Приложение 2. Методология проведения проб для оценки активности изоферментов цитохрома Р-450 in vivo

Приложение 2

Методология проведения проб для оценки активности изоферментов цитохрома Р-450 in vivo

A. Методика проведения пробы для оценки активности CYP3A4-MEGX-тест

Суть теста заключается в определении в плазме крови концентрации моноэтилглицинксилидида (МЕGX), который является метаболитом лидокаина, образующийся под действием CYP3A4, после внутривенного введения данного препарата. MEGX-тест проводится следующим образом. Перед введением лидокаина производится забор крови из периферической или центральной вены - 0 минута. Введение лидокаина осуществляется в течение 1-2 минут внутривенно в дозе 1 мг/кг, разведенном в 5-10 мл физиологического раствора. Через 15 и 30 минут после введения лидокаина осуществляют забор крови из вен отличных от места введения данного ЛС. Пробы отбирают в стеклянные или пластмассовые центрифужные пробирки, центрифугируют 10 минут при 3000 об/мин, плазму переносят в пластиковые пробирки и если определение MEGX не планируется сразу же после проведения процедуры отбора, то пробы замораживают и хранят при температуре не выше -20°С. Перед измерением замороженному материалу дают максимально оттаять при комнатной температуре и тщательно перемешивают. Повторное размораживание проб не желательно, так как это может повлиять на результат измерения. Определение концентрации MEGX проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на флюориметрическом детекторе или иммуноферментным методом на приборе Tdx с помощью специальных коммерческих наборов.

B. Методика проведения пробы для оценки активности CYP3A4 по соотношению в моче

Оценка активности CYP3A4 может определяться по отношению концентрации к концентрации кортизола в утренней моче т.к. образуется из кортизола исключительно под действием CYP3A4. Вся во время утреннего туалета собирается в отдельную емкость, затем из нее перемещается в пластмассовую пробирку, допускается замораживание мочи. Также преимуществом теста является возможность сбора материала (мочи) в домашних условиях. Концентрации и кортизола в моче определяется методом хромато-масс-спектрометрического анализа на высокоэффективном жидкостном хроматографе, что является главным недостатком теста т.к. делает его дорогим. Низкие значения отношения соответствует низкой активности CYP3A4, а высокие значения отношения - высокой активности CYP3A4.

С. Методика проведения пробы для оценки активности CYP2C9-лозартановый тест

Тест основан на том, что лозартан метаболизруется преимущественно под влиянием CYP2C9 до активного метаболита Е-3174. Тест проводят следующим образом. Утром натощак назначают 50 мг лозартана, в этого времени# в течение 8 часов собирают мочу собирается# в отдельную емкость, затем из нее перемещается в пластмассовую пробирку, допускается замораживание мочи. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии определяются концентрации лозартана и Е-3174 в моче, рассчитывается отношение Е-3174/лозартан. Низкие значения отношения Е-3174/лозартан соответствует низкой активности CYP2С9, а высокие значения отношения Е-3174/лозартан - высокой активности CYP2С9.