Методические указания по определению остаточных количеств Бромуконазола в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых колосовых культур, ягодах черной смородины и винограда методом газожидкостной хроматографии МУК 4.1.1467-03 (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Методические указания по определению остаточных количеств Бромуконазола в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых колосовых культур, ягодах черной смородины и винограда методом газожидкостной хроматографии
МУК 4.1.1467-03
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 24 июня 2003 г.)

Дата введения: 30 июня 2003 г.

2. Методика определения Бромуконазола в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых колосовых культур, ягодах черной смородины и винограда методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Бромуконазола с помощью газожидкостной хроматографии (капиллярные и набивные колонки) с детектором электронного захвата после экстракции органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением в хлороформ. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода.

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы. Избирательность метода в значительной степени увеличивается при использовании капиллярной колонки с программированием температуры термостата колонок.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода.

Метрологические характеристики метода приведены в таблицах 1-2.

Таблица 1

Метрологическая характеристика метода

Метрологические параметры, р = 0,95, n = 20
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг (л)	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Изомер N 1 (LS 850646)
вода	0,001	0,001-0,1	107,2	3,4	4,2
почва	0,02	0,02-0,2	79,7	4,1	5,1
зерно	0,04	0,04-0,4	83,6	4,4	5,5
зеленая масса растений	0,04	0,04-0,4	79,8	5,2	6,4
ягоды черной смородины	0,04	0,04-0,4	82,2	2,8	2,36
ягоды винограда	0,04	0,04-0,4	85,4	2,7	2,64
Изомер N 2 (LS 850647)
вода	0,001	0,001-0,1	103,7	3,4	4,8
почва	0,02	0,02-0,2	78,5	4,2	5,6
зерно	0,04	0,04-0,4	76,4	4,8	5,9
зеленая масса растений	0,04	0,04-0,4	72,1	5,1	6,7
ягоды черной смородины	0,04	0,04-0,4	83,4	2,4	2,56
ягоды винограда	0,04	0,04-0,4	85,1	2,8	2,81

Таблица 2

Полнота определения Бромуконазола в воде, почве, зерне и растениях

Среда	Добавлено Бромуконазола, мг/кг	Обнаружено, мг/кг	Полнота определения, %
1	2	3	4
Изомер N 3 (LS 850646)
вода	0,01		106,2
	0,02		107,4
	0,05		108,1
почва	0,02		77,6
	0,04		78,8
	0,08		81,9
	0,20		80,5
зерно	0,04		79,0
	0,08		82,6
	0,16		87,2
	0,40		85,6
растения	0,04		79,0
	0,08		82,6
	0,16		87,2
	0,40		85,6
Изомер N 2 (LS 850647)
вода	0,01		101,1
	0,02		104,5
	0,05		105,5
почва	0,02		76,5
	0,04		79,3
	0,08		81,4
	0,20		76,9
зерно	0,04		73,8
	0,08		75,3
	0,16		80,0
	0,40		76,8
растения	0,04		71,0
	0,08		72,0
	0,16		73,2
	0,40		72,2

2.2. Реактивы, материалы, приборы, оборудование.

2.2.1. Реактивы и материалы.

Азот газообразный особой чистоты, ГОСТ 9293-74

Ацетон ч.д.а., ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-87.

Бромуконазол, стандартный раствор в ацетоне с содержанием д.в. 100 мкг/мл (раствор N 1) и 10 мкг/мл (раствор N 2).

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Кислота хлороводородная (соляная), концентрированная, х.ч., ГОСТ 3118-77.

Кислота соляная, 0,1н р-р

Насадка для хроматографической колонки: Хроматон - N-cyпep с 5% OV-17 (0,16-0,20), Хемапол ЧССР и Хроматон - N-cyпep с 3% ХЕ-60 (0,125-0,160), Хемапол ЧССР

Натрия гидроокись, х.ч. ГОСТ 4328-77,

Натрия гидроокись, 4 н р-р

Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76

Хлороформ х.ч. ТУ-6-09-4263-76

2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ-64-1-1091-73

Весы аналитические по ТУ 64-1-1065

Воронки делительные на 250, 500 мл, ГОСТ 25336-82

Воронки химические, ГОСТ 25336-82

Колбы грушевидные на 50 мл, ГОСТ 25336-82

Колбы круглодонные на 500 мл, ГОСТ 25336-82

Колбы мерные на 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74

Колбы плоскодонные конические на 100, 250, 500 мл, ГОСТ 25336-82

Мельница для размола образцов, ТУ-46-22-23-79

Микрошприц МШ-10А по ТУ 64-1-2850

Пипетки мерные на 0,1; 1,0 мл, ГОСТ 20292-74

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ-25-11-917-74

Сито металлическое с диаметром отверстий 1-2 мм

Универсальная индикаторная бумага

Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ-6-09-1678-77

Хроматограф "ЦВЕТ-106", с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов или "Цвет 550"

Хроматографическая колонка стеклянная, спиральная 1500х3 мм, содержащая 5% OV-17 на хроматоне-N-cyпep (0,16-0,20) или 3% ХЕ-60 на хроматоне N-супер (0,125-0,160);

Хроматограф "Кристалл 2000м" с детектором по захвату электронов

Хроматографическая колонка капиллярная кварцевая HP - 5 (Crosslinked 5% РН ME Siloxane), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Цилиндры мерные на 30, 100, 250 мл ГОСТ 1770-74

ГАРАНТ:

Нумерация пунктов приводится в соответствии с источником

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше +4°С.

Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Растительные образцы для длительного хранения замораживаются и хранятся в холодильнике при -18°С, предварительно определяется содержание влаги. Образцы ягод замораживают и хранят в холодильнике при -18°С не более 1 месяца.

Перед анализом ягоды черной смородины и винограда гомогенизируют (растирают в ступке). Образцы воды фильтруют.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Вода. 500 мл воды помещают в делительную воронку объемом 500 мл и экстрагируют Бромуконазол хлороформом трижды по 150 мл. Объединенный экстракт осушают, пропуская через слой натрия сернокислого безводного и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40°С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл.

2.5.2. Почва. Навеску почвы 50 г, предварительно просеянной через сито, помещают в колбу объемом 250 мл, увлажняют 10-15 мл воды, заливают 100 мл водно-ацетоновой смеси (1:7) и встряхивают в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще дважды. Экстракты объединяют, упаривают на испарителе при t = 40°C, до водной фазы. Водную фазу количественно переносят в делительную воронку, пропуская через бумажный фильтр, и Бромуконазол экстрагируют трижды по 30 мл хлороформом, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, пропуская через безводный сернокислый натрий, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40°C. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. При необходимости экстракт очищают как указано для зерна и растений в разделе 2.5.3.

2.5.3. Зерно, растения. Навеску зерна 25 г, измельченную на электромельнице, а также навеску растений 25 г, измельченную ножницами, помещают в коническую колбу на 500 мл, заливают 100 мл ацетона и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще дважды. Экстракты объединяют, объединенный экстракт упаривают досуха при t = 40°С. Остаток в колбе смывают 3 раза по 20 мл 0,1н раствором соляной кислоты и количественно переносят в делительную воронку, пропуская раствор через бумажный фильтр. Подщелачивают раствор 4 н раствором гидроокиси натрия до рН среды 8-9 по индикаторной бумаге. Из щелочной среды Бромуконазол экстрагируют 3 раза хлороформом по 30 мл, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, пропуская через безводный сернокислый натрий, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40°C.

Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

2.5.4. Ягоды черной смородины и винограда

Навеску ягод 25 г, измельченную в ступке, помещают в коническую колбу на 500 мл, заливают 50 мл ацетонитрила и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще трижды. Экстракты объединяют, объединенный экстракт упаривают досуха при t = 40°C. Остаток в колбе разводят в 50 мл 0,1н раствором соляной кислоты, подщелачивают 4 н раствором гидроокиси натрия до рН среды 8. Из щелочной среды Бромуконазол переэкстрагируют 3 раза хлороформом по 25 м встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40°C.

Сухой остаток растворяют в 10 мл ацетона и хроматографируют.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов.

2.6.1. Условия хроматографирования

2.6.1.1. Почва, зерно и зеленая масса зерновых колосовых культур

Хроматограф газовый с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов "Цвет - 106" с пределом детектирования по Линдану не выше или другой аналогичного типа.

Неподвижная фаза - 5% OV-17 на Хроматоне-N-супер (0,16-0,20).

Колонка стеклянная, спиральная, 1500х3 мм

Температура: термостата колонки - 250°С

термостата испарителя - 280°С

термостата детектора - 290°С

Скорость газа-носителя - азота - 50 мл/мин

Объем, вводимый в испаритель - 1 мкл

Линейность детектирования - 1-10 нг

Время удерживания - изомера N 1 (LS 850646) - 6 мин 45 сек.;

изомера N 2 (LS 850647) - 5 мин 15 сек.

Рабочая шкала электрометра - А

Скорость протяжки ленты самописца - 200 мм/час

Хроматограф газовый с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов "Цвет - 550" с пределом детектирования по Линдану не выше

Неподвижная фаза - 3% ХЕ-60 на Хроматоне N-cyпep (0,125-0,160)

Колонка стеклянная, спиральная, 1500х3 мм

Температура: термостата колонки - 230°С

термостата испарителя - 280°С

термостата детектора - 290°С

Скорость газа-носителя - азота - 30 мл/мин

Объем, вводимый в испаритель - 1 мкл

Линейность детектирования - 1-10 нг

Время удерживания - изомера N 1 (LS 850646) - 6 мин 45 сек.;

изомера N 2 (LS 850647) - 5 мин 15 сек.

Рабочая шкала электрометра - А

Скорость протяжки ленты самописца - 200 мм/час

Каждую анализируемую пробу вводят в колонку хроматографа 3 раза. Образцы, дающие пики выше стандартного пика, разбавляют.

2.6.1.2. Вода, ягоды черной смородины, винограда

Хроматограф "Кристалл 2000м" с детектором по захвату электронов с пределом детектирования по Линдану не выше

Неподвижная фаза - Crosslinked 5% РН ME Siloxane

Колонка капиллярная кварцевая HP - 5, длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм

Температура: термостата колонки - 260°С

термостата испарителя - 280°С

термостата детектора - 340°С

Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, давление 82,58 кПа

Газ 2 (гелий) - 50 мл/мин: режим нормальный, расход 0,5 мл/мин, сброс 1:100

Газ 3 (азот, поддув детектора) - 30 мл/мин

Объем, вводимый в испаритель - 1 мкл

Время удерживания - изомера N 1 (LS 850646) - 8 мин 28 сек.;

изомера N 2 (LS 850647) - 9 мин 19 сек.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика. Образцы, дающие пики больше, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют.

2.6.2. Обработка результатов анализа

Количественный расчет двух изомеров Бромуконазола в анализируемой пробе проводят по следующей формуле:

, где

X - содержание изомера Бромуконазола в пробе, мг/кг

С - количество изомера Бромуконазола в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг

- высота пика стандартного раствора, введенного в хроматограф, мм

- высота пика изомера Бромуконазола в анализируемой пробе, мм

- объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл

- объем экстракта анализируемой пробы, мкл

Р - масса анализируемой пробы, г или мл

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Разработчики:

Кивачицкая М.М., Скурьят А.Ф., Карченя Г.К., БелНИИЗР, п. Прилуки, Минский р-он.

Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук; Калинина Т.С., ст.н.сотр., канд. с.-х. наук; Рыбакова О.И., н.сотр.

Московская сельскохозяйственная академия имени К. А. Тимирязева.

127550, Москва, Тимирязевский пр., 2, Кафедра химических средств защиты растений.

Телефон: 976-43-26.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко