения отбора и подготовки проб (если известна);

e) дату окончания анализа;

f) было ли выполнено требование предела повторяемости;

g) все детали операций, не указанные в настоящем документе или рассматриваемые как дополнительные, а так же сведения о любых случаях, которые имели место во время выполнения метода и которые могли повлиять на результат(ы) анализа.

_____________________________

* LiChrosorb RP-18 или RP-8 5 мкм 250/4,6 мм или эквивалентный является примером подходящих, доступных к покупке продуктов. Эта информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не имеет никакого подтверждения от CEN данного продукта.

Библиография

[1]	Regulation (EC) No 2003/2003 of the European Parliament and of the Council of 13 October 2003 relating to fertilizers, Official Journal L 304, 21/11/2003.P. 0001-0194 and amendments [Правила (ЕС) N 2003/2003 Европейского Парламента и совета от 13 октября 2003 г., относящейся к удобрениям, официальный журнал L304, 21/11/2003 стр. 1 - 194) и изменения]
[2]	EN 1482-1	Fertilizers and liming materials - Sampling and sample preparation - Part 1: Sampling [Удобрения и известковые материалы. Отбор и подготовка проб. Часть 1. Отбор проб]
[3]	ISO 5725-2	Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results - Part 2: Sampling [Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Отбор проб]