Методические указания по лабораторным исследованиям на псевдомоноз животных и птиц N 432-3 (утв. Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 14 ноября 1988 г.)

1. Общие положения

1.1. Псевдомоноз - остро протекающая септическая болезнь пушных зверей и птиц. У других видов животных болезнь поражает чаще молодняк и протекает в форме пневмоний, энтеритов и артритов; у взрослого крупного рогатого скота и свиней вызывает маститы или заболевания мочеполовых органов.

1.2. Возбудитель болезни - Pseudomonos aeruginosa - крупная, грамотрицательная, не образующая спор подвижная палочка.

1.3. Диагноз на псевдомоноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

1.4. Для исследования в лабораторию направляют трупы мелких животных целиком, замершие эмбрионы птицы, от крупных животных - паренхиматозные органы, при вагинитах и метритах - выделения из половых путей, при маститах - молоко.

1.5. Исследование на псевдомоноз включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды, заражение лабораторных животных и определение серогрупповой принадлежности возбудителя.

2. Микроскопическое исследование

2.1. Из паренхиматозных органов и другого патологического материала делают мазки и окрашивают их по Граму.

2.2. В положительных случаях в мазках обнаруживают прямые или слегка изогнутые грамотрицательные палочки с закругленными концами.

3. Бактериологическое исследование

3.1. Высевы из патологического материала делают в МПБ и на МПА (рН 7,2-7,4). Посевы инкубируют в термостате при 37-38°С в течение 24-48 часов.

На МПА в чашках вырастают округлые выпуклые колонии с изрезанными краями, блестящей поверхностью и кратерообразным углублением в центре. На скошенном агаре возбудитель растет в виде блестящего налета.

Через 18-24 часа инкубации возбудитель псевдомоноза вызывает помутнение бульона с образованием сероватой пленки на его поверхности и осадком на дне пробирки.

Нередко культуры имеют ароматический запах, вначале напоминающий запах жасмина, в дальнейшем - аммиачный.

К концу вторых суток культивирования Ps. aeruginosa образует пигмент пиоцианин, который изменяет цвет питательных сред до сине-зеленого (при его отсутствии жидкую среду необходимо энергично встряхнуть).

3.2. Выделенные культуры идентифицируют по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам, патогенности для лабораторных животных, а также определяют серогрупповую принадлежность возбудителя в РА на стекле.

3.3. Для дифференциации возбудителя псевдомоноза от других микроорганизмов данного рода используют следующие тесты: образование пиоцианина, рост при 42°С, ферментация углеводов, свертывание молока, разжижение желатины и гемолиза.

3.3.1. Обнаружение пиоцианина. Ps. aeruginosa продуцирует сине-зеленый пигмент пиоцианин, растворимый в воде и хлороформе, тогда, как сине-зеленые пигменты, образуемые другими микроорганизмами данного рода, растворяются только в воде.

Для обнаружения пиоцианина в пробирку с суточной бульонной культурой добавляют 4-5 капель хлороформа, энергично встряхивают и дают отстояться. Синее окрашивание осевшего на дно хлороформа свидетельствует о наличии пиоцианина.

3.3.2. Определение термофильности. Исследуемую культуру выращивают на обычных питательных средах при 42°С в течение суток. Ps. aeruginosa, в отличие от других представителей этого рода, растет при данной температуре. Этот признак позволяет дифференцировать беспигментные штаммы.

3.3.3. Ферментация углеводов. Исследуемую культуру засевают на среды Гисса, содержащие 0,1-0,2% пептона и 0,25% соответствующего углевода (по 2 пробирки с каждым углеводом). В одну из каждых двух засеянных пробирок для создания анаэробных условий на поверхность среды наслаивают стерильное вазелиновое масло столбиком высотой 0,5 см.

Учет реакции проводят после инкубации посевов при 37-38°C в течение 4 суток.

Возбудитель псевдомоноза ферментирует в аэробных условиях с образованием кислоты без газа глюкозу, галактозу, арабинозу. Некоторые свежевыделенные штаммы ферментируют лактозу.

В анаэробных условиях сбраживания углеводов не происходит.

3.3.4. Свертывание молока. Обезжиренное молоко подщелачивают до рН 7,6-7,8 10%-ным раствором двууглекислого натрия, разливают в пробирки по 10,0 мл и стерилизуют при 0,5 атм в течение 30 минут.

Свежевыделенные штаммы Ps. aeruginosa через 16-18 часов культивирования свертывают и пептонизируют молоко, при этом оно приобретает желтовато-зеленый цвет, особенно в верхнем слое.

3.3.5. Разжижение желатины. Суточную бульонную культуру Ps. aeruginosa засевают в МПЖ. Через 16-18 часов наблюдается разжижение желатины в виде воронки, в дальнейшем - послойное.

3.3.6. Определение гемолитических свойств. Свежеполученную культуру Ps. aeruginosa засевают в чашки Петри с глюкозо-кровяным агаром и помещают в термостат при 37-38°С.

Возбудитель псевдомоноза через 18-24 часа культивирования вызывает гемолиз эритроцитов.

3.4. При необходимости определить серогрупповую принадлежность возбудителя ставят реакцию агглютинации на стекле с О-агглютинирующими псевдомонозными сыворотками согласно Временному наставлению по применению набора О-агглютинирующих сывороток для диагностики псевдомоноза, утвержденному Главным управлением ветеринарии 15 декабря 1982 года.

4. Биологическое исследование

4.1. Для определения патогенности суточную бульонную культуру в дозе 0,2-0,3 мл вводят подкожно 2-3 белым мышам массой 18-20 г.

4.2. Гибель мышей наступает через 1-3 суток. Срок наблюдения за зараженными животными до 5 суток.

4.3. Из внутренних органов павших животных делают высевы на МПА и в МПБ.

5. При выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя этого заболевания и патогенной для белых мышей, результаты исследований используют для постановки комплексного диагноза на псевдомоноз.

6. Срок исследования 6 суток.

Начальник Главного управления ветеринарии Госагропрома СССР

А.Д. Третьяков