Методические указания МУК 4.1.1343-03 "Измерение массовых концентраций 1,4-дигидро-6,8-дифтор-7(3-метилпиперазин-1-ил)-4-оксо-1-этилхинолин-3-ка рбоновой кислоты гидрохлорида (ломефлоксацина гидрохлорида) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 мая 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1343-03
"Измерение массовых концентраций 1,4-дигидро-6,8-дифтор-7(3-метилпиперазин-1-ил)-4-оксо-1-этилхинолин-3-карбоновой кислоты гидрохлорида (ломефлоксацина гидрохлорида) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 мая 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают метод количественного хроматографического анализа воздуха рабочей зоны на содержание 1,4-дигидро-6,8-дифтор-7-(3-метилпиперазин-1-ил)-4-оксо-1-этилхинолин-3-к арбоновой кислоты гидрохлорида (ломефлоксацина гидрохлорида) в диапазоне концентраций от 0,05 до 1,00 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула.

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 387,8.

2.4. Регистрационный номер CAS 98079-52-8.

2.5. Физико-химические свойства.

Ломефлоксацина гидрохлорид - кристаллический порошок белого цвета, 323°С. Хорошо растворим в воде, растворим в органических растворителях.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Ломефлоксацина гидрохлорид обладает общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия в воздухе рабочей зоны - 0,1 .

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций ломефлоксацина с погрешностью не более при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерения массовой концентрации ломефлоксацина гидрохлорида основаны на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением спектрофотометрического детектора.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания ломефлоксацина гидрохлорида в хроматографируемом объеме раствора - 0,010 мкг.

Нижний предел измерения концентрации ломефлоксацина гидрохлорида в воздухе - 0,05 (при отборе 200 воздуха).

Определению не мешают вещества, сопутствующие производству (целлюлоза микрокристаллическая, титана диоксид, поливинилпирролидон низкомолекулярный, магний стеариновокислый, оксипропил-целлюлоза).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы, растворы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный микроколоночный "Милихром" или другой подобного типа со спектрофотометрическим детектором Хроматографическая колонка стальная КАХ-44-3, 50 х 2 мм, заполненная сорбентом Сепарон С18, фракция 5 мкм
Аспирационное устройство модель 822	ТУ 64-1-862-82
Фильтродержатель	ТУ 95.72.05-77
Весы аналитические	ГОСТ 24104-88Е
Устройство для фильтрации жидкостей, НПФ "Биохром"
Посуда мерная лабораторная	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки вместимостью от 0,2 до 10	ГОСТ 29227-91
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80
Фильтры HVLP фирмы "Миллипор" Бюксы 50/30	ГОСТ 25336-82Е

5.2. Реактивы, растворы

Ломефлоксацина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 99%, N регистрации 002583 от 30.07.1992
Ацетонитрил для жидкостной хроматографии	ТУ-6-09-14-2167-84
Калий дигидрофосфат, хч, 0,02 М раствор	ГОСТ 4198-75
Ортофосфорная кислота, хч	ГОСТ 6552-58
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данной МВИ.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха , атмосферном давлении 84-106 кПа и влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор N 1 ломефлоксацина гидрохлорида в растворе элюента концентрацией 400 готовится растворением 20 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 . Стандартный раствор N 2 ломефлоксацина гидрохлорида в растворе элюента концентрацией 40 готовится разбавлением стандартного раствора N 1. Растворы устойчивы в течение месяца при хранении в холодильнике.

9.1.2. Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 50 0,02 М раствора дигидрофосфата калия, который готовят растворением 1,36 г указанной соли в 500 дистиллированной воды, и 50 ацетонитрила. Раствор доводят до рН 6 ортофосфорной кислотой. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров "Миллипор" и дегазируют под вакуумом.

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость величины хроматографического сигнала от массы анализируемого вещества в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием серии градуировочных растворов, которые готовят разбавлением стандартного раствора N 2 согласно табл. 1. Растворы устойчивы в течение двух недель при хранении в холодильнике.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: 0,02 М - ацетонитрил, 1:1, рН 6;

скорость потока элюента: 100 ;

объем вводимой пробы: 5 ;

длина волны спектрофотометрического детектора: 286 нм;

время удерживания ломефлоксацина гидрохлорида: 3 мин.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе шести растворов разных концентраций и холостой пробы, проводя не менее пяти параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика от количества компонента в пробе (мкг).

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении ломефлоксацина гидрохлорида

N стандарта	Стандартный раствор ломефлоксацина N 2,	Раствор элюента,	Концентрация вещества,	Содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, мкг
1	0	20,0	0	0
2	1,0	19,0	2	0,01
3	2,0	18,0	4	0,02
4	3,5	16,5	7	0,035
5	5,0	15,0	10	0,05
6	10	10,0	20	0,1
7	20	0	40	0,2

Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

9.4. Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 20 аспирируют через фильтр АФА ВП-10. Для измерения 1/2 ОБУВ ломефлоксацина гидрохлорида достаточно отобрать 200 воздуха. Пробы можно хранить в течение трех суток.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и приливают пипеткой 5 раствора элюента. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 5 мин и сливают его в пробирку. Степень экстракции с фильтра - 92%. Хроматографирование раствора пробы проводят в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого вещества в растворе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Расчет концентрации

Концентрацию ломефлоксацина гидрохлорида (С, ) в воздухе вычисляют по формуле:

, где

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятый для хроматографирования, ;

в - общий объем раствора пробы, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, (см. прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде , Р = 0,95, где - характеристика погрешности, .

13. Контроль погрешности методики

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С.

Таблица 2

Результаты метрологической аттестации методики количественного химического анализа

Диапазон определяемых концентраций ломефлоксацина гидрохлорида,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности, , (Р = 0,95)	норматив оперативного контроля точности, К, Р = 0,90, m = 2)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, (Р = 0,95, m = 2)
От 0,05 до 1,00	0,18С + 0,001	0,17С + 0,001	0,12С + 0,002

13.1. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Анализируют в соответствии с прописью методики разными аналитиками, максимально варьируя условия проведения анализа: партии реактивов, наборы мерной посуды и т.д., и получают два результата и анализов. Результаты анализа не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже, чем 1 раз в неделю.

13.2. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха рабочей зоны из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе, отобранной на фильтр, делают добавку анализируемого компонента из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа без добавки и с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, одним набором посуды и т.д. Величина добавки должна соответствовать 50-150% от содержания компонента в пробе, а величина не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб при последовательном отборе проб воздуха требуется 4 ч.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко