Методические указания МУК 4.1.3661-20 "Определение остаточных количеств седаксана в корнеплодах и ботве сахарной свеклы, картофеле, зерне и масле кукурузы, семенах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 27 октября 2020 г.)

Методические указания МУК 4.1.3661-20
"Определение остаточных количеств седаксана в корнеплодах и ботве сахарной свеклы, картофеле, зерне и масле кукурузы, семенах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 27 октября 2020 г.)

ББК 51.231

О-62

ISBN 978-5-7508-1988-1

Введены впервые

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ) для определения в корнеплодах и ботве сахарной свеклы, картофеле, зерне и масле кукурузы, семенах и масле сои массовой концентрации транс- и цис-седаксана в диапазоне 0,005 - 0,200 мг/кг.

1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области безопасности и качества пищевой продукции и продовольственного сырья.

1.3. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические свойства

2.1. Седаксан - смесь изомеров:

- транс-изомер: 3-дифторметил-1-метил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота, ((1RS, 2SR)-2-бициклопропил- 2-илфенил)амид;

- 3-дифторметил-1-метил-1H-пиразол-4-карбоновая кислота, ((1RS, 2SR)-2-бициклопропил- 2-илфенил)амид ¹, Брутто-формула C ₁₈H ₁₉F ₂N ₃O, молекулярная масса 331,4.

------------------------------

¹_{В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).}

------------------------------

Седаксан представляет собой белое порошкообразное вещество без запаха. Температура плавления 121,4 °С. Давление паров 6,5·10 ^-5 мПа (при 20 °C); 1,7·10 ^-4 мПа (при 25 °C). Растворимость в органических растворителях при 25 °C (в г/дм ³): ацетон - 410; н-гексан - 0,41; дихлорметан - 500; метанол - 110; октанол - 20; толуол - 70; этилацетат - 200. Растворимость в воде при 25 °C 0,014 г/дм ³. Седаксан гидролитически стабилен при температуре 25 °C и диапазоне pH 5; 7 и 9.

2.2. Острая пероральная токсичность (LD ₅₀) для крыс > 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ₅₀) для кроликов > 5000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC ₅₀) для крыс > 5,24 мг/дм ³ (4 часа).

2.3. Седаксан - фунгицид широкого спектра действия, рекомендуется к использованию в качестве протравителя семян злаковых культур для борьбы с широким спектром патогенов.

III. Погрешность измерений

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов намерений при доверительной вероятности p = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблицах 3.1 и 3.2 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 3.1

Метрологические параметры

Определяемое вещество	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности Р = 0,95), , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости),  r, %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости),  R, %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, %
1	2	3	4	5	6	7
Цис-седаксан
Корнеплоды сахарной свеклы	0,005 - 0,200	50	10,9	15,3	31	43
Ботва сахарной свеклы	0,005 - 0,200	50	6,7	9,4	19	26
Зерно кукурузы	0,005 - 0,200	50	6,1	8,5	17	24
Масло кукурузы	0,005 - 0,200	50	2,5	3,4	7	10
Картофель	0,005 - 0,200	50	8,6	12,0	24	34
Семена сои	0,005 - 0,200	50	1,6	2,3	5	6
Масло сои	0,005 - 0,200	50	5,3	7,5	15	21
Транс-седаксан
Корнеплоды сахарной свеклы	0,005 - 0,200	50	12,8	17,9	36	50
Ботва сахарной свеклы	0,005 - 0,200	50	8,2	11,5	23	32
Зерно кукурузы	0,005 - 0,200	50	5,2	7,3	1,5	20
Масло кукурузы	0,005 - 0,200	50	2,6	3,7	7	10
Картофель	0,005 - 0,200	50	8,8	12,4	25	35
Семена сои	0,005 - 0,200	50	4,6	6,4	13	18
Масло сои	0,005 - 0,200	50	5,5	7,7	15	22

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в табл. 3.2.

Таблица 3.2

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
1	2	3	4	5	6
Цис-седаксан
Корнеплоды сахарной свеклы	0,005	0,005 - 0,200	97,3	10,5	5,5
Ботва сахарной свеклы	0,005	0,005 - 0,200	83,9	6,6	3,4
Зерно кукурузы	0,005	0,005 - 0,200	96,0	10,7	5,6
Масло кукурузы	0,005	0,005 - 0,200	84,6	6,6	3
Картофель	0,005	0,005 - 0,200	87,8	12,8	6,7
Семена сои	0,005	0,005 - 0,200	93,5	17,7	9,3
Масло сои	0,005	0,005 - 0,200	83,4	7,3	3,8
Транс-седаксан
Корнеплоды сахарной свеклы	0,005	0,005 - 0,200	98,2	12,0	6,3
Ботва сахарной свеклы	0,005	0,005 - 0,200	85,5	6,8	3,6
Зерно кукурузы	0,005	0,005 - 0,200	97,9	8,8	4,6
Масло кукурузы	0,005	0,005 - 0,200	86,0	9,6	5,0
Картофель	0,005	0,005 - 0,200	90,7	13,4	7,0
Семена сои	0,005	0,005 - 0,200	99,6	16,5	8,6
Масло сои	0,005	0,005 - 0,200	86,8	7,7	3,5

IV. Метод измерений

4.1. Методика основана на определении веществ с помощью ВЭЖХ на обращенной фазе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором.

4.2. Уровни транс- и цис-седаксана в образцах корнеплодов и ботвы, сахарной свеклы, картофеле, зерне кукурузы и семенах, сои определяют после экстракции из анализируемых проб смесью ацетонитрил-вода, в образцах масла кукурузы и сои - ацетонитрилом. Экстракт очищают на концентрирующих патронах на основе сополимера дивинилбензола и N-винилпирролидона.

Нижний предел измерения каждого изомера седаксана в анализируемом объеме пробы 0,001 нг.

4.3. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы

5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в табл. 5.1 - 5.3.

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки	Внесено в реестр "Утверждённые типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Прибор/приборы для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в реестр "Утверждённые типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы, аналитические с пределом допустимой погрешности 0,0005 г	ГОСТ Р 53228
Весы лабораторные общего назначения с пределом допустимой погрешности 0,01 г	ГОСТ Р 53228
Колбы мерные 2-го класса точности 2-100-2 вместимостью 50 и 100 см 3	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1
Микропипетка градуированная 1-го класса точности объемом 0,2 см 3	ГОСТ 8.100
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см 3	ГОСТ 29227
Пробирки градуированные с притертой пробкой 2-го класса точности объемом 10,0 и 15,0 см 3	ГОСТ 1770
Термометр лабораторный, пределы измерения - 35 - 55 °C	ГОСТ 28498
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, 100, 250 и 500 см 3	ГОСТ 1770

Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными гаи лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Седаксан SYN508211 (цис-изомер), аналитический стандарт	С содержанием основного компонента не менее 95 %
Седаксан SYN508210 (транс-изомер), аналитический стандарт	С содержанием, основного компонента не менее 95 %
Азот особой чистоты из баллона	ГОСТ 9293
Ацетонитрил для хроматографии	Квалификация, не ниже "химически чистый"
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная)	ГОСТ Р 52501
Н-гексан	Квалификация не ниже "химически чистый"
Калий углекислый (карбонат калия, поташ)	Химически чистый, прокаленный по ГОСТ 4221
Метиловый спирт (метанол)	Химически чистый по ГОСТ 6995
Муравьиная кислота	99,7 %-я, чистая для анализа по ГОСТ 5848
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора)	Квалификация не ниже "химически чистый"

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства, материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
1	2
Аллонж с прямым отводом для вакуума	-
Баня, ультразвуковая с рабочей частотой 35 кГц	-
Аппарат для встряхивания проб	Орбита до 10 мм
Воронки химические конусные диаметром 40 - 45 мм	ГОСТ 25336
Воронка делительная вместимостью 250 см 3	ГОСТ 25336
Колба коническая плоскодонная вместимостью 250 300 см 3	ГОСТ 25336
Стаканы химические с носиком вместимостью 100 и 400 см 3	ГОСТ 25336
Груша резиновая	-
Измельчитель бытовой	-
Мембраны микропористые капроновые	Диаметр пор 0,45 мм
Набор для фильтрации растворителей через мембрану	-
Патроны для твердофазной экстракции	На основе сополимера дивинилбензола и N-винилпирролидона, масса сорбента 60 мг
Насос водоструйный	-
Керамические гомогенизаторы для пробирок на 50 см 3	-
Пробирки ноли пропиленовые центрифужные с крышками вместимостью 50 и 2 см 3	-
Установка для перегонки растворителей	-
Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,22 мкм	-
Холодильник/морозильник бытовой	-
Хроматографическая колонка стальная длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм	-
Центрифуга лабораторная, роторная, скорость вращения до 4000 об./мин с центрифужными стаканами на 100 см 3	-
Шприцы медицинские одноразовые вместимостью 5 см 3	-

Примечание. Допускается использование вспомогательных средств измерений, устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

VI. Требования безопасности

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической. документации на жидкостный хроматограф.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и экспериментально подтвердивший соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. Условия измерений

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 5) °C и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на газовом и жидкостном хроматографах проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на приборы.

VIII. Подготовка к выполнению измерений

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ, растворов, подготовка концентрирующих патронов для очистки экстрактов, приготовление градуировочных растворов, растворов внесения, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик.

8.2. Очистка ацетонитрила.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм ³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют. Непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм ³ ацетонитрила 10 г карбоната калия).

8.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ.

Компонент А: в мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 500 см ³ ацетонитрила, вносят 0,22 см ³ муравьиной кислоты, доводят до метки ацетонитрилом, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Компонент Б: в мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 500 см ³ деионизированной воды, вносят 0,22 см ³ муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой, перемешивают, фильтруют через мембранный фильтр, дегазируют.

Каждый компонент подвижной фазы хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.4. Приготовление смеси растворителей для экстракции и очистки экстракта.

В мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 800 см ³ ацетонитрила, 200 см ³ деионизованной воды, перемешивают.

Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.5. Приготовление смеси растворителей для приготовления рабочих растворов.

В мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 500 см ³ ацетонитрила, 500 см ³ деионизованной воды, перемешивают.

Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.6. Подготовка концентрирующих патронов.

Патрон устанавливают на аллонж, с прямым отводом для вакуума.

Концентрирующие патроны промывают с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом, со скоростью прохождения растворителя через патрон 1 - 2 капли в секунду последовательно метанолом и бидистиллированной водой (по 2 см ³). Патроны готовят непосредственно перед использованием.

8.7. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.7.1. Приготовление исходного раствора транс-седаксана для градуировки (концентрация 100 мкг/см ³). В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 0,0100 г транс-седаксана, добавляют 50 - 70 см ³ метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранятся в холодильнике при температуре (4 2 °C) не более 6 месяцев.

8.7.2. Приготовление исходного раствора цис-седаксана для градуировки (концентрация 100 мкг/см ³). В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 0,0100 г цис-седаксана, добавляют 50 - 70 см ³ метанола, перемешивают, доводят метанолом до метки, вновь перемешивают. Раствор хранятся в холодильнике при температуре (4 2 °C) не более 6 месяцев.

Растворы N 1 - 8 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходных растворов для градуировки.

8.7.3. Приготовление раствора N 1 транс- и цис-седаксана для градуировки и внесения (концентрация каждого вещества 10 мкг/см ³).

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают по 10 см ³ исходных растворов транс- (п. 8.7.1) и цис-седаксана (п. 8.7.2) с концентрациями 100 мкг/см ³, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 1 с концентрацией транс- и цис-седаксана 10 мкг/см ³. Раствор N 1 хранится в холодильнике при температуре (4 2 °C) не более одного месяца.

8.7.4. Приготовление раствора N 2 транс- и цис-седаксана для градуировки и внесения (концентрация каждого вещества 0,1 мкг/см ³).

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 1,0 см ³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией транс- и цис-седаксана 10,0 мкг/см ³ (п. 8.7.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 2 с концентрацией транс- и цис-седаксана 0,1 мкг/см ³. Раствор N 2 хранится в холодильнике при температуре (4 2 °C) не более одного месяца.

8.7.5. Приготовление рабочих растворов N 3 - 8 транс- и цис-седаксана для градуировки (концентрация каждого вещества по 0,2 - 8,0 мг/см ³).

В 6 мерных колб вместимостью 100 см ³ помещают 8, 4, 2, 1, 0,5 и 0,2 см ³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией транс- и цис-седаксана по 0,1 мкг/см ³ (п. 8.7.4), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной п.п. 8.5, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 8 с концентрациями транс- и цис-седаксана 8, 4, 2, 1, 0,5 и 0,2 нг/см ³, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике при температуре (4 2 °C) не более одной недели.

8.8. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ.

Промывают колонку подвижной, фазой (смесь компонентов А и Б, приготовленных, п.п. 8.3, в соотношении 1:1) при скорости подачи растворителя 0,4 см ³/мин до установления стабильной базовой линии.

8.9. Установление градуировочных характеристик.

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика от концентрации транс- и цис-седаксана в растворе (нг/см ³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 6 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 5 мм ³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях, хроматографирования п.п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.10. Контроль стабильности градуировочной характеристики. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание веществ в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 8 до 0,2 нг/см ³ в соответствии с п. 8.7.5.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

, где

(1)

X - концентрация веществ в растворе при контрольном измерении, мкг/см ³;

С - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см ³;

В - норматив контроля погрешности градуировочной характеристики, % (В = 20 % при Р = 0,95).

IX. Отбор и хранение проб

9.1. Отбор проб осуществляют в соответствии с методическими документами ².

------------------------------

²_{ГОСТ 33884 "Свекла сахарная. Технические условия", ГОСТ 135634 "Кукуруза. Требования при заготовках и поставках", ГОСТ Р 53903 "Кукуруза кормовая. Технические условия", ГОСТ 8808 "Масло кукурузное. Технические условия", ГОСТ 7194 "Картофель свежий. Правила приемки и методы определения качества", ГОСТ 17109 "Соя. Требования при заготовках и поставках", ГОСТ 31760 "Масло соевое. Технические условия" и Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых, продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79, Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности. Москва, 2018, 64 с.}

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо слов "ГОСТ 135634" следует читать "ГОСТ 13634"

------------------------------

9.2. Образцы корнеплодов и ботвы свеклы, картофеля, зерна кукурузы и сои хранят в холодильнике при температуре (4 2) °C не более 5 дней. Для длительного хранения пробы, замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

Пробы масла кукурузы и сои готовят из соответствующих образцов зерна, анализ выполняют в день приготовления.

9.3. Перед анализом образцы измельчают.

X. Выполнение определения

10.1. Экстракция.

10.1.1. Корнеплоды и ботва сахарной свеклы, картофель, зерно кукурузы и семена сои.

Образец измельченных корнеплодов или ботвы свеклы, картофеля, зерна кукурузы или семян сои массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 - 300 см ³ добавляют 100 см ³ смеси ацетонитрил-вода (подготовленной п.п. 8.5). интенсивно встряхивают вручную в течение 1 мин, затем помещают на аппарат для встряхивания на 30 минут.

Пробам дают отстояться. Затем раствор переносят в центрифужный стакан на 100 см ³, центрифугируют 5 мин при 3 500 об./мин.

Переносят аликвоту экстракта корнеплодов или ботвы свеклы, картофеля, зерна кукурузы или семян сои объемом 1,0 см ³ (соответствующую 0,1 г пробы) в градуированную пробирку на 10 см ³ доводят водой до 10 см ³, перемешивают.

Далее проводят очистку экстракта на концентрирующем патроне (картридже). Растворы, находящиеся в градуированный пробирках, фильтруют с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом через концентрирующий патрон, подготовленный по п. 8.6, со скоростью прохождения раствора 1 - 2 см ³/мин, пропуская раствор до верхнего края сорбента. После нанесения пробы, патрон дополнительно промывают 1 см ³ воды, сушат 15 мин под вакуумом. Седаксан элюируют 1,25 см ³ ацетонитрила, доводят конечный объем до 2,5 см ³ деионизованной водой, перемешивают, выдерживают 1 - 2 мин на ультразвуковой ванне, фильтруют через мембранный фильтр, анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.

10.1.2. Масло кукурузы и сои.

Образец масла кукурузы или сои массой 10 г помещают в делительную воронку вместимостью 250 см ³, добавляют 100 см ³ ацетонитрила, интенсивно встряхивают вручную в течение 1 мин, затем оставляют на 10 минут для расслаивания фаз.

Нижнюю масляную фазу сливают, к ацетонитрильной фазе для удаления остатков масла добавляют 30 см ³ гексана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин, затем оставляют на 10 минут для расслаивания фаз. Нижнюю ацетонитрильную фазу сливают в новую делительную воронку и еще раз промывают 30 см ³ гексана.

Переносят аликвоту экстракта объемом 1,0 см ³ (соответствующую 0,1 г пробы) в градуированную пробирку на 15 см ³, доводят водой до 10,2 см ³ перемешивают.

10.2. Очистка экстракта на концентрирующем патроне (картридже). Растворы, находящиеся в градуированный пробирках, фильтруют с помощью разряжения, создаваемого водоструйным насосом через концентрирующий патрон, подготовленный п.п. 8.6, со скоростью прохождения раствора 1 - 2 см ³/мин, пропуская раствор до верхнего края сорбента. После нанесения пробы, патрон дополнительно промывают 1 см ³ воды, сушат 15 мин под вакуумом. Седаксан элюируют 1,25 см ³ ацетонитрила, доводят конечный объем до 2,5 см ³ деионизованной водой, перемешивают, выдерживают 1 - 2 мин на ультразвуковой ванне, фильтруют через мембранный фильтр, анализируют в условиях хроматографирования по п. 10.3.

10.3. Условия хроматографирования.

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

- жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов;

- хроматографическая колонка стальная, длиной 50 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазовым сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм;

- температура колонки 40 °C;

- скорость потока элюента 0,4 см ³/мин;

- объем вводимой пробы 5 мм ³;

- подвижная фаза: ацетонитрид-вода (1:1), по объему, 0,22 см ³/дм ³ муравьиной кислоты);

- источник ионизации: электростатическое распыление;

- давление на распылителе 35 psi;

- скорость осушающего газа 1 (азот) 10 дм ³/мин;

- температура газа 1: 350 °C;

- скорость газа 2 (азот) 12 дм ³/мин;

- температура газа 2: 400 °C;

- температура квадруполей (1 и 3) 100 °C;

- режим работы: мониторинг множественных реакций.

Параметры мониторинга множественных реакций для каждого анализируемого компонента:

Транс-седаксан:

- материнский ион (масса/заряд) 332,16;

- дочерние ионы (масса/заряд) 159,0 (количественный расчет), 292,1;

- напряжение на фрагментаторе, В: 110;

- энергия разрушения (соударения), В: 13 (332,16 159,0), 9 (332,164 292,1);

- скорость сканирования 200 мс.

Цис-седаксан:

- материнский ион (масса/заряд) 332,16; дочерние ионы (масса/заряд) 159,0 (количественный расчет), 292,1;

- напряжение на фрагментаторе, В: 110;

- энергия разрушения (соударения), В: 17 (332,16 159,0), 9 (332,16 292,1);

- скорость сканирования 200 мс.

Линейный диапазон детектирования каждого компонента 1 - 40 пг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 8,0 нг/см ³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз).

XI. Обработка результатов анализа

11.1. Содержание седаксана (в виде суммы транс- и цис-изомеров) в пробах корнеплодов или ботвы сахарной свеклы, картофеля, зерна или масла кукурузы, семян или масла сои (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

, где

(2)

А, В - концентрации транс- и цис-седаксана, соответственно, найденные по градуировочным графикам, в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, нг/см ³;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см ²;

m - масса (объем) анализируемого образца, г;

С - коэффициент, учитывающий объем экстракта, взятого для анализа, С = 100;

f - полнота извлечения седаксана (табл. 3.2), %.

ХII. Оформление результатов

12.1. Результат анализа представляют в виде:

(), мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанные приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

(3)

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых, концентраций, результат анализа представляют в виде: "Содержание транс- или цис-изомера седаксана в пробе корнеплодов или ботвы сахарной свеклы, картофеля, зерне или масле кукурузы, зерне или масле сои - менее 0,005 мг/кг; содержание в виде суммы транс- и цис-изомеров - менее 0,01 мг/кг" ³.

------------------------------

³_{0,005 мг/кг - нижний предел количественного определения транс- или цис-изомера седаксана в пробе корнеплодов или ботвы сахарной свеклы, картофеля, зерне или масле кукурузы, зерне или масле сои; 0,01 мг/кг - нижний предел количественного определения седаксана в виде суммы транс- и цис-изомеров.}

------------------------------

XIII. Контроль качества результатов измерений

13.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки C _д должна удовлетворять условию:

, где

(4)

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

, где

(5)

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

(6)

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Результат контроля процедуры К _к рассчитывают по формуле:

, где

(7)

, , C - среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

(8)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К _к) с нормативом, контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

,

(9)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (9) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (1) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений.

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (10):

, где

(10)

X ₁, Х ₂ - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 3.1), при этом r=2,8·r.

При невыполнении условия (10) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

13.4. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных, в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R)

, где

(11)

X ₁, Х ₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1 и. 3.2), %.

Библиографические ссылки

1. ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

2. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

3. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

4. ГОСТ 28498 "Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний".

5. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

6. ГОСТ OIML R 111-1 "Государственная система обеспечения единства измерений (ГСИ). Гири классов Е(1), Е(2), F(1), F(2), М(1-2), М(2), M(2-3) и М(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

7. ГОСТ 9293 (ИСО 2435) "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

8. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

9. ГОСТ 4221 "Реактивы. Калий углекислый. Технические условия".

10. ГОСТ 6995 "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".

11. ГОСТ 5848 "Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".

12. ГОСТ 4233 "Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия".

13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 33884 "Свекла сахарная. Технические условия".

15. ГОСТ 135634 "Кукуруза. Требования при заготовках и поставках".

ГАРАНТ:

По-видимому, в тексте предыдущего абзаца допущена опечатка. Вместо слов "ГОСТ 135634" следует читать "ГОСТ 13634"

16. ГОСТ Р 53903 "Кукуруза кормовая. Технические условия".

17. ГОСТ 8808 "Масло кукурузное. Технические условия".

18. ГОСТ 7194 "Картофель свежий. Правила приемки и методы определения качества".

19. ГОСТ 17109 "Соя. Требования при заготовках и поставках".

20. ГОСТ 31760 "Масло соевое. Технические условия".

21. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

22. ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

23. ГОСТ 12.1.019 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

24. ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Пожарная безопасность. Общие требования".

25. ГОСТ 12.4.009 "Система стандартов безопасности, труда (ССБТ). Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

26. ГОСТ 12.0.004 "Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Организация обучения безопасности труда. Общие положения".

27. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79.

28. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности, Москва, 2018, 64 с.