Наставление по применению сыворотки рожистой люминесцирующей сухой (утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 27 января 1997 г. N 13-7-2/836)

1. Общие положения

1.1. Сыворотка рожистая люминесцирующая сухая предназначена для быстрого обнаружения и идентификации возбудителя рожи свиней в чистых, смешанных культурах и патологическом материале.

1.2. Сыворотку расфасовывают по 1 мл в ампулы и упаковывают в картонные коробки по 5-10 штук.

В каждую коробку вкладывают наставление по применению.

1.3. На ампулу наклеивают этикетку на которой указывают: название сыворотки, объем сыворотки в ампуле, рабочее разведение, номер серии, дату изготовления.

На каждую коробку с сывороткой наклеивают этикетку, на которой указывают: наименование и товарный знак предприятия-изготовителя, полное название сыворотки, объем препарата в ампуле, рабочее разведение, дату изготовления (месяц, год), номер серии, номер контроля, срок годности, условия хранения, обозначение ТУ.

1.4. Люминесцирующая рожистая сыворотка - высушенная лиофильным способом глобулиновая фракция иммунной сыворотки, к которой присоединен флуорохром, представляет собой пористую массу желто-оранжевого цвета, легко растворимую в воде.

1.5. Срок годности сыворотки 2 года при условии хранения ее в темном месте при температуре от 4 до 10 гр. С. Сыворотки с истекшим сроком годности можно применять, если они сохранили специфичность и вызывают свечение гомологичных рожистых культур не ниже чем на три креста в разведении 1:16.

1.6. Ампулы с трещинами, без этикеток, разжиженной массой, механическими примесями к применению непригодны.

2. Порядок применения.

2.1. Для работы сухую сыворотку в ампуле растворяют с соблюдением стерильности дистиллированной водой до указанного на этикетке первоначального объема.

Затем содержимое ампулы переносят в стерильную пробирку и хранят при температуре от 2 до 4 гр. С.

2.2. Для получения рабочего разведения растворенную сыворотку дополнительно разводят в нужном объеме физиологического раствора хлорида натрия с фосфатным буфером рН 7,4 до рабочего разведения указанного на этикетке ампул (рабочее разведение готовят в день проведения исследований).

2.3. При исследовании патологического материала (желательно свежего), производят посевы на твердые и жидкие питательные среды, а, затем стерильно вырезают кусочки паренхиматозных органов, из которых готовят суспензию на физиологическом растворе хлорида натрия в соотношении 1:5. После осаждения частиц в суспензии из разных участков ее поверхности готовят мазки.

2.4. Мазки из типичных для рожи колонн и, выращенных в течение 18-24 ч на плотных средах или культур, полученных в жидких питательных средах, делают на тщательно обезжиренных предметных стеклах с расчетом, чтобы в поле зрения микроскопа было около 100 клеток.

Площадь мазка (около 1 кв. см) обозначают восковым карандашом на обратной стороне стекла. На одном стекле делают не более трех мазков из разных культур или органов.

2.5. Мазки фиксируют метиловым спиртом (метанолом) 5 мин или этиловым спиртом (этанолом) 15 мин и высушивают на воздухе. Мазки из головного и костного мозга готовят отдельно и после фиксации спиртом дополнительно обезжиривают ацетоном в течение: 5 мин при 2-3-кратном смене его.

2.6. Перед окрашиванием препараты помещают строго горизонтально на мостике во влажной камере (чашке Петри) для предупреждения высыхания сыворотки.

На каждый мазок наносят 2-3 капли сыворотки в рабочем разведении и распределяют по всей поверхности мазка. Окрашивание препарата флуоресцирующей сывороткой длится 20 мин при комнатной температуре. Для лучшего окрашивания мазков стекла периодически покачивают.

Препараты промывают в течение 20 мин физиологическим раствором рН 7,4 со сменой раствора 4-5 раз.

Отмытые мазки ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе.

2.7. На мазок наносят небольшую каплю смеси, состоящей из Э# частей глицерина и одной части 1/5 М фосфатного буфера рН 8,0, накрывают покровным стеклом. Для иммерсии употребляют нефлуоресцирующее масло или его заменитель, приготовленный из чистого диметилфталата (100 мл) и нафталина сублимированного (1,75 г) или тимола чистого (5 г).

2.8. Мазки просматривают под люминесцентным микроскопом в сине-фиолетовом спектре при увеличении 90х5.

2.9. Окрашенные флюоресцирующей рожистой сывороткой бактерии имеют светящийся периферический контур (ободок). Это характерное свечение контура оценивается визуально в крестах:

++++ - яркая, сверкающая зеленая люминесценция морфологически типичных бактерий с более интенсивной люминесценцией по их периферии (положительная)

+++ - достаточно яркая зеленая люминесценция морфологически типичных бактерий с более интенсивной люминесценцией по их периферии (положительная)

++ - недостаточно яркая желтовато-зеленоватая люминесценция, периферический ободок выявляется с трудом (сомнительная)

+ - люминесценция очень слабая, морфология бактерий различается с трудом (отрицательная)

- - люминесценция отсутствует, видны лишь тени бактерий (отрицательная).

2.10. При обнаружении возбудителя с типичной морфологией, специфическим свечением интенсивностью не ниже, чем на три креста ставят положительный люминесцентно-серологический диагноз.

2.11. При сомнительном или отрицательном результате люминесцентной микроскопии посевного материала проводят исследования культур и их идентификацию общепринятыми методами.

3. При появлении неспецифических реакций или установлении слабой активности сывороток применение их прекращают и в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза Российской Федерации от 8 мая 1992 года N 22-7/28 "О порядке предъявления рекламаций на ветпрепараты отечественного производства и закупаемые по импорту", сообщают об этом предприятию-изготовителю, Всероссийскому государственному научно-исследовательскому институту контроля стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ, 1230022, Москва, Звенигородское шоссе, 5) и Центральной научно-производственной ветеринарной лаборатории (ЦНПВЛ).

Одновременно с этим в адрес института направляют 4 ампулы данной серии.

Заместитель начальника Департамента ветеринарии

В.В. Селиверстов