Методические указания по лабораторным исследованиям на дизентерию свиней, вызываемую трепонемой (утв. Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 25 декабря 1983 г.)

1. Общие положения

1.1. Дизентерия свиней, вызываемая трепонемой (Treponema hyodysеnteriae), - острая инфекционная болезнь.

Бактероиды, фузобактерин, вибрионы, клостридии и другие микроорганизмы кишечника свиней способствуют созданию благоприятных условий для проявления трепонемами патогенного действия.

1.2. Диагноз на дизентерию свиней ставят на основании эпизоотологических, клинических и патолого-анатомических данных, а также результатов лабораторного исследования.

1.3. Лабораторные исследования на дизентерию заключаются в обнаружении трепонем при микроскопическом исследовании патологического материала.

1.4. Материалом для прижизненной диагностики служат фекалии, для посмертной - слизистая оболочка большой ободочной кишки павших или убитых с диагностической целью свиней.

1.4.1. Фекалии от больных свиней берут ватным тампоном из прямой кишки. Для этого стерильный ватный тампон вводят в прямую кишку на глубину 7-8 см и делают вращательные движения, прижимая тампон к стенке кишки, затем его извлекают и помещают в пробирку с 8-10 мл физиологического раствора.

1.4.2. У животных, убитых с диагностической целью, вырезают участок большой ободочной кишки, освобождают ее от содержимого, промывают водопроводной водой, затем соскабливают скальпелем около 1 г слизистой оболочки, переносят в пробирку с 8-10 мл физиологического раствора и суспендируют.

Допускается отбор материала и от трупов не позднее 2 ч после гибели.

1.5. Приготовленную суспензию исследуют непосредственно в хозяйстве или отправляют в ветеринарную лабораторию. При пересылке материала в лабораторию пробирки закрывают резиновыми пробками и помещают в термос со льдом.

1.6. Материал должен быть исследован в течение 2-4 ч, при хранении на холоде - в течение 6-8 ч.

2. Порядок исследования материала

2.1. Материал исследуют микроскопически, методом фазового контраста, путем просмотра в темном поле или в проходящем свете (подкрашенных и окрашенных препаратов).

2.1.1. Стекла, используемые для микроскопии, должны быть бесцветными, прозрачными, чистыми, без царапин и бликов.

2.2. Метод фазового контраста. Для исследования этим методом используют устройство КФ-4 или МФА-2, осветитель ОИ-9 или подобный, окуляр 7Х-10Х, объектив 40Х и светофильтр ЗС-2. Установку фазово-контрастного устройства и работу с ним выполняют, руководствуясь указаниями прилагаемой к нему инструкции.

2.2.1. Для исследования на чистое обезжиренное предметное стекло наносят 1-2 капли заранее приготовленной суспензии слизистой оболочки или фекалий и накрывают их покровным стеклом, избегая образования под ним пузырьков воздуха. На одном предметном стекле можно готовить три раздавленных капли.

2.3. Микроскопия в темном поле. Препараты готовят, как указано в подпункте 2.2.1, и просматривают при увеличении в 280-400 раз (окуляр 7Х или 10Х, объектив 40Х - водная иммерсия).

2.4. Исследование подкрашенных нативных препаратов. На предметное стекло наносят каплю суспензии исследуемого материала и к ней добавляют каплю красителя (см. приложение), накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 200-400 раз.

2.5. Исследование окрашенных препаратов. Из суспензии готовят мазки, фиксируют метиловым спиртом или над пламенем горелки и окрашивают по Граму, Романовскому-Гимзе или фуксином Пфейффера.

2.6. В нативных препаратах трепонемы имеют вид подвижных извитых нитей с острыми концами, перемещающихся поступательно, змеевидно. Различают 3 вида трепонем свиней: крупные - длиной до 20 мкм, шириной 0,2 мкм, с 8-12 завитками; средние - длиной 8-12 мкм, с 6-8 завитками и малые - длиной до 8 мкм, шириной 0,1 мкм, с 3-4 завитками. Завитки расположены равномерно.

По размерам вибрионы в сравнении с трепонемами в 2-4 раза толще, с тупыми концами. Могут приобретать вид спирали с тремя и более изгибами, но меньшей амплитудой их расположения, чем у трепонем. Движение вибрионов - вращательное вокруг длинной оси.

У большинства больных дизентерией свиней при исследовании раздавленной капли в одном поле зрения микроскопа обнаруживают 5-10 и более (в зависимости от тяжести процесса) средних и крупных трепонем.

В окрашенных фиксированных препаратах обнаруживают грамотрицательные микроорганизмы с характерной для трепонем морфологией.