Методические указания МУК 4.1.3979-24 "Определение остаточных количеств этипрола и его метаболита этипрол-сульфона (RPA 097973) в рисе и кофе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 19 февраля 2024 г.)

Методические указания МУК 4.1.3979-24
"Определение остаточных количеств этипрола и его метаболита этипрол-сульфона (RPA 097973) в рисе и кофе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием"
(утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека 19 февраля 2024 г.)

Дата введения 19 мая 2024 г.

I. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) описывают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании с тройным квадрупольным масс-детектором (далее - ВЭЖХ-МС/МС) для определения в рисе и кофе массовой концентрации этипрола и его метаболита этипрол-сульфона (RPA 097973) в диапазонах 0,01 - 0,25 мг/кг для кофе и 0,004 - 0,100 мг/кг для риса без учета разбавления и 0,01 - 12,5 мг/кг для кофе и 0,004 - 5 мг/кг для риса с учетом разбавления в 50 раз.

1.2. МУК носят рекомендательный характер.

II. Физико-химические свойства

2.1. Этипрол. 5-амино-1-(2,6-дихлор-,,-трифтор-п-толил)-4-этил-сульфинилпиразол-3-карбонитрил ¹. Брутто-формула: C ₁₃H ₉Cl ₂F ₃N ₄OS. Молекулярная масса 397,2.

------------------------------

¹ В соответствии с Международным союзом теоретической и прикладной химии (ИЮПАК, англ. International Union of Pure and Applied Chemistry, IUPAC).

------------------------------

2.2. Физические и химические свойства.

Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления >165,5 °C. Давление паров 9,1·10 ^-5 мПа. Коэффициент распределения н-октанол-вода (logК _ow) 2,9. Растворимость в органических растворителях в г/дм ³ (при температуре плюс 20 - 25 °C): ацетон 90,7; ацетонитрил - 24,5; этилацетат - 24,0; метанол - 47,2; дихлорметан - 19,9; н-гептан - 0,004; толуол - 1,0; н-октанол - 2,4. Растворимость в воде (при 20 - 25 °C): 9200,0 мг/дм ³. Является основанием, рКа - 3,9 (при температуре плюс 20 - 25 °C).

2.3. Краткая токсикологическая характеристика.

Острая пероральная токсичность (LD ₅₀) для крыс 7080 мг/кг.

2.4. Область применения.

Этипрол - инсектицид группы фенилпиразолов, действует как блокатор ГАМК-регулируемых хлоридных каналов. Используется для борьбы с грызущими и сосущими насекомыми в рисовых, фруктовых и овощных культурах.

2.5. Этипрол-сульфон. 5-амино-1-(2,6-дихлор-,,-трифтор-п-толил)-4-этилсульфонилпиразол-3-карбонитрил. Брутто-формула: C ₁₃H ₉Cl ₂F ₃N ₄O ₂S. Молекулярная масса 413,21.

III. Погрешность измерений

3.1. При соблюдении условий проведения анализа ² и методики, изложенной в настоящих МУК, погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в таблице 3.1 для соответствующих диапазонов концентраций.

------------------------------

²ГОСТ P ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст; ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике", введенный в действие постановлением Госстандарта России от 23.04.2002 N 161-ст (далее - ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6)).

------------------------------

Таблица 3.1

Метрологические параметры

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (границы относительной погрешности, P = 0,95), , %	Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости),  r, %	Показатель воспроизводимости (среднеквадратичное отклонение воспроизводимости),  R, %	Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений) r, %	Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, %, (P = 0,95)
Этипрол
Рис	0,004 - 5	50	8,5	11,8	25	33
Кофе	0,01 - 12,5	50	6,4	9,0	18	25
Этипрол-сульфон
Рис	0,004 - 5	50	8,0	11,2	22	31
Кофе	0,01 - 12,5	50	8,3	11,6	23	32
Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления экстракта образца в 50 раз.

3.2. Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для всего диапазона измерений (n = 20) приведены в таблице 3.2.

Таблица 3.2

Полнота извлечения веществ, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
Этипрол
Рис	0,004	0,004 - 5	95,4	9,1	4,7
Кофе	0,01	0,01 - 12,5	93,4	12,4	6,5
Этипрол-сульфон
Рис	0,004	0,004 - 5	96,4	8,4	4,4
Кофе	0,01	0,01 - 12,5	91,0	8,6	4,5
Примечание: диапазон определяемых концентраций приведен с учетом разбавления экстракта образца в 50 раз.

IV. Метод измерений

4.1. Методика основана на определении вещества с помощью ВЭЖХ-МС/МС.

4.2. Экстракцию вещества из анализируемых проб растительной продукции выполняют ацетонитрилом с использованием смеси солей для экстракции (смесь сульфата магния, хлорида натрия, цитрата натрия и натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного). Очистку экстрактов проводят методом дисперсионной твердофазной экстракции с применением смеси сорбентов на основе аминов и октадецилсилана - для риса, смеси на основе аминов и графитизированной сажи - для кофе.

4.3. Нижний предел измерения этипрола и его метаболита этипрол-сульфона в анализируемом объеме пробы - 20 пг.

V. Средства измерений, реактивы, вспомогательное оборудование, устройства и материалы

Таблица 5.1

Средства измерений

Наименование средств измерения	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Жидкостный хроматограф с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь, снабженный автоматическим пробоотборником и термостатом колонки	Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Прибор для измерения атмосферного давления, температуры и относительной влажности воздуха	Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений
Весы лабораторные аналитические, предел допустимой погрешности 0,0005 г	ГОСТ Р 53228
Весы лабораторные, предел допустимой погрешности 0,01 г	ГОСТ Р 53228
Колбы мерные 2-го класса точности, вместимостью 50, 100 и 1000 см 3	ГОСТ 1770
Меры массы	ГОСТ OIML R 111-1
Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0, 10 см 3	ГОСТ 29227
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 10, 100 и 500 см 3	ГОСТ 1770
Примечание: Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

Таблица 5.2

Реактивы

Наименование реактивов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Аммоний муравьинокислый (формиат аммония) для ВЭЖХ-МС/МС	Чистота не менее 99,0 %
Ацетонитрил для ВЭЖХ-МС/МС	Чистота не менее 99,9 %
Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная)	ГОСТ Р 52501
Калий углекислый (карбонат калия, поташ), химически чистый, прокаленный	ГОСТ 4221
Фосфор (V) оксид (фосфорный ангидрид, пентоксид фосфора)	Квалификация реактива: химически чистый
Магний сернокислый (сульфат магния), безводный химически чистый	Квалификация реактива: химически чистый
Муравьиная кислота, 99,7 %, чистая для анализа	ГОСТ 5848
Натрий хлористый (хлорид натрия), химически чистый	ГОСТ 4233
Натрий лимоннокислый двузамещенный, 1,5-водный, химически чистый	Квалификация реактива: химически чистый
Натрий лимоннокислый трехзамещенный, чистый для анализа	ГОСТ 22280
Сорбент для твердофазной экстракции на основе первичного-вторичного амина	Площадь поверхности 570 м 2/г, средний размер пор 67 А, средний размер частиц 60 мкм
Сорбент для твердофазной экстракции на основе силикагеля с привитыми октадецильными группами (С18)	Площадь поверхности 547 м 2/г, средний размер пор 64 А, средний размер частиц 58 мкм
Графитизированная сажа	Размер ячеек 120/400, площадь поверхности 100 м 2/г
Примечание: допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.

Таблица 5.3

Вспомогательное оборудование, устройства, материалы

Наименование вспомогательного оборудования, устройств, материалов	Обозначение и наименование документов, технические характеристики
Груша резиновая	-
Керамические гомогенизаторы для пробирок на 50 см 3	-
Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками, вместимостью 50 и 15 см 3	-
Мельница лабораторная	-
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении	-
Морозильная камера или морозильный ларь, поддерживающий температуру не выше минус 18 °C	-
Стаканы химические с носиком, вместимостью 100 и 400 см 3	ГОСТ 25336
Фильтры мембранные для фильтрации проб с помощью шприца, размер пор 0,22 мкм	-
Хроматографическая колонка стальная, длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм	-
Центрифуга лабораторная, роторная, скорость вращения до 4000 об/мин	-
Шприцы медицинские одноразовые вместимостью 5 см 3	ГОСТ ISO 7886-1

VI. Требования безопасности

6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007, требования по электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ Р 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостные хроматографы.

6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009. Организуется обучение работников безопасности труда.

6.3. Работа с газами, находящимися в баллонах под давлением до 15 МПа (150 кгс/см ³) осуществляется в соответствии с законодательством Российской Федерации ³. Запрещается открывать вентиль баллона, не установив в нем понижающий редуктор.

------------------------------

³Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением, утвержденные приказом Федеральной службы по экологическому, технологическому и атомному надзору от 15.12.2020 N 536 (зарегистрировано Минюстом России 31.12.2020, регистрационный N 61998).

------------------------------

6.4. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе с тройным квадрупольным масс-спектрометрическим детектором, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментальное соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

VII. Условия измерений

7.1. При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (205) °C и относительной влажности не более 80 %;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией на прибор.

VIII. Подготовка к выполнению измерений

8.1. Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление компонентов подвижной фазы для ВЭЖХ-МС/МС, смеси растворителей для разбавления градуировочных растворов, градуировочных растворов, растворов внесения, смеси солей для экстракции и смеси сорбентов для очистки экстрактов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочных характеристик, отбор проб.

8.2. Очистка органических растворителей.

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора (на 1 дм ³ ацетонитрила 20 г пентоксида фосфора) не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия (на 1 дм ³ ацетонитрила 10 г карбоната калия). Хранят в емкости из темного стекла.

8.3. Приготовление 0,2 % раствора муравьиной кислоты в воде (компонент А подвижной фазы для ВЭЖХ-МС/МС).

В мерную колбу вместимостью 1000 см ³ помещают 500 см ³ деионизированной воды, вносят 2,0 см ³ муравьиной кислоты, доводят до метки деионизированной водой и тщательно перемешивают. Приготовленный раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.4. Приготовление смеси растворителей для разбавления градуировочных растворов.

Смешивают ацетонитрил и воду в соотношении 9:1 по объему. Раствор хранят в темном месте (в емкости из темного стекла) не более 14 дней.

8.5. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения.

8.5.1. Исходный раствор этипрола для градуировки (концентрация 100 мкг/см ³).

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают (0,01000,0005) г этипрола, добавляют 50 - 70 см ³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более месяцев.

8.5.2. Исходный раствор этипрол-сульфона для градуировки (концентрация 100 мкг/см ³).

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают (0,01000,0005) г этипрол-сульфона, добавляют 50 - 70 см ³ ацетонитрила, перемешивают, доводят ацетонитрилом до метки, вновь перемешивают. Раствор готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 3 месяцев.

Растворы N 1 - 7 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

8.5.3. Раствор N 1 этипрола и этипрол-сульфона для градуировки и внесения (концентрация 1,0 мкг/см ³).

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают по 1 см ³ исходного раствора этипрола (п. 8.5.1) и этипрол-сульфона (п. 8.5.2) с концентрациями 100 мкг/см ³, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 1 с концентрацией этипрола и этипрол-сульфона 1,0 мкг/см ³. Раствор N 1 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 1 месяца.

8.5.4. Раствор N 2 этипрола и этипрол-сульфона для градуировки и внесения (концентрация 0,1 мкг/см ³).

В мерную колбу вместимостью 100 см ³ помещают 10,0 см ³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией этипрола и этипрол-сульфона 1,0 мкг/см ³ (п. 8.5.3), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочий раствор N 2 с концентрацией этипрола и этипрол-сульфона 0,1 мкг/см ³. Раствор N 2 готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 1 месяца.

8.5.5. Рабочие растворы N 3 - 7 этипрола и этипрол-сульфона для градуировки (концентрация 2 - 50 нг/см ³).

В 3 мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают 1, 2 и 5 см ³ градуировочного раствора N 1 с концентрацией этипрола и этипрол-сульфона 1,0 мкг/см ³ (п. 8.5.3), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 8.4, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 3 - 5 с концентрациями этипрола и этипрол-сульфона 10, 20 и 50 нг/см ³ соответственно.

В 2 мерные колбы вместимостью 100 см ³ помещают 2 и 5 см ³ градуировочного раствора N 2 с концентрацией этипрола и этипрол-сульфона 0,1 мкг/см ³ (п. 8.5.4), доводят до метки смесью растворителей, приготовленной по п. 8.4, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 6 - 7 с концентрациями этипрола и этипрол-сульфона 2 и 5 нг/см ³, соответственно. Растворы готовят при температуре плюс 20 °C и хранят в холодильнике при температуре плюс 2 - 6 °C не более 2 недель.

8.6. Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ-МС/МС. Промывают колонку подвижной фазой при соотношении компонентов А и Б (компонент А - 0,2 % раствор муравьиной кислоты в воде, приготовленный по п. 8.3; компонент Б - ацетонитрил) 1:1 и скорости подачи растворителя 0,3 см ³/мин до установления стабильной базовой линии ⁴.

------------------------------

⁴Примечание: возможно использование коммерческих наборов солей для экстракции проб фруктов и овощей массой 10 г.

------------------------------

8.7. Приготовление смеси солей для экстракции.

Для приготовления одного набора смеси солей для экстракции смешивают (4,000,01) г магния сернокислого, (1,000,01) г натрия хлористого, (1,000,01) г натрия лимоннокислого трехзамещенного и (0,500,01) г натрия лимоннокислого двузамещенного, 1,5-водного, до использования хранят в герметичной упаковке (не более 6 месяцев).

8.8. Приготовление смеси сорбентов для очистки экстрактов.

8.8.1. Экстракты из риса.

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (1504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе смеси первичных и вторичных аминов, (9004) мг магния сернокислого и (1504) мг твердофазного сорбента на основе октадецилсилана, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование дисперсионных наборов для фруктов и овощей с маслом и воском, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см ³.

8.8.2. Экстракты из кофе.

Для приготовления одного набора смеси сорбентов для очистки экстрактов в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см ³ помещают (1504) мг сорбента для твердофазной экстракции на основе смеси первичных и вторичных аминов, (9004) мг магния сернокислого и (454) мг графитизированной сажи, закрывают герметично крышкой, встряхивают для перемешивания, хранят не более 6 месяцев.

Примечание. Возможно использование дисперсионных наборов для сильно пигментированных фруктов и овощей, помещенных в полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см ³.

8.9. Установление градуировочных характеристик.

Градуировочные характеристики, выражающие зависимость площади пика (1) от концентрации этипрола и этипрол-сульфона в растворе (нг/см ³), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5 растворам для градуировки.

В инжектор хроматографа вводят по 10 мм ³ каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования в соответствии с п. 10.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

8.10. Контроль стабильности градуировочной характеристики.

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале и по окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее двух образцов концентраций для градуировки, содержание этипрола и этипрол-сульфона в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 2 до 50 нг/см ³.

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение (1), (2):

;

(1)

AB,

(2)

где: А - величина расхождения, %;

X - концентрация вещества в пробе при контрольном измерении, мкг/см ³;

С - известная концентрация градуировочного раствора, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см ³;

В - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, % (равен 20 % при Р = 0,95).

IX. Отбор и хранение проб

9.1. Отбор проб осуществляется в соответствии с методическими документами ⁵.

------------------------------

⁵Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов от 21.08.1979 N 2051-79; Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности, утвержденные Минсельхозом России 15.11.2018; ГОСТ Р 55289 "Рис. Технические условия", введенный приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1470-ст; ГОСТ 32775 "Кофе жареный. Общие технические условия", введенный приказом Росстандарта от 27.08.2014 N 971-ст.

------------------------------

9.2. Растительные пробы хранят при температуре плюс 2 - 6 °C не более недели. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре не выше минус 18 °C.

9.3. Перед анализом образцы тщательно измельчают.

X. Выполнение определения

10.1. Экстракция.

Измельченный образец риса массой 5 г (образец кофе 2 г) помещают в центрифужную полипропиленовую пробирку вместимостью 50 см ³. В пробирку с образцом риса вносят 5 см ³ деионизованной воды, с образцом кофе - 10 см ³ деионизованной воды для увлажнения проб. Добавляют 10 см ³ ацетонитрила, перемешивают. В пробирку помещают керамический гомогенизатор, закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную 2 мин, вносят в пробирку смесь солей для экстракции (приготовленную по п. 8.7), закрывают крышкой и интенсивно встряхивают (вручную) в течение 1 мин. Затем пробу центрифугируют 10 мин при скорости вращения 4000 об/мин.

Полученный экстракт подвергают очистке с применением дисперсионной твердофазной экстракции по п. 10.2.

10.2. Очистка экстракта.

Часть экстракта (верхний слой в пробирке после центрифугирования) объемом 6 - 7 см ³ с помощью пипетки переносят в пропиленовую центрифужную пробирку вместимостью 15 см ³, содержащую смесь сорбентов, приготовленную по п. 8.8.1 (для риса) и по п. 8.8.2 (для кофе). Закрывают крышку и интенсивно встряхивают вручную в течение 30 сек. Центрифугируют 5 мин при скорости вращения 4000 об/мин. Отбирают с помощью медицинского шприца очищенный экстракт и фильтруют через мембранный фильтр (размер пор 0,22 мкм) в виалу вместимостью 2 см ³ с фторопластовой прокладкой и навинчивающейся крышкой. Помещают в автосамплер хроматографа для анализа в условиях хроматографирования по п. 10.3.

10.3. Условия проведения анализа.

Измерения выполняют на жидкостном хроматографе с тандемным масс-спектрометрическим детектором: тройной квадруполь с источником ионизации, оснащенным соосной подачей горячего азота для эффективной десольвации ионов при следующих режимных параметрах:

- источник ионизации: электростатическое распыление (электроспрей);

- режим работы: регистрация дочерних отрицательных ионов после разрушения материнских ионов (регистрация "перехода").

Параметры масс-спектрометрического детектора:

Этипрол:

- материнский ион (масса/заряд): 394,99;

- дочерние ионы (масса/заряд): 330,5 (количественный расчет), 249,9 (подтверждающий ион);

- напряжение на фрагментаторе, В: 81;

- энергия разрушения (соударения), В: 9 (394,99330,5), 25 (394,99249,9)

Этипрол-сульфон:

- материнский ион (масса/заряд): 410,97;

- дочерние ионы (масса/заряд): 374,9 (количественный расчет), 281,9 (подтверждающий ион);

- напряжение на фрагментаторе, В: 96;

- энергия разрушения (соударения), В: 9 (410,97374,9), 25 (410,97281,9);

- скорость сканирования: 200 мс;

- давление на распылителе: 35 psi;

- скорость осушающего газа 1 (азот): 10 дм ³/мин;

- температура газа 1: 350 °C;

- скорость газа 2 (азот): 12 дм ³/мин;

- температура газа 2: 400 °C;

- температура квадруполей (1 и 3): 100 °C.

Условия хроматографирования:

- хроматографическая колонка стальная длиной 150 мм, внутренним диаметром 2,1 мм, заполненная обращенно-фазным сорбентом с привитыми монофункциональными полярными группами С18, зернением 1,8 мкм;

- температура колонки: 40 °C;

- скорость потока элюента: 0,3 см ³/мин;

- объем вводимой пробы: 10 мм ³;

- подвижная фаза: 0,2 % раствор муравьиной кислоты в воде - ацетонитрил.

Градиент потока:

- начало с 70 % элюента А + 30 % элюента Б;

- переход на 30 % элюента А + 70 % элюента Б - с 0 до 0,5 мин;

- переход на 10 % элюента А + 90 % элюента Б - с 0,5 до 3,5 мин;

- переход на 70 % элюента А + 30 % элюента Б - с 3,5 до 5 мин.

Линейный диапазон детектирования 20 - 500 пг.

Ориентировочное время выхода этипрола - 2,492 мин, этипрол-сульфона - 2,743 мин.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор с концентрацией 50 нг/см ³, разбавляют подвижной фазой (не более чем в 50 раз), что позволяет расширить диапазон измеряемых концентраций до 5 мг/кг для риса и до 12,5 мг/кг для кофе.

