Методические указания по измерению концентраций десмедифама в воздухе рабочей зоны, десмедифама, фенмедифама и этофумезата при совместном присутствии в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии МУК 4.1.1944-05 (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 18 января 2005 г.)

Дата введения: 18 апреля 2005 г.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в атмосферном воздухе массовых концентраций десмедифама, фенмедифама и этофумезата в диапазонах 0,008-0,08 ; 0,0008-0,008 и 0,004-0,04 , соответственно, а также десмедифама в воздухе рабочей зоны в диапазоне 0,1-1,0 .

Десмедифам, фенмедифам и этофумезат - действующие вещества препаратов СИНБЕТАН ЭКСПЕРТ ОФ, КЭ (112 г/л этофумезата + 91 г/л фенмедифама + 71 г/л десмедифама), фирм ООО НПП "АГРУСХИМ", "РосАгроХим" (Россия) и АЛС - 4/04 (110 г/л этофумезата + 90 г/л фенмедифама + 70 г/л десмедифама) фирмы ООО "Алсико-Агропром" (Россия).

Десмедифам

Этил 3-фенилкарбамоилоксифенилкарбамат (IUРАС)

Мол. масса 300,3

Бесцветное кристаллическое вещество со слабым ароматическим запахом. Температура плавления 120°С. Давление паров при 25°С: мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С : изопропанол, ацетон - 400, метанол - 180; этилацетат - 149; хлороформ - 80; толуол - 1,2; гексан - 0,5. Растворимость в воде при 25°С - 7 .

Десмедифам стабилен в водной кислой среде, гидролизуется в нейтральной и щелочной средах: - 70 дней (рН 5); 20 часов (рН 7); 10 мин (рН 9).

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность для крыс > 10250 мг/кг, для мышей > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность для кроликов > 4000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс > 7400 .

Предельно допустимая концентрация десмедифама в воздухе рабочей зоны - 1 , ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) в атмосферном воздухе - 0,01 .

Фенмедифам

Метил 3-(3-метилфенилкарбамоилокси)фенилкарбамат (IUРАС)

Мол. масса 300,3

Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления 143-144°С. Давление паров при 25°С: мПа. Растворимость в органических растворителях при 20°С : ацетон, циклогексанон - 200; метанол - 50; хлороформ - 20; бензол - 2,5; дихлорметан - 16,7; этилацетат - 56,7; толуол - 0,97; гексан - 0,5. Растворимость в воде при 25°С - 4,7 .

Фенмедифам стабилен в водной кислой среде, гидролизуется в нейтральной и щелочной средах: - 50 дней (рН 5); 14,5 часов (рН 7); 10 мин (рН 9).

Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность для мышей и крыс > 8000 мг/кг, для морских свинок > 4000 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс > 2500 мг/кг, для кроликов > 1000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс > 7000 .

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) фенмедифама в атмосферном воздухе - 0,001 .

Этофумезат

(IUPAC)

Мол. масса 286,3

Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления 70-72°С. Давление паров при 25°С: 0,12-0,65 мПа. Растворимость в органических растворителях при 25°С : дихлорметан, ацетон, этилацетат - более 600; толуол - 300-600; метанол - 120-150; этанол - 60-75; гексан - 4,7. Растворимость в воде при 25°С - 50 .

Этофумезат стабилен в водной среде при рН 7-9. При кислой среде разлагается; (рН 5,0) - 940 дней, с образованием гидроксианалога

Агрегатное состояние в воздухе - пары и аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность для кроликов > 2000 мг/кг, острая ингаляционная токсичность для крыс > 3970 .

Ориентировочный безопасный уровень воздействия (ОБУВ) этофумезата в атмосферном воздухе - 0,02 .

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью , не превышающей , при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций десмедифама, фенмедифама и этофумезата выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование десмедифама, фенмедифама и этофумезата при определении их в одной пробе атмосферного воздуха осуществляют на последовательно соединенные фильтры "синяя лента" и фильтры из пенополиуретана. С целью контроля в воздушной среде фенмедифама и десмедифама отбор проб проводится на бумажные фильтры "синяя лента". Для экстракции веществ с фильтров используют ацетон.

Нижний предел измерения каждого действующего вещества в анализируемом объеме пробы - 1 нг.

Определению не мешают компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором с переменной длиной волны (фирмы Perkin-Еlmer, США)	Номер Госреестра 15945-97
Весы аналитические ВЛА-200	ГОСТ 24104
Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ (ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) или аспирационное устройство ЭА-1	ТУ 25-11-1414-78
Барометр-анероид М-67	ТУ 2504-1797-75
Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена деления 1°С, пределы измерения 0-55°С	ТУ 215-73Е
Колбы мерные вместимостью 100 и 1000	ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные вместимостью 5 или 10	ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 50 и 500	ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Десмедифам с содержанием действующего вещества не менее 99,5%, ВНИИХСЗР
Фенмедифам с содержанием действующего вещества не менее 99,0%, ВНИИХСЗР
Этофумезат с содержанием действующего вещества не менее 99,6%, ВНИИХСЗР
Метиловый спирт (метанол), хч	ГОСТ 6995
Вода бидистиллированная, деионизованная или перегнанная над	ГОСТ 6709
Кислота орто-фосфорная, ч., 85%	ГОСТ 6652
Ацетон	ГОСТ 2603
Ацетонитрил для хроматографии, хч	ТУ 6-09-4326-76
Изопропиловый спирт	ТУ 6-09-402-87

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные	ТУ 6-09-2678-77
Воронки конусные диаметром 30-37 и 60 мм	ГОСТ 25336
Воронка Бюхнера
Груша резиновая
Колба Бунзена
Колбы грушевидные на шлифе вместимостью 100	ГОСТ 10394
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 250	ГОСТ 9737
Мембранные фильтры капроновые, диаметром 47 мм
Насос водоструйный	ГОСТ 10696
Пенополиуретан ППУ	ТУ 2254-153-046911277-95
Пробирки центрифужные	ГОСТ 25336
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария	ТУ 25-11-917-74
Стаканы химические, вместимостью 100	ГОСТ 25336
Стекловата
Стеклянные палочки
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Холодильник водяной, обратный	ГОСТ 9737
Хроматографическая колонка стальная, длиной 20 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50-100

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1005.

4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетона и ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижных фаз для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик, отбор проб.

7.1. Очистка растворителей

7.1.1. Очистка ацетона

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1  ацетона 10 г и 2 г ).

7.1.2. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Подготовка подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ (анализ десмедифама и фенмедифама)

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 470 воды, 1 ортофосфорной кислоты, 50 изопропилового спирта, добавляют 480 метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.3. Подготовка подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ (анализ этофумезата)

В мерную колбу вместимостью 1000 помещают 600 ацетонитрила, добавляют 600 бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.4. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой N 1 (п. 7.2) при скорости подачи растворителя 0,3 или подвижной фазой N 2 (п. 7.3) при скорости подачи растворителя 0,4 до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1. Исходные растворы для градуировки (концентрация 1 )

В мерные колбы вместимостью 100 раздельно помещают 0,1 г десмедифама (фенмедифама и этофумезата), доводят до метки метанолом (для десмедифама и фенмедифама) или ацетонитрилом (для этофумезата), тщательно перемешивают. Растворы хранятся в холодильнике в течение 3-х месяцев.

Растворы N 1-5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного стандартного раствора.

7.5.2. Растворы N 1 для градуировки (концентрация 10 )

В мерную колбу вместимостью 100 помещают 1 исходного стандартного раствора с концентрацией 1 (п. 7.5.1), разбавляют до метки метанолом (для десмедифама и фенмедифама) или ацетонитрилом (для этофумезата). Растворы хранятся в холодильнике в течение месяца.

7.5.3. Рабочие растворы N 2-5 для градуировки (концентрация 0,05-0,5 )

В 4 мерные колбы вместимостью 100 помещают по 0,5, 1,0, 2,5 и 5,0 стандартного раствора N 1 с концентрацией 10 (п. 7.5.2), доводят до метки подвижной фазой, подготовленной по п. 7.2 (для десмедифама и фенмедифама) или 7.3 (для этофумезата), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы NN 2-5 с концентрацией 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 , соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике не более 3-х суток.

7.6. Приготовление фильтров из пенополиуретана для отбора проб воздуха

Из пенополиуретана вырезают фильтр толщиной 2-2,5 мм, диаметром 48-50 мм, соответствующим внутреннему диаметру фильтродержателя. Фильтр 3 раза промывают ацетоном порциями 25-30 на воронке Бюхнера, сушат с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, затем на воздухе при комнатной температуре.

7.7. Отбор проб

7.7.1. Атмосферный воздух

Отбор проб атмосферного воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "ОПА. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ в воздухе населенных мест". Воздух со скоростью 2-5 аспирируют через последовательно соединенные бумажный фильтр "синяя лента" и фильтр из пенополиуретана, помещенные в фильтродержатель. С целью контроля десмедифама и фенмедифама отбор проб осуществляют на бумажный фильтр "синяя лента".

Для измерения концентрации десмедифама на уровне 0,8 ОБУВ атмосферного воздуха необходимо отобрать 12,5 воздуха, фенмедифама - 125 воздуха, этофумезата - 6,25 воздуха.

Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4°С - 7 дней.

7.7.2. Воздух рабочей зоны

Отбор проб воздуха рабочей зоны проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".

В течение 15 минут последовательно отбирают 3 пробы, для чего воздух аспирируют в течение 5 минут с объемным расходом 1-5 через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации десмедифама на уровне 0,5 ПДК воздуха рабочей зоны необходимо отобрать 1 воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при +4°С - 7 дней.

7.8. Установление градуировочных характеристик

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации десмедифама, фенмедифама и этофумезата в растворе , устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки NN 2-5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.8.1.1 (для десмедифама и фенмедифама) или по п. 7.8.1.2 (для этофумезата). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площади пиков действующих веществ.

Градуировочные графики проверяют ежедневно по анализу 2-х стандартных растворов различной концентрации. Если значения площадей отличаются более, чем на 5% от данных, заложенных в градуировочные характеристики, их строят заново, используя свежеприготовленные рабочие стандартные растворы.

7.8.1. Условия хроматографирования

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная

Объем вводимой пробы 20

7.8.1.1. Определение десмедифама и фенмедифама

Подвижная фаза N 1: метанол - изопропиловый спирт - вода - орто-фосфорная кислота (48:5:47:0,1, по объему)

Скорость потока элюента: 0,3

Рабочая длина волны: 240 нм

Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода десмедифама: 11,4-11,7 мин

фенмедифама: 12,8-13,1 мин

Линейный диапазон детектирования: 1-10 нг

7.8.1.2. Определение этофумезата

Подвижная фаза N 2: ацетонитрил - вода (60:40, по объему)

Скорость потока элюента: 0,4

Рабочая длина волны: 230 нм

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу

Ориентировочное время выхода этофумезата: 4,7-4,9 мин

Линейный диапазон детектирования: 1-10 нг

Образцы, дающие пики большие, чем стандартные растворы с концентрацией , разбавляют подвижной фазой, подготовленной по п. 7.3.

8. Выполнение измерений

Фильтры с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 , заливают 10 ацетона, помещают на встряхиватель на 10 минут. Растворитель сливают, фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 .

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35°С почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха. Остаток растворяют в 2 подвижной фазы N 2 (подготовленной по п. 7.3) и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.8.1.1 (определение десмедифама и фенмедифама) или п. 7.8.1.2 (определение этофумезата). При определении десмедифама в воздухе рабочей зоны сухой остаток в колбе растворяют в 10 подвижной фазы N 2 и анализируют по п. 7.8.1.2

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площади пиков, с помощью градуировочных графиков определения концентрации десмедифама, фенмедифама и этофумезата в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированных фильтров.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию десмедифама (фенмедифама и этофумезата) в пробе воздуха (X, ) рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация действующего вещества в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади хроматографического пика, ;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

- объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к нормальным условиям (давление 760 мм рт.ст., температура 0°С), при анализе атмосферного воздуха, или стандартным условиям (давление 760 мм рт.ст., температура 20°С), при анализе воздуха рабочей зоны, .

,

,

где Т - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град. C,

Р - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.,

u - расход воздуха при отборе пробы, ,

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации веществ в пробах могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа принимается среднее арифметическое результатов двух параллельных определений и , расхождение между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля сходимости .

, ,

где d - норматив оперативного контроля сходимости, ,

- норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 10%).

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа , характеристика погрешности , %, Р = 0,95 или , Р = 0,95, где

,

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.).

Главный государственный санитарный врач Российской Федерации, Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Г.Г. Онищенко