Методические указания МУК 4.1.1357-03 "Измерение массовых концентраций О,О-диметил-S-[(2-оксо-6-хлоросазол (4,5-В)пиридин-3(2Н)-ил)метил] тиофосфата (азаметиофоса) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 мая 2003 г.)

Методические указания МУК 4.1.1357-03
"Измерение массовых концентраций О,О-диметил-S-[(2-оксо-6-хлоросазол (4,5-В)пиридин-3(2Н)-ил)метил] тиофосфата (азаметиофоса) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 16 мая 2003 г.)

Дата введения: с момента утверждения

1. Область применения

Настоящие методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание азаметиофоса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне концентраций 0,5-5,0 .

2. Характеристика вещества

2.1. Структурная формула

2.2. Эмпирическая формула .

2.3. Молекулярная масса 324,68.

2.4. Регистрационный номер CAS 35575-96-3.

2.5. Физико-химические свойства.

Азаметиофос - белое кристаллическое вещество, d = 1,6 при 20°С, растворимость в воде 0,11%, , легко растворим в бензоле, метаноле, этаноле.

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.6 Токсикологическая характеристика.

Азаметиофос обладает антихолистеразным действием.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) азаметиофоса в воздухе рабочей зоны 1,0 .

3. Погрешности измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений азаметиофоса с погрешностью, не превышающей при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерение массовой концентрации азаметиофоса выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием при длине волны 290 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания азаметиофоса в анализируемом объеме пробы - 0,01 мкг.

Нижний предел измерения концентрации азаметиофоса в воздухе 0,5 (при отборе 20 воздуха).

Метод специфичен в условиях приготовления различных препаративных форм. Измерению не мешают сопутствующие вещества: тальк, глина, сахар, кизельгур.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Хроматограф жидкостный, фирмы "Waters" США, модель 996 с градентной системой элюирования, автосэмплером и УФ-детектором типа "диодная матрица"
Колонка аналитическая, хроматографическая из нержавеющей стали длиной 250 мм и внутренним диаметром 2 мм, заполненная Separon С-18 (размер частиц 5 мкм)
Аспирационное устройство, модель 822	ГОСТ 2.6.01-86
Фильтродержатель	ТУ 95-72-05-77
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95-743-80
Весы аналитические ВЛР-200	ГОСТ 24104-88Е
Колбы мерные, вместимостью 25	ГОСТ 1770-74Е
Стаканы химические, вместимостью 25	ГОСТ 25336-82Е
Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10	ГОСТ 29227-91
Пробирки колориметрические, вместимостью 10	ГОСТ 25336-82Е

5.2. Реактивы

Азаметиофос - фирма "Сиба-Гейги", Швейцария с содержанием основного вещества не менее 98%, сертификационный N СУА 18809
Ацетонитрил, хч для жидкостной хроматографии	ТУ 6-09-14-2167-84
Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72

Допускается использование других средств измерения, вспомогательного оборудования, материалов и реактивов с техническими и метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже утвержденных в разделе.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.004-76.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.005-88.

6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим и средним специальным образованием, прошедшие обучение работе на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят при температуре воздуха , атмосферном давлении 84,0-106,6 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.

8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Основной стандартный раствор азаметиофоса в этаноле с концентрацией 1 готовят растворением 25 мг азаметиофоса в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор N 1 с концентрацией 100 готовят разведением 2,5 основного стандартного раствора этанолом в мерной колбе вместимостью 25 . Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение недели.

9.1.3. Градуировочные растворы с концентрацией азаметиофоса от 1 до 10 готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 этанолом. Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

9.1.4. Состав элюента: А-ацетонитрил: В-дистиллированная вода. А : В = 35 : 65.

9.2. Подготовка прибора

Подготовку жидкостного хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Количественный анализ азаметиолфоса проводят методом абсолютной градуировки. Для этого вводят в хроматограф по 10 каждого градуировочного раствора.

Градуировочный график строят в координатах: количество введенного азаметиофоса (мкг) - площадь пиков (условные единицы). Градуировку выполняют не менее чем по 6 точкам, проводя 5 параллельных измерений для каждой концентрации согласно табл. 1.

Таблица 1

Растворы для установления градуировочной характеристики при определении азаметиофоса

N стандарта	Стандартный раствор азаметиофоса N 1,	Этанол,	Концентрация азаметиофоса в градуировочном растворе,	Содержание азаметиофоса в хроматографируемом объеме, мкг
1	0,25	24,75	1,0	0,01
2	0,5	24,5	2,0	0,02
3	0,75	24,25	3,0	0,03
4	1,25	23,75	5,0	0,05
5	2,0	23,0	8,0	0,08
6	2,5	22,5	10,0	0,1

Условия проведения анализа:
температура термостата колонки 20°С;
элюент: ацетонитрил: дистиллированная вода = 35 : 65;
скорость подачи элюента	0,5 ;
длина волны УФ-детектора	290 нм;
объем вводимой пробы	10 ;
время удерживания азаметиофоса	5 мин 42 с.

Проверку градуировочного графика проводят не реже 1 раза в месяц при изменении условий анализа.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 2 аспирируют через фильтр АФА-ВП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения 1/2 ОБУВ азаметиофоса необходимо отобрать 20 воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение месяца в пробирках с притертыми пробками.

10. Выполнение измерения

Фильтр с отобранной пробой помещают в химический стакан вместимостью 25 и дважды экстрагируют этанолом по 5 . Экстракты объединяют. Степень десорбции азаметиофоса с фильтра 98%. Хроматографический анализ проб выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.

Количественное содержание азаметиофоса в хроматографируемом объеме (мкг) определяют по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Вычисление результатов измерения

Концентрацию азаметиофоса в воздухе (С, ) вычисляют по формуле:

, где

а - содержание азаметиофоса в хроматографируемом объеме, найденное по градуировочному графику, мкг;

в - общий объем раствора пробы, ;

б - объем раствора пробы, взятой для анализа, ;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям (прилож. 1).

12. Оформлении результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде:

, Р = 0,95, значение , где:

- характеристика погрешности.

С - значение массовой концентрации анализируемого компонента в пробе.

13. Контроль погрешности методики КХА

Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 2.

Таблица 2

Диапазон определяемых концентраций азаметиофоса,	Наименование метрологической характеристики
	характеристика погрешности , , р = 0,95	норматив оперативного контроля погрешности, К, (р = 0,90, m = 3)	норматив оперативного контроля воспроизводимости, D, (р = 0,95, m = 2)
0,5-5,0	0,005 + 0,13С	0,002 + 0,17С	0,02 + 0,34С

Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе (С).

13.1. Оперативный контроль погрешности

Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике.

После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы .

Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента (X) до массовой концентрации исходной рабочей пробы (общая концентрация не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы , рабочей пробы, разбавленной в два раза и рабочей пробы, разбавленной в два раза с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.

Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;

- результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;

X - величина добавки анализируемого компонента;

К - норматив оперативного контроля погрешности.

К = 0,002 + 0,17С

13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:

, где

- результат анализа рабочей пробы;

- результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной поcyды, других партий реактивов;

D - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы.

D = 0,02 + 0,34С

При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива D, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля и устраняют их.

14. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 1 ч 30 мин.

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Первый заместитель Министра здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко