Методические указания МУК 4.1.1433-03 "Измерение концентраций Спиносада в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1433-03
"Измерение концентраций Спиносада в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Дата введения: 30 июня 2003 г.

2. Методика измерения концентраций Спиносада в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении концентрации веществ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 5 нг (каждого из соединений).

Предел обнаружения в воздухе при отборе 50 воздуха - 0,02 .

Диапазон определяемых концентраций - 0,02-0,2 (при отборе 50 воздуха).

Среднее значение определения - 96%.

Стандартное отклонение (S) - 2,23%.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 0,91%.

Доверительный интервал среднего - 2,34%.

Суммарная погрешность измерения не превышает 20,4%.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Спинозин А с содержанием д.в. 91,2% (Дау Агро Сайенс, Англия) Спинозин Д с содержанием д.в. 94% (Дау Агро Сайенс, Англия)
Аммоний уксусно-кислый, хч	ГОСТ 3117-78
Ацетон, чда	ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии (УФ 210 нм)	ТУ 6-09-4326-76
Вода дистиллированная, деионизованная или перегнанная над
Метанол-яд, хч	ГОСТ 6995-77
Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные, предварительно промытые ацетоном	ТУ 6-09-2678-77

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостной хроматограф Waters (США) с ультрафиолетовым детектором Хроматографическая колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 3,9 мм, содержащая ХТеrrа MS C18, зернение 5 мкм; предколонка Symmetry Sheld RP 18, длиной 2 см, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм Микрошприц для жидкостного хроматографа, вместимостью 50-100 мкл
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный	ТУ 25-11-917-76
Весы аналитические типа ВЛА-200	ГОСТ 34104-80Е
Насос водоструйный	ГОСТ 10696-75
Аспирационное устройство типа ЭА-1 или аналогичное	ТУ 25-11-1414-78
Барометр	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°C, пределы измерения 0-55°C	ГОСТ 215-73Е
Колбы мерные, вместимостью 100 и 1000 мл	ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные, вместимостью 10 и 500 мл	ГОСТ 1770-74Е
Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью 100 мл	ГОСТ 10394-72
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336-82Е
Стаканы химические, вместимостью 100 мл	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл	ГОСТ 20292-74
Воронки химические конусные, диаметром 34-40 мм	ГОСТ 25336-82Е
Груша резиновая Фильтродержатели Стеклянные палочки

2.4. Отбор проб

Воздух со скоростью 5 пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации вещества на уровне 0,02 следует отобрать 50 воздуха.

Фильтры с отобранными пробами, помещенные в герметически закрываемые склянки, можно хранить в холодильнике при температуре °C в течение 15 дней.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Приготовление 2%-ного раствора аммония уксусно-кислого

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 г уксусно-кислого аммония, добавляют 50-70 мл дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества, доводят дистиллированной водой до метки, вновь перемешивают.

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Отмеряют по 350 мл ацетонитрила и метанола, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, добавляют 200 мл 2%-ного раствора уксусно-кислого аммония (по п. 2.5.1), фильтруют и дегазируют.

2.5.3. Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой при скорости подачи растворителя 1 мл/мин в течение 30-45 мин до получения стабильной базовой линии.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор Спинозина А (Спинозина Д) с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,1094 г препарата, содержащего 91,4% д.в. (0,1064 г препарата, содержащего 94% д.в.), в смеси ацетонитрил:метанол в соотношении 1:1 (по объему) в мерной колбе вместимостью 100 мл. Затем по 10,0 мл стандартных растворов Спинозина А или Спинозина Д с концентрацией 100 мкг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем до метки смесью растворителей ацетонитрил:метанол (1:1). Получают стандартные растворы, содержащие по 10,0 мкг/мл Спинозина А или Спинозина Д. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят стандартные растворы, содержащие по 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д.

Стандартные растворы можно хранить в холодильнике при °C в течение 3 месяцев.

2.5.5. Построение градуировочных графиков

Для построения градуировочных графиков в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора Спинозина А или Спинозина Д с концентрацией 0,25; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочные графики зависимости площади хроматографического пика от концентраций Спинозина А и Спинозина Д в растворе (мкг/мл).

2.6. Описание определения

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетона, оставляют на 10-15 мин, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40°C, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.

2.7. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Waters (США).

Колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 3,9 мм, содержащая ХТеrrа MS C18, зернением 5 мкм, предколонка Symmetry Sheld RP 18, длиной 2 см, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил - метанол - 2%-ный уксусно-кислый аммоний (35:35:20, по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 245 нм.

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время выхода: Спинозин А: 11,432-11,437 мин;

Спинозин Д: 14,910-14,915 мин.

Линейный диапазон детектирования: 5,0-50,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,5 мкг/мл, разбавляют ацетонитрилом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание Спиносада в пробе воздуха рассчитывают по формуле:

, где

X - содержание Спиносада в пробе воздуха, ;

- концентрация Спинозина А в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

- концентрация Спинозина Д в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

V - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20°C), .

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. Разработчики

Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук, Довгилевич Е.В., канд. биол. наук, Калинина Т.С., канд. с.-х. наук, Довгилевич А.В., канд. хим. наук, Устименко Н.В., канд. биол. наук.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095) 976-37-68, факс: (095) 976-43-26.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко