Методические указания по определению остаточных количеств дельтаметрина в кукурузном масле методом газожидкостной хроматографии (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 17 октября 2005 г.)

Настоящие методические указания устанавливают метод газожидкостной хроматографии для определения массовой концентрации дельтаметрина в кукурузном масле в диапазоне 0,01-0,1 мг/кг.

Дельтаметрин - действующее вещество инсектицидов Децис, КЭ (25 г/л), Децис Экстра, КЭ (125 г/л) и Децис Профи, ВДГ (250 г/кг), фирма производитель Байер Кроп Сайенс (Германия).

(S)--циано-3-феноксибензил (1 R, 3 К)-3-(2,2-дибромвинил)-2,2-димет илциклопропанкарбоксилат (ИЮПАК)

(1 R-[1-(S*),3-]]-циано(3феноксифенил)метил 3-(2,2дибромэтенил)-2, 2-диметилциклопропанкарбоксилат (С.А.)

Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления: 100 - 102°С. Давление паров при 25°С: 1,24 х мПа. Коэффициент распределения н-октанол/вода: log Р = 4,6. Растворимость (г/дм3) при 20°С: диоксан - 900, циклогексан - 750, дихлорметан - 700, ацетон - 500, этанол - 15, вода (при 25°С) < 0,2 .

Стабильно при хранении на воздухе. Более стабильно в кислой, чем в щелочной среде ( - 2,5 дня при pH 9).

В биологически активных почвах в аэробных условиях дельтаметрин подвергается микробиологическому разложению в течение 1 - 2 недель.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность () для крыс - 128 - 138 мг/кг; острая дермальная токсичность () для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность () для крыс - 2,2  воздуха.

Дельтаметрин вызывает умеренное раздражение глаз кролика и не влияет на кожу. Вещество токсично для рыб ( = 0,9 - 1,4 ) и пчёл ( - 50 - 80 нг/особь).

Рекомендуемый норматив для дельтаметрина в кукурузном масле - 0,02 мг/кг.

Область применения препарата

Дельтаметрин - инсектицид контактного и кишечного действия из группы синтетических пиретроидов. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жёсткокрылых, перепончатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых и овощных культур, кукурузы, хлопчатника, на плантациях картофеля, технических и плодовых культур при норме расхода 5 - 25 г д.в./га.

Зарегистрирован в России под торговыми названиями Децис, КЭ (25 г/л), Децис Экстра, КЭ (125 г/л) и Децис Профи, ВДГ (250 г/кг) в качестве инсектицида для применения в посевах пшеницы, ячменя, кукурузы, пастбищных трав, в посадках капусты и картофеля, на плодовых культурах путём опрыскивания вегетирующих растений.

1. Метрологические характеристики метода

Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Метрологические параметры

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, S, %	Относи тельное отклонение DS, %	Доверительный интервал среднего, %
Масло	0,01	0,01 - 0,1	83,8	4,2	1,9	3,9

Таблица 2

Полнота определения дельтаметрина в модельной матрице (n = 5)

Матрица	Внесено дельтаметрина, мг/кг	Открыто дельтаметрина, %	Доверительный интервал среднего, %
Масло	0,01	79,3
	0,02	83,5
	0,05	85,4
	0,10	87,0

2. Методы измерений

Методика основана на определении вещества с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с электронозахватным детектором (ЭЗД). Контроль дельтаметрина в матрице осуществляется по содержанию вещества после экстракции его из масла водным ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак-диол.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ЭЗД	Номер Госреестра
(СКВ "Хроматэк", Россия)	N 14516-95
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,036 г	ГОСТ 7328
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ 7328
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой вместимостью 5	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 50, 100, 500 и 1000	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Дельтаметрин, аналитический стандарт фирмы Байер (Германия) с содержанием д.в. 99,6%

Ацетон, чда	ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил, ч	ТУ 6-09-3534-82
Вода бидистиллированная	ГОСТ 6702
н-Гексан,	ТУ 6-09-3375
Натрий сернокислый, безводный, хч	ГОСТ 4166
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч	ГОСТ 22300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Азот газообразный (баллон), осч.	ГОСТ 9293
Аппарат для встряхивания типа АВУ	ТУ 64-1-1081
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма Branson Instr. Со. (США)
Воронки делительные вместимостью 100	ГОСТ 25336
Дефлегматор елочный	ГОСТ 9737
Колбы плоскодонные вместимостью 250	ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 150	ГОСТ 9737
Колонка хроматографическая стеклянная, длиной 25 см	ГОСТ 9737
Концентрирующий патрон Диапак-диол (ЗАО БиоХимМак, РФ)
Силикагель (0,063-0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
Стекловата
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi (Швейцария)	ТУ 25-11-917
Установка для перегонки растворителей
Колонка хроматографическая, стеклянная, длиной 1 м, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Хромосорб W/HP (0,12-0,15 мм) с 3% SE-30
Колонка капиллярная кварцевая, ZB-1, длиной 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex (США) или аналогичная
Центрифуга Т-23 (Janetzki, Германия) или аналогичная
Шприц для ввода образцов в газовый хроматограф вместимостью 10	ТУ 64-1-2850

Допускается применение другого оборудования с аналогичными или лучшими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на газовый хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на газовом хроматографе.

К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20+5)°С и относительной влажности не более 80%.

- выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем и концентрирующих патронов Диапак-диол.

7.1. Очистка органических растворителей

7.1.1. Очистка н-гексана

Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения ее окрашивания в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

7.1.2. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

7.2. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 20  гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15  гексана со скоростью 1-2 капли в сек., после чего она готова к работе.

7.3. Проверка хроматографического поведения дельтаметрина на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу вместимостью 10  помещают 1  градуировочного раствора N 1 дельтаметрина с концентрацией 1  в гексане (п. 7.6.2), отдувают растворитель током азота, остаток растворяют в 3  гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с силикагелем, подготовленную по п. 7.2. Промывают колонку 50  гексана со скоростью 1-2 капли в сек., элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 50  смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему). Фракционно (по 5 ) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2  гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дельтаметрина по п. 9.5.

7.4. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-диол

Концентрирующий патрон промывают последовательно с помощью медицинского шприца 20  смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и 10  гексана со скоростью 5 

7.5. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки

Засыпают готовую насадку (3% SE-30 на Хромосорбе W/HP) в стеклянную колонку и уплотняют под вакуумом. Колонку устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 270°С и скорости газа-носителя 2,5  в течение 8-10 часов.

7.6. Приготовление градуировочных растворов

7.6.1. Исходный раствор дельтаметрина для градуировки (концентрация 100 ). В мерную колбу вместимостью 100  помещают 0,010 г. дельтаметрина, растворяют в 40-50  гексана, доводят гексаном до метки, тщательно перемешивают.

Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение 3-х месяцев.

7.6.2. Раствор дельтаметрина N 1 для градуировки (концентрация 1 ).

В мерную колбу вместимостью 100  помещают 1  исходного раствора дельтаметрина с концентрацией 100  (п. 7.6.1.), разбавляют гексаном до метки. Этот раствор используют для приготовления рабочих градуировочных растворов N N 2-5, а также проб масла с внесением при оценке полноты извлечения дельтаметрина из исследуемых образцов.

Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше -18°С в течение месяца.

7.6.3. Рабочие растворы N N 2-5 дельтаметрина для градуировки (концентрация 0,01-0,1 ).

В 4 мерные колбы вместимостью 100  помещают 1.0, 2.0, 5.0 и 10.0  градуировочного раствора N 1 дельтаметрина с концентрацией 1  (п. 7.6.2), доводят до метки гексаном, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N N 2-5 с концентрацией дельтаметрина 0.01, 0.02, 0.05 и 0.10 , соответственно.

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ*с) от концентрации дельтаметрина в растворе (), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 2  каждого градуировочного раствора (п. 7.6.3) и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.5. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.

8. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТом 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 4-6°С. В некоторых случаях масло получают из зерна кукурузы экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.

9. Выполнение определения

9.1. Экстракция дельтаметрина

Образец масла массой 5 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 , добавляют 100  смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин. Эмульсию центрифугируют 5 мин. при 6000 g и отделяют водно-ацетонитрильную фазу. Операцию экстракции масляной фазы повторяют, используя 50  смеси ацетонитрил-вода (80:20, по объему), и отделяют водно-ацетонитрильную фазу центрифугированием. Измеряют объем объединенной водно-ацетонитрильной фазы, отбирают 2/5 объема этой фазы (эквивалентна 2 г образца) и переносят в делительную воронку вместимостью 100 .

9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

К экстракту, полученному по п. 9.1. и помещенному в делительную воронку, прибавляют 15  гексана и воронку интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После разделения фаз нижний водно-ацетонитрильный слой переносят в круглодонную колбу и упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (7-10 ) при температуре 40°С. К водному остатку прибавляют 10  ацетона, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 . В воронку вносят 30  гексана, интенсивно встряхивают воронку в течение 2-х мин. После разделения фаз верхний гексановый слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажный фильтр в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 150 . Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20  гексана. Объединенную гексановую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С.

9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.2., растворяют в 3  гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.2. Колбу обмывают трижды порциями по 3  гексана, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 40  гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек., элюат отбрасывают. Дельтаметрин элюируют 40  смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) в круглодонную колбу вместимостью 100 . Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40°С.

9.4. Очистка экстракта на концентрирующем патроне Диапак - диол

Сухой остаток в круглодонной колбе, полученный по п. 9.3., растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 2  гексана и раствор переносят в подготовленный концентрирующий патрон (п. 7.4.). Дельтаметрин элюируют 7  гексана, отбрасывая 1  и собирая последующие 6  элюата в круглодонную колбу вместимостью 25 . Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30°С. Остаток в колбе растворяют в 2  гексана, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют на содержание дельтаметрина по п. 9.5.

9.5. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше

Колонка хроматографическая, стеклянная, 1000x2 мм, неподвижная фаза - 3% SE-30 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)

Температура испарителя - 270°С, термостата колонки - 240°С, детектора - 320°С

Скорость потока газа-носителя (азот) - 50 

Объем вводимой пробы - 2 

Ориентировочное время выхода дельтаметрина: 2,7 - 2,8 мин.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,2 нг

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 , разбавляют гексаном.

10. Обработка результатов анализа

Содержание дельтаметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

, где

X - содержание дельтаметрина в пробе, мг/кг;

- площадь пика образца, мВ*с;

- площадь пика стандарта, мВ*с;

А - концентрация стандартного раствора дельтаметрина, ;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

m - масса анализируемой части образца (г) / для масла - 2 г/.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Талалакина Т.Н., науч. сотр.; Дубовая Л.В., науч. сотр.; Макеев А.М., зав. лаб., канд. биол. наук.

ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл., п/о Большие Вяземы 592-92-20

Подпись руки  Талалакиной Т.Н., Дубовой Л.В. и Макеева А.М.  заверяю

                           Зав. канцелярией ВНИИФ

                                                    (Банюлис Г.Г.)

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко