Методические указания по измерению концентраций пирипроксифена в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.1951-05 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2005 г.)

Дата введения: 18 апреля 2005 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации пирипроксифена в диапазоне 0,1-1 .

Пирипроксифен - действующее вещество препарата АДМИРАЛ, 10% КЭ, фирма-производитель Кромптон, Англия.

4-феноксифенил (RS)-2-(2-пиридилокси)пропиловый эфир (IUPAC)

Мол. масса 321,5

Бесцветное кристаллическое вещество (технический продукт - бледно-желтое воскообразное вещество со слабым запахом). Температура плавления 47°С. Давление паров при 23°С - менее 0,013 мПа. Растворимость в органических растворителях при 20-25°С (г/кг): гексан - 400; метанол - 200; ксилол - 500; метанол - 140. Растворимость в воде при 25°С - 0,3679 . Коэффициент распределения н-октанол/вода: logP = 5,37 (25°С).

Пирипроксифен устойчив к гидролизу: - более 367 дней (20°С, рН 4-9).

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль,

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность для крыс >5000 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс > 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс > 1300 . Не раздражает кожу и слизистую глаз (кроликов).

Область применения препарата

Пирипроксифен - инсектицид контактного и кишечного действия из группы аналогов ювенильного гормона, подавляющий эмбриогенез и процесс метаморфоза насекомых. Активно подавляет развитие мух, жуков, комаров и других насекомых.

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) пирипроксифена в воздухе рабочей зоны - 1,0 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (б), не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций пирипроксифена выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование пирипроксифена из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят этанолом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 4 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США)	Номер Госреестра 15945-97
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Колбы мерные вместимостью 100 и 1000	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 250 и 1000	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Пирипроксифен с содержанием действующего вещества не менее 99,9% (Кромптон, Англия)
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над KMnO4
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ 6-09-4326-76
Спирт этиловый ректификованный	ГОСТ Р 51652 или ГОСТ 18300

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30-37 мм	ГОСТ 25336
Груша резиновая
Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 100	ГОСТ 10394
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические, вместимостью 100	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С 18, зернением 7 мкм
Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Подготовка подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 150 воды, добавляют 850 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3. Подготовка подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 250 воды, добавляют 750 ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

ГАРАНТ:

Здесь и далее по тексту нумерация приводится в соответствии с источником

7.3. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой N 1 (приготовленной по п. 7.2.) при скорости подачи растворителя 1 или подвижной фазой N 2 (приготовленной по п. 7,3.) при скорости подачи растворителя 0,3 до установления стабильной базовой линии.

7.4. Приготовление градуировонных растворов

7.4.1 Исходный раствор пирипроксифена для градуировки (концентрация 100 )

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 0,01 г пирипроксифена, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.

Растворы N 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

7 4.2. Раствор N 1 пирипроксифена для градуировки (концентрация 10 )

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 10 исходного раствора пирипрксифена с концентрацией 100 (п. 7.4,1.), разбавляют подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3) до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х суток.

7.4.3. Рабочие растворы N 2-5 пирипроксифена для градуировки (концентрация 0.2-2.0 )

В 3 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 2.0, 5.0 и 10.0 градуировочного раствора N 1 с концентрацией 10 (п. 7.4.2.), доводят до метки подвижной фазой (п. 7.2. или 7.3.), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-4 с концентрацией пирипроксифена 0.2, 0.5 и 1.0 , соответственно. Для приготовления рабочего градуировочного раствора N 5 с концентрацией пирипроксифена 2.0 используют 10 градуировочного раствора N 1, разбавление проводят в мерной колбе вместимостью 50 .

Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

7.5. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 минут с объемным расходом 2-5 через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации пирипроксифена на уровне 0,5 ОБУВ для воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 2 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4°С - 5 дней.

7.6. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации пирипроксифена в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки NN 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.6.1.1 или 7.6.1.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика пирипроксифена.

7.6.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Рабочая длина волны: 272 нм

Температура колонки: комнатная

Объем вводимой пробы: 20

7.6.1.1. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 7 мкм.

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (85:15, по объему)

Скорость потока элюента: 1

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода пирипроксифена: 6,0-6,33 мин

7.6.1.2. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм

Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (75:25, по объему)

Скорость потока элюента: 0,3

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода пирипроксифена: 6,8-7,0 мин

Линейный диапазон детектирования: 4-40 нг

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор пирипроксифена с концентрацией 2,0 , разбавляют подвижной фазой (п. 7.2 или 7.3).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если значения площади отличаются более, чем на 5% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 , заливают 10 этанола, оставляют на 4-5 минут, периодически перемешивая. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями этанола объемом 10 .

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 5 подвижной фазы NN 1 или 2 и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.6.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию пирипроксифена в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию пирипроксифена в пробе воздуха рабочей зоны (X, ) рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация пирипроксифена в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20°С) условиям, .

,

где Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. С,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.

u - расход воздуха при отборе пробы, ,

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации пирипроксифена в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости (d): .

, ,

где d - норматив оперативного контроля сходимости, ;

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа , характеристика погрешности , %, Р = 0,95 или , Р = 0,95, где

,

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6. 2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.);#

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г.Г. Онищенко