Межгосударственный стандарт ГОСТ 34454-2018 "Продукция молочная. Определение массовой доли белка методом Кьельдаля" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 сентября 2018 г. N 569-ст)

Dairy products. Determination of protein content by the Kjeldahl method

МКС 67.100.10

Дата введения - 1 июля 2019 г.
Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены в ГОСТ 1.0-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2015 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Федеральным государственным автономным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" (ФГАНУ "ВНИМИ")

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 30 августа 2018 г. N 111-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	Минэкономики Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Россия	RU	Росстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 сентября 2018 г. N 569-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 34454-2018 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2019 г.

5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53951-2010*

6 Введен впервые

------------------------------

* Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 сентября 2018 г. N 569-ст ГОСТ Р 53951-2010 отменен с 1 июля 2019 г.

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молочную продукцию (молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты, молокосодержащие продукты с заменителем молочного жира) (далее - продукты) и устанавливает требования к методу Кьельдаля по определению массовой доли общего белка.

Диапазон измерения массовой доли белка от 0,10 до 100,00 %.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты*

------------------------------

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ ISO 707-2013 Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб**

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения***

------------------------------

** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 707-2010 "Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб".

*** В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике*

------------------------------

* В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4145-74 Реактивы. Калий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия

ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5833-75 Реактивы. Сахароза. Технические условия

ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия

ГОСТ 9656-75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 25794.1-83 Реактивы. Методы приготовления титрованных растворов для кислотно-основного титрования

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по [1], а также следующий термин с соответствующим определением:

3.1 массовая доля общего белка: Величина, пропорциональная содержанию азота, найденному титриметрическим методом, в условиях, установленных в настоящем стандарте, и выраженная в процентах.

Примечание - Коэффициенты пересчета массовой доли азота на массовую долю общего белка приведены в разделе 10.

4 Сущность метода

Метод основан на минерализации органического вещества анализируемой пробы продукта концентрированной серной кислотой в присутствии катализатора с образованием сернокислого аммония, переведении его в аммиак, отгонке последнего в раствор борной кислоты, количественном учете аммиака титриметрическим методом и расчете массовой доли белка в анализируемой пробе.

5 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда и реактивы

Весы с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более  1 мг по ГОСТ OIML R 76-1.

Термометр жидкостной (не ртутный) с диапазоном измерения от 0 до 100 °С, ценой деления шкалы 1 °С по ГОСТ 28498.

Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.

Плитка электрическая по ГОСТ 14919, мощностью 1000 Вт; электронагреватель или газовая горелка, позволяющие поддерживать температуру от 450 до 500 °С с допустимой погрешностью  25 °С.

Гомогенизатор роторный с четырехлопастным ножом, угловой скоростью вращения ножей 1000-10 000 мин^-1, включающий емкость вместимостью 1,0 дм³.

Баня водяная термостатируемая.

Колбы 1(2)-100-2, 1(2)-500-2, 1(2)-1000-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры 1(3)-25-2, 1(3)-50-2, 1(3)-100-2, 1(3)-1000-2 по ГОСТ 1770.

Пипетки исполнения 1-1(2)-1-5, 1-1(2)-1-25 по ГОСТ 29227.

Бюретки 1-1(2)-2-25-0,1 по ГОСТ 29251.

Холодильник ХПТ-3-400, ХШ-3-400 ХС по ГОСТ 25336.

Бачок-парообразователь или колба Кн-2-2000-50 ТС по ГОСТ 25336.

Колбы Кьельдаля 2-250-29 ТХС по ГОСТ 25336.

Пробирка П2Т-10 ТС по ГОСТ 25336.

Каплеуловитель КО-60 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканчик СВ-14/8(19/9) по ГОСТ 25336.

Колбы Кн-2-250, Кн-1-500(750)-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Колбы П-1-250(500)-29/32 ТС с притертыми пробками по ГОСТ 25336.

Стакан В-1-600 ТС по ГОСТ 25336.

Воронки В-36-50, В-56-80, В-75-110, ВД-1-50 ХС по ГОСТ 25336.

Ступка фарфоровая с пестиком по ГОСТ 9147.

Стакан 7 по ГОСТ 9147.

Капельница 2-50 ХС по ГОСТ 25336.

Палочки стеклянные оплавленные.

Шпатель металлический (фарфоровый) или ложка.

Аммоний сернокислый по ГОСТ 3769, х. ч. раствор молярной концентрации с ((NH₄)₂SO₄) = 0,05 моль/дм³.

Бромкрезоловый зеленый, ч. д. а.

Калий сернокислый по ГОСТ 4145, ч. д. а.

Кислота борная по ГОСТ 9656, х. ч., раствор массовой концентрации 40 г/дм³.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х. ч., плотностью 1830-1840 кг/м³.

Кислота соляная, стандарт-титр, раствор молярной концентрации с (HCl) = 0,1 моль/дм³.

L-триптофан, х. ч., или лизин моногидрохлорид, х. ч.

Стандартный образец (ГСО) сухого молока (СО СМОЛ-ПА, ГСО 10891-2017, АСМ-1, ГСО 9563-2010).

Медь сернокислая 5-водная по ГОСТ 4165, ч. д. а.

Метиленовый голубой, ч. д. а.

Метиловый красный, ч. д. а.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, ч. д. а., раствор массовой концентрации 400 г/дм³.

Перекись водорода 30 %-ная, х. ч.

Сахароза по ГОСТ 5833, х. ч., содержание азота не более 0,002 %.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

6 Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 26809.1, ГОСТ ISO 707.

7 Подготовка к проведению измерений

7.1 Приготовление реактивов

7.1.1 Приготовление смешанного катализатора

В фарфоровой ступке смешивают одну весовую часть сернокислой меди и 30 весовых частей сернокислого калия, тщательно растирают пестиком и перемешивают до получения мелкозернистого порошка.

Срок хранения смешанного катализатора при комнатной температуре - не более 1 мес.

7.1.2 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (HCl) = 0,1 моль/дм³

Используют стандарт-титр соляной кислоты. Раствор готовят в соответствии с прилагаемой к набору инструкцией. Срок хранения раствора в плотно укупоренной посуде из темного стекла - не более 1 мес.

Примечание - При отсутствии стандарт-титра приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,1 моль/дм³ и установку его точной концентрации (поправочного коэффициента) допускается проводить по ГОСТ 25794.1.

7.1.3 Приготовление раствора борной кислоты массовой концентрации 40 г/дм³

В мерную колбу вместимостью 1000 см³ помещают (40,000  0,005) г борной кислоты и растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды температурой (45  5) °С. После охлаждения раствора до температуры (20  5) °С объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора - не более 14 сут.

7.1.4 Приготовление смешанного индикатора

В мерную колбу вместимостью 100 см³ помещают (0,200  0,001) г метилового красного и (0,100  0,001) г метиленового голубого [или (0,100  0,001) г бромкрезолового зеленого], растворяют в небольшом количестве этилового спирта. Объем раствора доводят этиловым спиртом до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора в плотно укупоренной посуде из темного стекла - не более 10 сут.

7.1.5 Приготовление раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 400 г/дм³

В фарфоровый стакан вместимостью 1000 см³ помещают (400,000  0,005) г гидроокиси натрия, растворяют в 700 см³ дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения гидроокиси натрия, охлаждают до комнатной температуры и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см³. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.

Срок хранения раствора - не более 14 сут.

7.2 Подготовка прибора для отгонки аммиака

Прибор для отгонки аммиака собирают в соответствии с рисунком, приведенным в приложении А, или в соответствии с инструкцией к прибору.

В колбу 1 через воронку 2 наливают дистиллированную воду (примерно на 2/3 объема) и открывают зажимы 13. Нагревают воду в бачке на газовой горелке или электрической плитке. Присоединяют пустую колбу Кьельдаля 7 к каплеуловителю 6 и воронке для гидроокиси натрия 4 и после того, как вода закипит, закрывают крайний левый зажим. Включают холодильник 8, подставляют под него пустую коническую колбу 1 вместимостью 250 см³ и прибор "пропаривают" в течение 5-10 мин.

7.3 Подготовка пробы исследуемого продукта

7.3.1 Продукты без пищевкусовых компонентов или содержащие пищевкусовые компоненты, образующие с продуктом однородную структуру (кофе, какао, фруктово-ягодные добавки и т.п.), или неотделяемые пищевкусовые компоненты (кокосовую стружку, дробленые орехи и т.п.), максимально освобождают от упаковки, помещают в стакан вместимостью 600 см³ и нагревают на водяной бане до температуры (32  2) °С, тщательно перемешивая шпателем до получения однородной массы, не допуская разжижения продукта и освобождая его от воздушных пузырьков. После чего продукт помещают в стакан гомогенизатора и гомогенизируют в течение 3-5 мин при частоте вращения ножей от 2000 до 5000 мин^-1 до получения однородной массы. Подготовленный образец переносят в колбу вместимостью 500 см³ с притертой пробкой и охлаждают до температуры (20  2) °С.

Во избежание расслоения пробу для анализа отбирают сразу же после гомогенизации.

Творог, творожные и сухие продукты помещают в фарфоровую ступку, тщательно перемешивают и растирают, добиваясь однородности.

7.3.2 Продукты с отделяемыми пищевкусовыми компонентами и декорированные (орехи, печенье, вафли в виде декора, глазурь, начинки в виде стержня и другие отделяемые компоненты) максимально освобождают от наполнителей, глазури и декора и далее проводят процедуры по 7.3.1.

8 Условия проведения измерений

При выполнении измерений в лаборатории необходимо соблюдать следующие условия:

температура окружающего воздуха ... (20  5) °С;

относительная влажность воздуха ... (55  25) %;

атмосферное давление ... (96  10) кПа.

9 Проведение измерений

Пробу анализируют два раза в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-1 (подраздел 3.14).

9.1 При измерении массовой доли белка масса сухих веществ в анализируемой пробе должна быть не более 0,15 г.

9.1.1 В стаканчик с крышкой и вложенной в него стеклянной палочкой, не выступающей за его края, помещают и взвешивают следующее количество продукта:

- 0,70-0,75 г продукта с массовой долей жира от 0,10 до 5,00 % с записью результата до четвертого знака после запятой;

- 0,45-0,70 г продукта с массовой долей жира от 5,0 до 9,0 % с записью результата до четвертого знака после запятой;

- 0,40-0,45 г продукта с массовой долей жира более 9 % с записью результата до четвертого знака после запятой;

- 0,20-0,30 г пастообразных продуктов (творожных, сметаны и продуктов на ее основе, йогуртов и т.д.) с записью результата до четвертого знака после запятой;

- 0,30-0,40 г сгущенных продуктов с записью результата до четвертого знака после запятой;

- 0,1-0,15 г сухих продуктов с записью результата до четвертого знака после запятой.

С помощью палочки продукт переносят в колбу Кьельдаля, а пустой стаканчик (без продукта) с крышкой и палочкой вновь взвешивают и по разнице между первым и вторым взвешиваниями устанавливают массу анализируемой пробы продукта.

9.1.2 В сухой пробирке, свободно входящей в горловину колбы Кьельдаля, взвешивают 0,10-0,15 г сухих продуктов (в том числе молочной сыворотки) с записью результатов до четвертого знака после запятой. Содержимое пробирки осторожно переносят в колбу Кьельдаля. Пустую пробирку вновь взвешивают и по разнице между первым и вторым взвешиваниями определяют массу анализируемой пробы.

9.1.3 В стаканчик для взвешивания или стеклянную бюксу с крышкой взвешивают 1,00-1,50 г жидкого продукта с записью результата до четвертого знака после запятой. Продукт из стаканчика (бюксы) осторожно переливают в колбу Кьельдаля. Пустой стаканчик (бюксу) с крышкой вновь взвешивают и по разнице между первым и вторым взвешиваниями устанавливают массу анализируемой пробы.

9.2 В колбу Кьельдаля также добавляют 1,50-2,00 г смешанного катализатора (см. 7.1.1) и затем осторожно приливают 10 см³ концентрированной серной кислоты и 10 см³ 30 %-ного раствора перекиси водорода. Колбу прикрывают насадкой или стеклянной воронкой и приступают к нагреванию в наклонном положении под углом 45° при температуре 450-500 °С.

В процессе нагревания необходимо следить, чтобы жидкость в колбе непрерывно кипела и на стенках колбы не оставалось черных несгоревших частиц, смывая их легкими круговыми движениями.

При наличии черных частиц на горловине колбы, если они не захватываются конденсатом паров кислоты в период кипения или кислотой при перемешивании содержимого колбы, следует охладить колбу, смыть эти частицы в колбу небольшим количеством дистиллированной воды и затем продолжить сжигание.

После того как жидкость в колбе обесцветится (допускается слегка зеленоватый оттенок), нагрев продолжают еще в течение 30 мин. Дают колбе остыть до температуры (20  5) °С, к содержимому колбы приливают, обмывая стенки колбы, от 20 до 30 см³ дистиллированной воды и приступают к отгонке аммиака.

Если при минерализации содержимое колбы долго остается темным или затвердевает при охлаждении, вероятно, происходит неполное сжигание. В этом случае проводят дополнительное сжигание при той же температуре.

9.3 После подготовки прибора для отгонки аммиака по 7.2 (рисунок А.1 приложения А) под холодильник подставляют вместо пустой конической колбы 1 колбу вместимостью 250 см³ с 25 см³ раствора борной кислоты массовой концентрации 40 г/дм³ (см. 7.1.3) и четырьмя каплями смешанного индикатора (см. 7.1.4) так, чтобы кончик холодильника был погружен в раствор. Вместо пустой колбы Кьельдаля 7 присоединяют колбу с минерализованной пробой.

Наливают в воронку 4 20 см³ раствора гидроокиси натрия массовой концентрации 400 г/дм³ (см. 7.1.5) и, открывая понемногу зажим 13 при осторожном покачивании колбы Кьельдаля, вливают раствор гидроокиси натрия массовой концентрации 400 г/дм³. За