Межгосударственный стандарт ГОСТ EN 1528-4-2014 "Пищевая продукция с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 4. Определение, методы подтверждения, прочие положения" (введен в действие приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 августа 2021 г. N 774-ст)

Fatty food. Determination of pesticides and polychlorinated biphenyls (PCBs). Part 4. Determination, confirmatory tests, miscellaneous

УДК 664.017:543.61(083.74)(476):006.354
МКС 67.040
IDT

Дата введения - 1 января 2022 г.
Введен впервые

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 Подготовлен Республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт метрологии" (БелГИМ) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 Внесен Государственным комитетом по стандартизации Республики Беларусь

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации по результатам голосования в АИС МГС (протокол от 22 декабря 2014 г. N 73-П)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97	Сокращенное наименование национального органа по стандартизации
Армения	AM	ЗАО "Национальный орган по стандартизации и метрологии" Республики Армения
Беларусь	BY	Госстандарт Республики Беларусь
Казахстан	KZ	Госстандарт Республики Казахстан
Киргизия	KG	Кыргызстандарт
Молдова	MD	Институт стандартизации Молдовы
Россия	RU	Росстандарт
Таджикистан	TJ	Таджикстандарт
Узбекистан	UZ	Узстандарт

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 августа 2021 г. N 774-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 1528-4-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2022 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 1528-4:1996 "Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 4. Определение, методы подтверждения, прочие положения" ("Fatty food - Determination of pesticides and polychlorinated biphenyls (PCBs) - Part 4: Determination, confirmatory tests, miscellaneous", IDT).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных европейских стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 Введен впервые

7 Некоторые элементы настоящего стандарта могут являться объектами патентных прав

Введение

Европейский стандарт EN 1528 состоит из следующих частей под общим заголовком "Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ)":

- часть 1. Общие положения (определяет область применения стандарта, а также содержит общие указания, касающиеся реактивов, оборудования, газовой хроматографии и т.д., применяющихся для каждого из выбранных аналитических методов);

- часть 2. Экстракция жира, пестицидов и ПХБ и определение содержания жира (устанавливает ряд аналитических методов, с помощью которых проводят экстракцию жира, включая остатки пестицидов и ПХБ из различных групп пищевой продукции, содержащих жиры);

- часть 3. Методы очистки (содержит подробные описания методов A-H для очистки от жиров и растительных масел или изолированной жировой фракции с применением методов жидкость-жидкостной переэкстракции, адсорбционной или гельпроникающей колоночной хроматографии);

- часть 4. Определение, методы подтверждения, прочие положения (содержит руководство по некоторым рекомендуемым методам определения пестицидов и ПХБ в пищевой продукции с большим содержанием жира, а также описание процедуры очистки для удаления основной части липидов при анализе большого количества жира).

Настоящий стандарт содержит ряд методов определения множественных остатков одинакового значения. Ни один из этих методов нельзя рассматривать как преимущественный, так как методы исследования в данной области постоянно совершенствуются. Методы, выбранные для включения в настоящий стандарт, были проверены и имеют широкое применение. Необходимо доказать, что любые изменения в методах дадут сопоставимые результаты.

1 Область применения

Настоящий стандарт содержит руководство по некоторым рекомендуемым методам определения пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ), методам подтверждения и описание дополнительного метода предварительной очистки от жира при проведении анализа пищевой продукции с большим содержанием жира.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты [для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все его изменения)]:

EN 1528-1:1996, Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 1. Общие положения

EN 1528-2:1996, Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 2. Экстракция жира, пестицидов и ПХБ и определение содержания жира

EN 1528-3:1996, Продукты пищевые с большим содержанием жира. Определение пестицидов и полихлорированных бифенилов (ПХБ). Часть 3. Методы очистки

3 Общие положения

Методы, описанные в настоящем стандарте, позволяют предварительно идентифицировать и количественно определить остатки пестицидов и полихлорированных бифенилов с помощью газовой хроматографии с применением селективных детекторов.

Все положительные результаты должны подтверждаться качественно и количественно.

Результаты анализа могут подтверждаться посредством применения альтернативных колонок для газовой хроматографии (ГХ), альтернативных ГХ-детекторов, тонкослойной хроматографии (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), фракционирования на колонке, получения производных, спектроскопических измерений, а также других аналогичных приемов. Результаты, полученные при применении масс-спектрометрии (МС), обладают максимальной информативностью для целей подтверждения/идентификации.

4 Определение

4.1 Газовая хроматография

4.1.1 Общие положения

Следует использовать газохроматографическую систему, инжекторная, детекторная и колоночные зоны которой нагреваются отдельно. Несмотря на то, что выбор и компоновка различных частей газохроматографической системы должны быть основаны на практическом опыте лица, проводящего анализ, следует учитывать приведенные ниже общие рекомендации.

Детекторы должны быть правильно установлены согласно инструкциям изготовителя. Изменения чувствительности детектора следует периодически проверять с помощью проверки линейности калибровочных кривых с использованием стандартных растворов пестицидов.

Газохроматографическая система должна быть оснащена интегрирующим устройством, которое позволяет производить оценку не только высоты пиков, но и их площади.

На основании практического опыта известно, что равнозначные результаты могут быть достигнуты даже при различных газохроматографических условиях и с использованием различных типов оборудования. С другой стороны, установление одинаковых параметров для ГХ не гарантирует одинаковое качество результатов.

Стандартные условия ГХ анализа приведены в приложении B.

4.1.2 Колонки

Используют или насадочные, или капиллярные колонки.

При использовании насадочных колонок оправдали себя стеклянные колонки длиной от 1,5 до 3 м и внутренним диаметром от 2 до 6 мм. Однако они не подходят для разделения различных ПХБ.

Должен использоваться устойчивый и инертный сорбент, например Gaschrom Q, Chromosorb W/HP и Anachrom Q, с размерами частиц от 125 до 150 мкм (100-120 меш.), от 150 до 190 мкм (80-100 меш.) или от 190 до 250 мкм (60-80 меш.) ¹⁾.

------------------------------

¹⁾_{Gaschrom Q, Chromosorb W/HP, Anachrom Q, Apiezon L... Carbowax 20M являются примерами подходящих стандартных продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей ГОСТ EN 1528-4-2014 и не означает признания названных продуктов со стороны CEN.}

------------------------------

Множество стационарных фаз и сорбентов были успешно использованы для проведения различных анализов пестицидов и ПХБ. Например, наиболее часто применимыми являются следующие типы:

Углеводороды: Apiezon L

Метилсиликоны: DC-11, DC-200, OV-1, OV-101, SP-2100, SE-30

Фенилметилсиликоны: OV-17, OV-25, OV-61, SP-2250, SE-52, SE-54

Трифторпропилметилсиликоны: QF-1, OV-210, SF-2401

Фенилцианопропилметилсиликоны: DB-1301, DB-1701, OV-225, ХЕ-60

Полиэтиленгликоль: Carbowax 20М ¹⁾

------------------------------

¹⁾_{Gaschrom Q, Chromosorb W/HP, Anachrom Q, Apiezon L... Carbowax 20M являются примерами подходящих стандартных продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей ГОСТ EN 1528-4-2014 и не означает признания названных продуктов со стороны CEN.}

------------------------------

Стационарные фазы осторожно наносят на материал носителя, при этом соотношение зависит от выбранного сочетания носитель/фаза. Вновь заполняемые колонки следует выдерживать в течение не менее 24 ч при температуре, близкой к максимальной рекомендуемой рабочей температуре соответствующей стационарной фазы; затем проверяют скорость разделения и селективность при соответствующих рабочих температурах с использованием стандартных растворов пестицидов. Во время выдержки конец колонки должен быть отсоединен от детектора.

В качестве газа-носителя для насадочных колонок рекомендуется использовать чистый сухой азот (свободный от кислорода, особенно при применении детектора электронного захвата (ДЭЗ) или смесь аргона и метана, в случае применения ДЭЗ, работающего в пульсирующем режиме). Скорость потока зависит от размеров и типа используемой колонки. В общем случае скорость потока газа контролируют как можно точнее. Все подводы газа снабжают фильтрами на молекулярных ситах, которые регулярно регенерируют.

Условия газовой хроматографии (длина колонки, тип стационарной фазы, температуры инжектора, детектора и колонки, скорость потока газа и т.п.) должны быть такими, чтобы имеющиеся в пробе пестициды и ПХБ разделялись по возможности более полно.

Капиллярные колонки превосходят насадочные колонки по скорости разделения. Данный метод особо рекомендуется применять для экстрактов сложного состава.

По скорости разделения, сроку службы и механическим свойствам особенно хорошо зарекомендовали себя колонки из кварца, имеющие внутренний диаметр от 0,20 до 0,35 мм и длину от 20 до 60 м.

В некоторых случаях выбирают колонки Wide-bore с внутренним диаметром от 0,5 до 0,8 мм. В качестве основы чаще всего используют следующие стационарные фазы:

SE-30 (соответствует OV-1, DB-1, CP Sil 5, ВР-1, SPB-1 и т.д.);

SE-54 (соответствует DB-5, CP Sil 8, ВР-5, SPB-5 и т.д.);

OV-17 (соответствует OV-11, OV-22, SP-2250, DC-710, DB-608 и т.д.);

DB-1301 (соответствует DB-624);

DB-1701 (соответствует OV-1701, CP Sil 19-СВ, ВР-10, SPB-7 и т.д.);

OV-225 (соответствует DB-225, SIL 43-СВ, SPB-2330 и т.д.);

WAX (соответствует DB-WAX, CP WAX-52-CB, Carbowax 20М и т.д.). ¹⁾

------------------------------

¹⁾_{SE-30 ... Carbowax 20М являются примерами подходящих стандартных продуктов, имеющихся в продаже. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает признания названных продуктов со стороны CEN.}

------------------------------

Проверка скорости разделения капиллярных колонок описана в EN 1528-1:1996 (подраздел 7.2).

4.1.3 Методы инжекции

Могут применяться различные методы инжекции, например:

a) инжекция без сброса по Гробу;

b) инжекция в начало колонки;

c) инжекция с программируемой температурой испарителя (PTV).

Применимость данных методов зависит от условий прибора и специальных требований.

4.2 Предварительные опыты

Определяют линейную область измерений детектора при выбранных условиях для ГХ путем инжекции разбавленных растворов стандартных веществ.

Инжектируют в газовый хроматограф необходимый объем (от 1,0 до 10,0 мм ³ в зависимости от системы) очищенных экстрактов, полученных в соответствии с применяемым аналитическим методом. Полученная таким образом хроматограмма должна позволять как идентифицировать, так и примерно определять концентрацию остатков, присутствующих в экстрактах.

4.3 Определение

Следует убедиться, что все измерения выполняются в линейном динамическом диапазоне системы.

Готовят не менее двух растворов стандартных исследуемых пестицидов или конгенеров ПХБ с различной концентрацией в одном и том же растворителе (обычно петролейный эфир или н-гексан). Их концентрация должна примерно соответствовать ожидаемой концентрации остатков в очищенном растворе экстракта. Инжектируют одинаковые объемы полученного очищенного раствора экстракта и двух или более растворов стандартных веществ в газовый хроматограф. Важно, чтобы перед каждым анализируемым раствором и после него инжектировался стандартный раствор.

Измеряют площадь пика или высоту пика. Результаты любых двух инжекций одного и того же стандартного раствора должны отличаться друг от друга не более чем на 5 %. Необходимо руководствоваться внутренним стандартом (см. EN 1528-3:1996, раздел 4).

Необходимо обеспечить, чтобы стандартные вещества и пробы растворялись в одинаковом растворителе, так как иначе будут получены другие хроматографические профили, что может привести к изменению значения времени удерживания и площади пика или высоты пика. Например, для конгенеров ПХБ при замене изооктана на толуол наблюдалось повышение высоты пика на 35 %.

Содержание отдельных конгенеров ПХБ не должно суммироваться для определения общего содержания ПХБ, так как эта величина не достоверна. Расчеты в сторону увеличения до установленного общего содержания ПХБ (например, вычислено как Clophen  А 60 ²⁾ являются недостоверными, поскольку они в общем случае базируются на неверном предположении, что распределение ПХБ в пробе полностью совпадает с распределением в техническом ПХБ-продукте.

------------------------------

²⁾_{Clophen  А 60 является примером смеси различных ПХБ, которую раньше можно было купить. Данная информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не означает признания названных продуктов со стороны CEN.}

------------------------------

Определение возможно только тогда, когда среднее значение повторных определений для данного вещества из числа многократных определений лежит в диапазоне от 70 % из 110 % для отдельных определений. Соблюдение этого условия проверяют путем регулярного контроля значения повторного определения проб с известными добавками.

5 Методы подтверждения [1]

5.1 Общие положения

При проведении анализов в рамках официального надзора особенно важно, чтобы методы подтверждения проводились до отрицательных результатов о пробах, содержащих остатки пестицидов, которые обычно не встречаются в данной пробе, или о случаях превышения максимальных количеств. Иногда происходит загрязнение проб химическими веществами, которые не являются пестицидами и при применении некоторых хроматографических методов ведут себя аналогичным образом, и поэтому эти составляющие могут обладать свойствами, характерными для пестицидов, и вследствие этого ошибочно идентифицированы как пестициды. Таким примером из газовой хроматографии являются сигналы эфиров фталевой кислоты (фталатов) при использовании ДЭЗ и серосодержащих веществ при применении фосфорселективных детекторов.

Различают два типа методов подтверждения: количественный метод важен тогда, когда содержание пестицидов превышает максимальные количества, тогда как качественное подтверждение идентичности также требуется в этих случаях, а также если вещества оказываются нетипичными. К качественным методам относятся химические реакции или разделения, при которых пропадает некоторая доля веществ. Особые проблемы при подтверждении появляются в случаях, когда максимальные количества находятся в области границ определения.

Необходимость подтверждения может зависеть от типа пробы или от сведений о ней. Для многих веществ определенные остатки обнаруживаются почти всегда. В серии проб аналогичного происхождения может быть достаточным для подтверждения идентичности остатков только в первой пробе. Если известно, что материал пробы содержит данный пестицид, подтверждать идентичность может быть необязательно, однако подтверждение необходимо для отдельных случайно выбранных проб. При наличии контрольных проб их следует использовать для проверки присутствия сопутствующих веществ.

Для количественного подтверждения следует применять как минимум одну альтернативную процедуру и указывать меньшую измеренную величину. Для качественного подтверждения рекомендуется применять альтернативный метод, который основывается на других физико-химических свойствах.

Необходимые для положительной идентификации действия проводятся по усмотрению аналитика, и особое значение при этом придается выбору такого метода, который исключает влияние сопутствующих веществ. Выбор метода будет зависеть от оснащенности лаборатории приборами и от проводимых в ней опытов.

В качестве руководства для аналитика в 5.2-5.9 приведен ряд альтернативных процедур подтверждения.

5.2 Альтернативные колонки для газовой хроматографии

Результаты, полученные при проведении первичного анализа, должны подтверждаться количественно и качественно с использованием как минимум одной альтернативной колонки, содержащей стационарную фазу другой полярности. Количественные результаты не должны отличаться от результатов первичного анализа более чем на 20 %, и в отчете указывается меньшее значение, так как более высокое может быть получено в результате влияния совместно экстрагируемых сопутствующих веществ. Последующее количественное подтверждение требуется, когда результаты различаются более чем на 20 %, за исключением случаев, когда максимальное количество соответствует приблизительно границам определения, когда приемлемым будет отклонение до 100 %.

При выборе материала альтернативной колонки следует обратить внимание на то, чтобы вещество было отделено от остатков пестицидов и ПХБ или сопутствующих веществ, которые на первой колонке имеют те же значения времени удерживания, как и выявленный остаток. Альтернативная колонка может быть набивной колонкой или, что является более предпочтительным, капиллярной колонкой из-за ее более высокой скорости разделения. Хотя альтернативная ГХ-колонка не всегда позволяет добиться положительного подтверждения, она может опровергнуть сомнительную идентичность. В каждом случае необходимо последующее подтверждение для идентификации остатка.

5.3 Альтернативные ГХ-детекторы

При присутствии пестицидов, содержащих несколько химических элементов, могут использоваться детекторы, которые избирательно определяют эти элементы. Пламенно-фотометрические детекторы (для серы, фосфора и олова), щелочные пламенно-ионизационные детекторы (для фтора и азота) или кулонометрические детекторы (для азота, серы и галогенов) могут давать ценную дополнительную информацию об остатках. Определяемое пламенно-фотометрическим детектором отношение серы к фосфору может дать необходимую информацию при исследовании фосфотиолатов.

5.4 Тонкослойная хроматография

В некоторых случаях результаты ГХ-анализа могут выгодно подтверждаться с помощью ТСХ. Идентификация основывается на двух критериях - значении Rf и реакции обнаружения. Научная литература содержит многочисленные ссылки на технику. В [2] опубликован обзор по технике и изложено внедрение. Однако для количественного определения ТСХ годится ограниченно. Применение ее может расширяться в тех случаях, когда в области значения Rf интересующего нас пестицида с пластины для ТСХ соскребается слой адсорбента, пестицид элюируют из слоя и раствор исследуют другими физическими или химическими методами подтверждения. Стандартный раствор пестицида наносят рядом с очищенным экстрактом пробы, в результате чего не возникает никаких проблем из-за неповторяющихся значений Rf. Нанесение стандартного раствора и экстракта пробы на одно и то же стартовое пятно также может дать ценную информацию. Преимущества ТСХ - это высокая скорость, низкие затраты и возможность применения для термочувствительных веществ. Недостатки ТСХ заключаются в более низкой чувствительности по сравнению с газовой хроматографией и часто в необходимости более основательной очистки экстракта. В некоторых странах высокая влажность воздуха или высокая температура может приводить к худшей воспроизводимости.

5.5 Высокоэффективная жидкостная хроматография

ВЭЖХ часто может быть выгодной для подтверждения остатков, изначально выявленных с применением ГХ или других методов, и в некоторых случаях может оказаться предпочтительным методом количественного подтверждения. Получение производных до и после колонки и/или использование различных детекторов дают новые возможности для аналитика, особенно когда термочувствительность или низкая летучесть анализируемого вещества затрудняет исследование методом газовой хроматографии.

5.6 Фракционирование на колонке

Последовательность элюирования из хроматографической колонки во время очистки экстрактов пробы может способствовать подтверждению идентичности вещества. Таким образом, уже известное подтверждение может являться составной частью процедуры экстрагирования и очистки.

5.7 Получение производных

5.7.1 Химические реакции

Часто используют химические реакции в микроколичествах, в результате которых образуются продукты разложения, продукты присоединения или конденсации пестицидов и которые затем снова исследуются хроматографически. Эти продукты имеют другие величины времени удерживания и/или величину отклика детектора, в отличие от первоначальных, исходных пестицидов. Параллельно с предполагаемым веществом проводят реакцию со стандартом пестицида, чтобы можно было непосредственно сравнить оба результата. Должен исследоваться также экстракт с добавкой пестицида, чтобы доказать, что реакция протекала в присутствии одновременно экстрагируемых сопутствующих веществ. Обзор химических реакций, которые применяются для целей подтверждения, приведен в [3]. Химические реакции имеют преимущество в том, что они могут проводиться быстро и легко, но в некоторых случаях для этого, возможно, потребуется закупить и/или очистить специальные реактивы.

5.7.2 Физические реакции

Целесообразным является использование фотохимического превращения остатка пестицида для получения одного или нескольких продуктов с воспроизводимым хроматографическим образцом [4]. Стандартный раствор пестицида и пополненный им раствор экстракта всегда должны обрабатываться одинаково. Результаты проб, содержащих остатки более чем одного пестицида, иногда трудно интерпретировать. В таких случаях вещество можно разделить перед реакцией с помощью ТСХ, ВЭЖХ или фракционированием на колонке.

5.7.3 Другие методы

Многие пестициды могут разлагаться или изменяться под действием ферментов. В отличие от обычных химических реакций эти процессы являются очень специфическими и в общем случае состоят из окисления, гидролиза или деалкилирования [3]. Продукты превращений обладают иными, чем исходный пестицид, хроматографическими характеристиками и могут использоваться для целей подтверждения, если они сравниваются с продуктами превращения с использованием стандартного раствора веществ.

5.8 Масс-спектрометрия

Применение масс-спектрометрии для подтверждения идентичности имеет самую высокую достоверность [6], [7]. При наличии оборудования масс-спектрометрия обычно выбирается как основной метод подтверждения. Существуют два способа введения проб. Более предпочтительным способом является предварительное газохроматог