Приложение 2. Требования нормативно-методических документов по проведению лабораторного обследования больных ЭВИ (с подозрением на это заболевание)

Приложение 2

Требования
нормативно-методических документов по проведению лабораторного обследования больных ЭВИ (с подозрением на это заболевание)

*СП 3.1.2950-11 "Профилактика энтеровирусной (неполно) инфекции"

**МУ 3.1.1.2363-08 "Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусной (неполио) инфекции. Методические указания. МУ 3.1.1.2363-08"

N	Мероприятие	Нормативный документ	Примечание
1)	Обязательное лабораторное обследование больных ЭВИ и лиц с подозрением на это заболевание	П. 4.4 *СП 3.1.2950-11	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией. Материал на исследование отбирается у пациентов, получающих стационарное лечение и наблюдаемых амбулаторно.
2)	Обследованию на ЭВИ подлежат лица при наличии у них одного или нескольких из следующих клинических симптомов/синдромов: - очаговая неврологическая симптоматика; - менингеальные симптомы; - сепсис новорожденных небактериальной природы; - ящуроподобный синдром (HFMD-экзантема полости рта и конечностей); - герпангина, афтозный стоматит; - миокардит; - геморрагический конъюнктивит; - увеит; - миалгия; - другие (в том числе респираторный синдром, гастроэнтерит, экзантема при возникновении групповой заболеваемости в детском организованном коллективе).	П. 2.7 *СП 3.1.2950-11	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией. Материал на исследование отбирается у пациентов, получающих стационарное лечение и наблюдаемых амбулаторно.
3)	Взятие клинического материала от больного организуется при установлении диагноза ЭВИ или при подозрении на это заболевание - в день его обращения (госпитализации).	П. 4.4 *СП 3.1.2950-11	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией. Материал на исследование отбирается у пациентов, получающих стационарное лечение и наблюдаемых амбулаторно.
4)	Для исследования отбираются: спинномозговая жидкость, отделяемое конъюнктивы, мазок отделяемого везикул, кровь, биоптаты органов (стерильные типы клинического материала); мазок (смыв) из ротоглотки/носоглотки, мазок отделяемого язв при герпангине, образцы фекалий, аутопсийный материал (нестерильные типы клинического материала). Аутопсийный материал (ткани головного, спинного, продолговатого мозга и варолиева моста, печени, легких, миокарда, лимфоузлы, содержимое кишечника и ткань кишечной стенки, соскоб кожных высыпаний) отбирается при летальном исходе.	П. 4.4 *СП 3.1.2950-11	Материал на исследование отбирается у пациентов, получающих стационарное лечение и наблюдаемых амбулаторно. Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
5)	Взятие определенного вида материала для лабораторных исследований от больных ЭВИ и лиц с подозрением на это заболевание осуществляется с учетом клинической картины заболевания.	П. 4.4 *СП 3.1.2950-11	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
6)	При наличии клинических показаний взятие стерильных типов клинического материала должно включаться в исследование в обязательном порядке	П. 4.4 *СП 3.1.2950-11	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
7)	Образцы фекалий. Используют пробы фекалий массой (объемом) 1 - 3 г (1 - 3 мл). Фекалии забирают из предварительно продезинфицированного горшка или подкладного судна. Пробу в количестве 1 грамма (примерно) отдельным наконечником с аэрозольным барьером или одноразовыми лопатками переносят в специальный стерильный флакон. Две пробы фекалий для выделения вируса отбирают в течение 7 дней после начала болезни, но не позднее 14 дней, с интервалом 24 - 48 часов.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
8)	Мазки из ротоглотки. Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9% раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
9)	Смывы из носо/ротоглотки. Сбор материала производят в положении больного сидя с отклоненной назад головой. Для получения смыва из полости носа в оба носовых хода поочередно с помощью одноразового шприца вводят по 3 - 5 мл теплого стерильного 0,9% раствора натрия хлорида. Промывную жидкость из обоих носовых ходов собирают через воронку в одну стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием. Перед сбором материала необходимо предварительное полоскание полости рта водой. После этого проводят тщательное полоскание ротоглотки (в течение 10 - 15 сек.) 8 - 10 мл 0,9% раствора натрия хлорида. Жидкость собирают через воронку в стерильную пробирку. Не допускается повторное использование воронки без предварительного обеззараживания автоклавированием.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
10)	Спинномозговая жидкость. Забор СМЖ проводится в первые дни болезни при наличии клинических показаний в асептических условиях с использованием одноразовых пункционных игл. Для исследования отбирают 1 мл СМЖ.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
11)	Кровь. Первую пробу крови (5 мл) для серологической диагностики берут как можно раньше после начала болезни, вторую - на 3 - 4-й неделе, в стадии реконвалесценции.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
12)	Содержимое везикул. Для взятия материала везикулы участок кожи протирают спиртом. Пузырек прокалывают иглой или вскрывают скальпелем, собирают вытекающую жидкость на ватный тампон, которым также протирают везикулу. Для повышения информативности исследования необходимо собирать одним тампоном материал не менее чем с трех везикул. Тампон помещают в 1 мл транспортной среды.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Сбор клинического материала осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения.
13)	В случае летального исхода забирают секционный материал - ткани головного, спинного и продолговатого мозга и варолиева моста, содержимое кишечника и ткань кишечной стенки. При необходимости исследуют другие материалы (ткань сердечной мышцы, печени, легких и пр.). Ткани берут как можно раньше после смерти в заранее намеченном порядке для избежания их контаминации содержимым желудка и кишечника. Для иссечения тканей используют набор стерильных инструментов для каждой пробы. Объем пробы (кусочка) из тканей центральной нервной системы должен составлять примерно 1 куб. см; из толстой кишки иссекается сегмент длиной 3 - 5 см, содержащий фекальные массы. Каждую пробу помещают в отдельный стерильный флакон с транспортировочной средой.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией Исследование секционного материала проводится в ЛКБФ ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области" г. Екатеринбург, пер. Отдельный 3)
14)	Пробы для выделения вируса берут с соблюдением предосторожностей для исключения контаминации одной пробы материалом другой этого же больного или материалом пробы другого обследуемого. Для отбора проб используют стерильную пластиковую посуду.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией
15)	Пробы немедленно отправляют в лабораторию. Если отправка проб в лабораторию задерживается, их помещают в холодильник при температуре +4 град. - +8 град. С. Если время отправки превышает 72 часа пробы замораживают и соблюдают эти условия во время транспортировки. Сыворотки без добавления консервантов хранят при +4С или в замороженном виде.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией
16)	Доставка клинического материала в лабораторию для исследований с целью установления этиологии возбудителя и его биологических свойств проводится не позднее 72-х часов с момента отбора проб.	П. 4.5 *СП 3.1.2950-11	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией
17)	Перед отправкой материалов отправитель должен проинформировать лабораторию (получателя) о планируемой отправке и ее сроках. Недопустимо отправлять материалы без предварительной договоренности с получателем.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией
18)	При транспортировке материалов в лабораторию соблюдают принцип "тройной упаковки": 1) первичная емкость - маркированный контейнер/пробирка/флакон с пробой, надежно закрытая крышкой, герметизированной лабораторной пленкой или парафином; 2) вторичная емкость - прочный водонепроницаемый, непротекающий контейнер (или полиэтиленовый пакет) с поглощающим материалом в достаточном количестве для сорбции всей жидкости в случае повреждения упаковки. Во вторичную емкость помещают контейнер/пробирку/флакон с пробой. Образцы от одного пациента упаковываются отдельно. Также во вторичную емкость помещают направление на исследование, вложенное в полиэтиленовый пакет, где указано Ф.И.О., возраст и адрес проживания больного, дата начала заболевания, дата отбора материала, предварительный клинический диагноз, дата последней иммунизации против полиомиелита. 3) внешняя упаковка - прочный термоизолирующий контейнер или термос. Для обеспечения температурных условий, в термоконтейнеры помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. На внешней поверхности термоконтейнера укрепляют этикетку с указанием адреса, телефона, факса, электронной почты отправителя, адреса, телефона, факса, электронной почты получателя, условий транспортировки и знак биологической опасности.	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией
19)	Транспортировку осуществляют в строгом соответствии с СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности".	Приложение 2 **МУ 3.1.1.2363-08	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией
20)	Лабораторные исследования, направленные на обнаружение и идентификацию ЭВИ, осуществляются лабораториями, имеющими разрешительные документы для работы с возбудителями III - IV групп патогенности в соответствии с действующими нормативными правовыми актами и владеющими соответствующими методами лабораторных исследований.	П. 5.1 *СП 3.1.2950-11	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией. При выборе лаборатории, на базе которой будет проводится исследование клинических материалов от заболевших следует учесть, что в обязательном порядке необходимо предусмотреть проведение исследований клинического материала на энтеровирус 71 типа.
21)	Лабораторные исследования, направленные на обнаружение и идентификацию ЭВ, из секционного материала проводят в ЛКБФ ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области" (г. Екатеринбург, пред. Отдельный д. 3).
22)	Лабораторные исследования, направленные на обнаружение и идентификацию ЭВИ, осуществляются лабораториями, имеющими разрешительные документы для работы с возбудителями III - IV групп патогенности в соответствии с действующими нормативными правовыми актами и владеющими соответствующими методами лабораторных исследований.	П. 5.1 *СП 3.1.2950-11	- С целью обнаружения (индикации) энтеровирусов, в том числе ЭВ 71 типа - проводятся исследования клинического материала (стерильных и нестерильных проб) методом ПЦР (обнаружение РНК энтеровирусов, в том числе энтеровирусов 71 типа). - С целью проведения идентификации энтеровирусов, выделенных от больных ЭВИ - проводятся: - вирусологические исследования (выделение штаммов энтеровирусов ка культуре клеток); - генопитирование проб клинического материала содержащего РНК энтеровирусов (в ПЦР исследовании).
23)	На территории Свердловской области Вирусологическая диагностика ЭВИ проводится в вирусологических лабораториях: - МАУ "Клинико-диагностический центр" (город Екатеринбург); - ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области" (город Екатеринбург), Н-Тагильский филиал ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии в Свердловской области" (город Н-Тагил). Генотипирование энтеровирусов проводится: в Урало-Сибирском региональном научно-методическом центре по изучению энтеровирусных инфекций на базе ФБУН "Екатеринбургский научно-исследовательский институт вирусных инфекций" Роспотребнадзора (г. Екатеринбург)
24)	Лабораторным подтверждением диагноза ЭВИ является: - обнаружение энтеровирусов или их рибонуклеиновой кислоты (далее - РНК) в стерильных типах клинического материала; - выявление энтеровирусов или их РНК в нестерильных типах клинического материала при наличии этиологически расшифрованной вспышки энтеровирусной инфекции и при наличии у пациента характерной для данной вспышки клинической картины заболевания; - выявление энтеровирусов или их РНК в нестерильных типах клинического материала при отсутствии вспышки и соответствии их серо- или генотипа специфичной клинической картине заболевания (HFMD, герпангина, острый геморрагический конъюнктивит, увеит и другие); - выявление энтеровирусов или их РНК в двух пробах нестерильных клинических материалов разных типов.	П. 5.3. *СП 3.1.2950-11	Выполнение обеспечивается лечебно-профилактической организацией.