XI. Обработка результатов анализа

11.1. Содержание этипрола и этипрол-сульфона в пробах риса и кофе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле (3):

,

(3)

где: A - концентрация этипрола и этипрол-сульфона, соответственно, найденная по градуировочному графику в соответствии с величинами площадей хроматографических пиков, нг/см ³;

V _кон - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, см ³, равен 10 см ³;

m - масса анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения вещества, приведенная в таблице 3.2 (в %).

Для выражения содержания этипрол-сульфона в эквиваленте действующего вещества этипрола, уровень метаболита умножают на коэффициент К, равный соотношению молекулярных масс действующего вещества и его метаболита (379,21/413,21 = 0,92).

XII. Оформление результатов

12.1. Результат анализа представляют в виде (4):

мг/кг при вероятности Р = 0,95,

(4)

где: - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг; рассчитанная по формуле (5):

=·X/100,

(5)

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 3.1), %.

Если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание этипрола и этипрол-сульфона в пробах риса - менее 0,004 мг/кг ⁶, в пробах кофе - менее 0,01 мг/кг" ⁷.

------------------------------

⁶Примечание: 0,004 мг/кг - предел обнаружения этипрола и этипрол-сульфона в пробах риса.

⁷Примечание: 0,01 мг/кг - предел обнаружения этипрола и этипрол-сульфона в пробах кофе.

------------------------------

XIII. Контроль качества результатов измерений

13.1. Организация контроля качества измерений осуществляется в соответствии с методическими документами ⁸.

------------------------------

⁸ГОСТ Р ИСО 5725-(1-6).

------------------------------

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок.

Величина добавки должна удовлетворять условию (6):

,

(6)

где: - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно) мг/кг, при этом соотношение (7):

 _л=0,84·,

(7)

где: - граница абсолютной погрешности, мг/кг, при этом соотношение (8):

=·X/100,

(8)

где: - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Результат контроля процедуры К _к рассчитывают по формуле (9):

,

(9)

где: , , С _д - среднее арифметическое результатов параллельных определений содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки, соответственно, мг/кг;

Норматив контроля К рассчитывают по формуле (10):

.

(10)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (К _к) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию (11):

|К _к|К,

(11)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (11) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (11) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости R, формула (12):

,

(12)

где: X ₁, X ₂ - результаты измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, таблица 3.1), %.

Библиографические ссылки

1. Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".

2. Правила промышленной безопасности при использовании оборудования, работающего под избыточным давлением.

3. ГОСТ Р ИСО 5725-1 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

4. ГОСТ Р ИСО 5725-2 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений".

5. ГОСТ Р ИСО 5725-3 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерений".

6. ГОСТ Р ИСО 5725-4 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

7. ГОСТ Р ИСО 5725-5 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 5. Альтернативные методы определения прецизионности стандартного метода измерений".

8. ГОСТ Р ИСО 5725-6 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

9. ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".

10. ГОСТ OIML R 111-1 "Гири классов E(1), Е(2), F(1), F(2), M(1), М(1-2), М(2), М(2-3) и М(3). Часть 1. Метрологические и технические требования".

11. ГОСТ 1770 "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".

12. ГОСТ 29227 "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".

13. ГОСТ 25336 "Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры".

14. ГОСТ 9293 "Азот газообразный и жидкий. Технические условия".

15. ГОСТ 5848 "Кислота муравьиная. Технические условия".

16. ГОСТ 4221 "Калий углекислый. Технические условия".

17. ГОСТ 4233 "Натрий хлористый. Технические условия".

18. ГОСТ 22280 "Натрий лимоннокислый 5,5-водный. Технические условия".

19. ГОСТ Р 52501 "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".

20. ГОСТ ISO 7886-1 "Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования".

21. ГОСТ 12.1.004 "Пожарная безопасность. Общие требования".

22. ГОСТ 12.1.007 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".

23. ГОСТ 12.1.019 "Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

24. ГОСТ 12.4.009 "Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание".

25. ГОСТ Р 55289 "Рис. Технические условия".

26. ГОСТ 32775 "Кофе жареный. Общие технические условия".

27. Унифицированные правила отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов.

28. Методические указания по регистрационным испытаниям пестицидов в части биологической эффективности.