Методические указания МУК 4.1.1369-03 "Измерение массовых концентраций 1-[(2-хлорфенил) дифенилметил]-1H-имидазола (клотримазола) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 мая 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1369-03
"Измерение массовых концентраций 1-[(2-хлорфенил) дифенилметил]-1H-имидазола (клотримазола) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 мая 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание клотримазола методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне концентраций 0,25-25,0 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 344,84.

2.4. Регистрационный номер CAS 23593-75-1.

2.5. Физико-химические свойства.

Клотримазол - белый или слегка желтоватый кристаллический порошок, не растворим в воде, растворим в дихлорметане, этаноле (при Т = 40°С), от 141 до 145°С.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6. Токсикологическая характеристика.

Обладает общетоксическим действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) клотримазола в воздухе рабочей зоны 0,5 .

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации клотримазола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием при длине волны 220 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания клотримазола в анализируемом объеме 0,01 мкг.

Нижний предел измерения концентрации клотримазола в воздухе 0,25 (при отборе 80  воздуха).

Метод специфичен в условиях производства клотримазола на стадии фасовки и сушки. При производстве клотримазола на стадии фасовки и сушки присутствие каких-либо веществ в воздухе производственных помещений исключено.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостной фирмы "Woters", США, модель 996 с градиентной системой элюирования, автосэмплером и УФ-детектором типа "диодная матрица"
Колонка из нержавеющей стали длиной 150 мм и внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасорб 130C10CN (размер частиц 7 мкм)
Аспирационное устройство, марка 822	ТУ 2-6-01-86
Фильтродержатель	ТУ 95-72-05-77
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80
Весы аналитические лабораторные ВЛА-200	ГОСТ 24104-88Е
Колбы мерные, вместимостью 25	ГОСТ 1770-74Е
Пипетки, вместимостью 1, 2,5 и 10	ГОСТ 29227-91
Стаканы химические, вместимостью 25	ГОСТ 23932-79
Пробирки с притертыми пробками, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е
Бюксы стеклянные, вместимостью 50	ГОСТ 25336-82Е

5.2. Реактивы, растворы

Клотримазол с содержанием основного вещества не менее 98%	ФС 42-8239-98
Ацетонитрил, хч для жидкостной хроматографии	ТУ 6-09-14-2167-84
Метанол, хч	ГОСТ 6995-77
Состав элюента:
А : ацетонитрил
В : метанол
А : В = 1 : 1

Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данной МВИ.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими, и легко воспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим и среднеспециальным образованием, прошедших обучение работе с жидкостным хроматографом.

8. Условия измерений

8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха , атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор клотримазола в этаноле с концентрацией 1 готовят растворением 25 мг клотримазола в мерной колбе вместимостью 25 в небольшом количестве этанола (5-10 ), подогретого до 35-40°С. Затем раствор доводят до метки этанолом.

Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение недели.

9.1.2. Стандартный раствор N 1 с концентрацией клотримазола 200 готовят разведением 5  основного стандартного раствора этанолом в мерной колбе вместимостью 25 .

Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.3. Градуировочные растворы с концентрацией клотримазола от 2 до 200,0 готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 этанолом, согласно табл. 1.

Растворы устойчивы при хранении в холодильнике в течение недели.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку к работе хроматографа производят в соответствии с инструкцией по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Количественный анализ проводят методом абсолютной градуировки. Для этого вводят в хроматограф по 5  каждого градуировочного раствора.

Градуировочный график строят в координатах: количество введенного клотримазола (мкг) - площадь пика (приборные единицы); градуировку выполняют не менее чем по 6 точкам, проводят 5 параллельных измерений для каждой концентрации.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении клотримазола

N стандарта	Стандартный раствор N 1,	Этанол,	Концентрация градуировочного раствора,	Содержание клотримазола в хроматографируемом объеме, мкг
1	0,25	24,75	2,0	0,01
2	1,25	23,75	10,0	0,05
3	2,5	22,5	20,0	0,1
4	5,0	20,0	40,0	0,2
5	10,0	15,0	80,0	0,4
6	25,0	0	200,0	1,0

Условия проведения анализа градуировочных растворов и анализируемых проб:

температура термостата колонки	20°С;
скорость подачи элюента	1,0 ;
длина волны ДАД	220 нм;
объем вводимой пробы	5 ;
время удерживания клотримазола	6 мин 30 с.

Проверку градуировочного графика проводят не реже 1 раза в месяц и при изменении условий анализа.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 10 аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ клотримазола необходимо отобрать 80 воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение месяца в пробирках с притертыми пробками в холодильнике.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и дважды экстрагируют по 5 этанола, подогретого до 35-40°С. Степень десорбции с фильтра 97%. Экстракты объединяют. Хроматографический анализ выполняют в тех же условиях, что и градуировку.

Количественное содержание клотримазола в хроматографируемом объеме (мкг) определяют по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Вычисление результатов измерений

Массовую концентрацию клотримазола в воздухе С  вычисляют по формуле:

, где

а - содержание клотримазола в хроматографируемом объеме, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - хроматографируемый объем пробы, ;

В - общий объем раствора пробы, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа клотримазола представляют в виде:

, , P = 0,95, где

- характеристика погрешности;

С - значение массовой концентрации анализируемого компонента в пробе.

13. Контроль погрешности методики КХА

Таблица 2

Значение погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости

Диапазон определяемых массовых концентраций клотримазола,	Наименование метрологической характеристики
	границы относительной погрешности , %, Р = 0,95	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, %, (Р = 0,95, m = 2)	норматив оперативного контроля погрешности, К, %, (Р = 0,90, m = 3)
0,25-5,0	12,74	15,1	15,3

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе (С).

13.1. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину, превышающую допускаемые расхождения между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы в условиях межлабораторной воспроизводимости;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы, табл. 2.

С - значение массовой концентрации анализируемого компонента в пробе.

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

13.2. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы (общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы , рабочей пробы, разбавленной в два раза и рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

Х - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности, табл. 2.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 1 ч 30 мин.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко