Методические указания МУК 4.2.2428-08 "Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 октября 2008 г.)

Методические указания МУК 4.2.2428-08
"Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста"
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 29 октября 2008 г.)

Дата введения: 15 декабря 2008 г.

1. Общие положения и область применения

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок контроля и методы определения бактерий Enterobacter sakazakii - возбудителей пищевых токсикоинфекций у детей раннего возраста, при осуществлении государственного санитарно-эпидемиологического надзора, а также при санитарно-эпидемиологическом расследовании вспышек пищевых отравлений и инфекций с пищевым путем передачи.

1.2. Методические указания предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, осуществляющих контроль качества и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, в т.ч. импортируемых в Российскую Федерацию, а также лабораторную диагностику заболеваний с пищевым путем передачи. Методические указания могут быть использованы другими лабораторными центрами, осуществляющими контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованными в установленном порядке.

1.3. Контролю на наличие бактерий Е. sakazakii подлежат детские молочные смеси и продукты прикорма сухие, а также специализированные продукты для лечебного и профилактического питания детей первого года жизни, при анализе которых на наличие патогенных микроорганизмов, в том числе сальмонелл, не были выявлены облигатные патогены, принадлежащие к родам Salmonella, Shigella, Yersinia, группам энтеровирулентных Escherichia coli, но выявлялся рост сопутствующей грамотрицательной неспорообразующей микрофлоры.

1.4. Необходимость контроля указанных групп продукции на наличие Е. sakazakii обусловлена регистрацией в последние годы документированных спорадических случаев и вспышек септических инфекций и некротизирующего энтероколита у детей I года жизни, в первую очередь недоношенных, новорожденных с низкой массой тела или иммунокомпромиссных. Все случаи заболеваний связаны с употреблением детских молочных смесей, контаминированных Е. sakazakii, том числе при очень низких уровнях возбудителя (1-10 КОЕ/г). При этом установлено, что в первую очередь Е. sakazakii может попадать в сухие молочные смеси с контаминированными ингредиентами, добавляемыми после сушки, или из окружающей среды в процессе упаковки готового продукта.

1.5. Предлагаемый метод определения бактерий Е. sakazakii в пищевых продуктах, предназначенных для детей раннего возраста, предусматривает определение наличия или отсутствия указанных микроорганизмов в определенной массе (объеме) продукта в соответствии с нормативами СанПиН 2.3.2.1078-2001 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", выраженными в альтернативной форме и основанными на существующей системе отбора образцов и оценки результатов анализа по двухклассной системе. Настоящие Методические указания также предусматривают определение количества Е. sakazakii в пищевых продуктах для детей раннего возраста методом наиболее вероятного числа (НВЧ).

1.6. Обнаружение Е. sakazakii в 300 г инстантных молочных смесей и продуктов прикорма сухих, предназначенных для детей 1 года жизни; или в 300 г сухих молочных смесей или специализированных продуктов для детей младше 6 месяцев, должно рассматриваться как присутствие патогенных бактерий в исследуемых образцах, свидетельствующее о высокой степени риска для детей данной возрастной категории, и служить основанием для запрета использования такой продукции с принятием соответствующих мер, направленных на обеспечение безопасности продуктов детского питания.

2. Сущность метода

2.1. Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii основан на высеве определенных количеств продукта в жидкие селективные среды для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae, с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективного агара, с последующим выделением чистой культуры. Ниже представлена методическая схема определения Е. sakazakii.

Таблица 1.

Схема исследования сухих детских смесей на наличие Е. sakazakii

Этап	Продолжительность инкубации, ч	температура
1. Подготовка реактивов и материалов
2. Растворение навесок в стерильном фосфатном буфере (ФБР) в соотношении 1:10 (при необходимости определения количества - навесок массой 100, 10 и 1 г в 3 колбы или пробирки с ФБР каждая), смешивание и инкубация	18-24	36°С
3. Посев проинкубированной суспензии в селективный питательный бульон для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae и инкубация	18-24	36°С
4. Пересев 0,1 мл проинкубированного бульона для выделения Enterobacteriaceae на поверхность фиолетово-красного желчного агара с глюкозой (VRBG agar) или агар Эндо;	18-24	36°С
5. Отбор 5 подозрительных на E.sakazakii колоний с поверхности VRBG агара или Эндо, пересев на триптонсоевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA) и инкубация	48-72	25°С
6. Отбор колоний с желтым пигментом, микроскопия по Граму и подтверждение их видовой принадлежности.
7. При необходимости - подсчет наиболее вероятного числа (НВЧ) по количеству положительных проб в каждой из засеянных навесок продукта.

2.2. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность к виду Е. sakazakii. Подтверждение принадлежности к E.sakazakii производится путем получения развернутых биохимических характеристик штаммов. Допускается использование тест-систем для биохимической дифференциации энтеробактерий API 20E, Rapid 20E, ID 32E (ф. "БиоМерье", Франция) и др.

Определение биохимических характеристик, дифференцирующих Е. sakazakii от близкородственных представителей энтеробактерий Enterobacter cloacae и Pantoea agglomerans, приведены в табл. 2.

Таблица 2

Биохимическая дифференциация Enterobacter sakazakii

Тест или субстрат	Реакции
	Е. sakazakii	Е. cloacae	P. agglomerans
Лизиндекарбоксилаза	-	-	-
Аргининдигидролаза	+	+	-
Орнитиндекарбоксилаза	+	+	(-)
Подвижность	+	+	(+)
Утилизация цитратов	+	+	+
Реакция с метиловым красным	-	-	-
Реакция Фогес-Проскауэра	+	+	(+)
Индол	-	-	(-)
Глюкоза	+	+	+
Лактоза	+	+	(+)
Сахароза	+	+	(+)
Дульцит	-	-	(-)
Адонит	-	(-)	-
Раффиноза	(+)	+	(+)
D-сорбит	-	+	(+)
альфа-метил-D-глюкозид	+	(+)	-
мальтоза	+	+	+
Маннит	+	+	+
Разжижение желатины (22°С)	-	-	+
Мукоидный рост	+	+	+
Желтый пигмент при 24°С	+	-	(+)

Примечания:

"+" - 90-100% штаммов положительные; "(+)" - 21-89% штаммов положительные;

"-" - 0-9% штаммов положительные; "(-)" - 10-24% штаммов положительные.

Ведущими дифференцирующими признаками Enterobacter sakazakii от других представителей вида Enterobacter являются способность к образованию желтого пигмента при культивировании на неселективных средах при оптимальной температуре 25°С и отсутствие ферментации D-сорбита. Для дифференциации E.sakazakii от сорбитвариабельных и обладающих желтым пигментом представителей рода Pantoea agglomerans (Syn: Erwinia spp.) используется тест разжижения желатины.

В качестве дополнительного теста при идентификации E.sakazakii возможно определение -глюкозидазной активности на хромогенных средах, содержащих 4-нитрофенил--d-глюкопиранозид или 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-,d-глюкопиранозид.

3. Аппаратура, материалы, лабораторная посуда, реактивы и питательные среды

3.1. Аппаратура и инструментарий

Наименование аппаратуры и материалов	Названия нормативных документов (ГОСТ, ТУ)
Анализатор потенциометрический, погрешность измерений рН+-0,01	ГОСТ 19881-74
Шкаф сушильный стерилизационный ШСС-80П или других марок, позволяющий поддерживать температуру (160+-5)°С	ТУ 64-1-28-70-76
Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 37°С с отклонением от заданной +-1°С	ТУ 64-1-1382-83
Термостат, позволяющий поддерживать рабочую температуру 41,5°С с отклонением от заданной +-1°С	ТУ 64-1-1382-83
Весы лабораторные общего назначения, 2 и 4 класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г	ГОСТ 24104-88

ГАРАНТ:

См. ГОСТ Р 53228-2008 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 25 декабря 2008 г. N 739-ст

Микроскоп биологический МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, МБР-1, МБР-3, МБС	ГОСТ 8284-78
Стерилизаторы паровые медицинские или аналогичные	ГОСТ 19569-89Е
Дистиллятор, обеспечивающий качество дистиллированной воды в соответствии с	ГОСТ 6709-72
Гомогенизатор перистальтического типа "Микс-2", "Стомайкер", или других наименований	AES Lab., Cat.N AESAP 1066
Гомогенизатор типа "вортекс"
Микропипетки на 200-1000 мкл	DIOHIT, Cat.N 720040 или "Ленпипет"
Облучатель бактерицидный настенный ОБН-150 или других видов	ТУ-16-535-84
Холодильник бытовой электрический	ГОСТ 16317-87
Пинцет медицинский	ГОСТ 21241-89
Ножницы медицинские	ГОСТ 21239-89
Скальпель хирургический, 15 см	ГОСТ 21240-89
Часы механические сигнальные	ГОСТ 3145-84
Электроплитка	ГОСТ 14919-83
Аппарат универсальный для встряхивания жидкости в колбах и пробирках (или другая аппаратура для встряхивания)	ТУ 64-1-2451-78

3.2. Лабораторная посуда и материалы

Бумага фильтровальная лабораторная	ГОСТ 12026-76
Марля медицинская	ГОСТ 9412-77
Колбы плоскодонные конические или круглые разной вместимости	ГОСТ 1770-74
Воронки стеклянные	ГОСТ 25336-82
Вата медицинская гигроскопическая	ГОСТ 5556-81
Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3	ГОСТ 29227-91
Пробирки типов П1, П2	ГОСТ 25336-82
Стекла предметные для микропрепаратов	ГОСТ 6672-75
Спиртовки лабораторные стеклянные	ГОСТ 23932-90
Термометр ртутный с диапазоном измерения от 0 до 100°С (цена деления шкалы 1°С)	ГОСТ 13646-68
Чашки биологические (Петри) или одноразовые из полимерных материалов	ГОСТ 23932-90
Пакеты стерильные для гомогенизатора	AES Lab., Cat.N AES400/50G
Отраслевой стандарт для визуальной оценки мутности N 10	ГИСК им. Л.А. Тарасевича, МЗ РФ
Денситометр для бактериальных суспензий типа "Densi-La-Meter" или "Денсимат"	ф. "Лахема", "BioMerieux"
стандарт Макфарланда NN 1, 2, 3	ф. "BioMerieux"
Петля бактериологическая

3.3. Реактивы и питательные среды

Агар микробиологический

ГОСТ 17206-84

ГАРАНТ:

Постановлением Госстандарта России от 13 августа 1997 г. N 274 взамен ГОСТ 17206-84 с 1 января 1998 г. введен в действие ГОСТ 17206-96 "Агар микробиологический. Технические условия" с правом досрочного введения для применения в РФ

Вода дистиллированная	ГОСТ 6709-72
D-глюкоза, ч.	ГОСТ 6038-79
D-лактоза, 1-водная	ТУ 6-09-22-98-79
Маннит
D-сорбит
Рамноза
Калия гидроокись	ГОСТ 24363-80
Калий фосфорнокислый однозамещенный, ч.	ГОСТ 4198-75
Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный	ГОСТ 2493-75
Кислота соляная, х.ч.	ГОСТ 3118-77
Литий хлористый, ч. или х.ч., или ч, д.а	ГОСТ 4328-77
Масло иммерсионное для микроскопии	ГОСТ 31739-78
Набор реактивов для окраски по Граму
Натрий-аммоний фосфорнокислый двузамещенный, 4-водный, ч. или х.ч.	ГОСТ 4170-78
Натрия гидроокись, ч.д.а	ГОСТ 4328-77
Натрий лимоннокислый, 5,5-водный, ч.д.а	ГОСТ 22280-75
Натрий хлористый, ч. или х.ч., или ч.д.а	ГОСТ 4233-77
Пара-диметиламидобензальдегид, ч.	ТУ 6-09-3272-77
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей	ГОСТ 13805-76
Спирт этиловый ректификованный технический	ГОСТ 18300-87
Спирт этиловый ректификованный	ГОСТ 5962-67
Феноловый красный	ГОСТ 5853-51
Фенолфталеин	ГОСТ 5850-72
Фуксин основной	ТУ 6-09-4119-75
Хлороформ технический	ГОСТ 2-15-76-72
Уксусная кислота	ГОСТ 61-75
Сульфаниловая кислота
А-нафтол
Цинк порошкообразный	ГОСТ 3640
Желатин сухой
Экстракт дрожжевой сухой
Тест-штамм Entervbacter sakazakii, типичный по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам	ГИСК им. Л.А. Тарасевича
Пептонная вода забуференная - (сухая)
Триптозный ГРМ-агар и ГРМ-бульон	ФС42-3377-97 (ГНЦПМ)
Питательный бульон и питательный агар	ТУ 10-02-02-789-176-94
Триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA)	HiMediaM1214
Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом (TSYEB)	HiMediaM1263
Среды Гисса с глюкозой, лактозой, маннитом, рамнозой, дульцитом, адонитом, сахарозой, сорбитом	ФС (ЦНИИВС им. И.И.  Мечникова, НИИ питательных сред)
SIM-агар (сероводород-индол-подвижность)	Difco
Среда Эндо	ТУ 9229-072-00419785
Агар желчный фиолетово-красный	ТУ 9229-072-00419785
Среда Кесслер с глюкозой	ГОСТ 30519-97
Бульон Мак-Конки с глюкозой	ГОСТ 30519-97
Бульон с желчью, бриллиантовым зеленым и глюкозой	ГОСТ 30519-97
Тест-системы биохимические для видовой идентификации API 20E, Rapid 20E, ID 32Е для идентификации Enterobacteriaceae и других грамотрицательных палочек	BioMerieux
Набор реактивов для окраски по Граму
Набор для постановки оксидазного теста

Примечание: Допускается использование других питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными характеристиками, прошедших регистрацию в РФ в установленном порядке, после процедуры их стандартизации относительно официально утвержденных методов анализа.

Питательные среды и биологические препараты зарубежного производства должны иметь международный сертификат качества ИСО 9000 или EN 29 000. Питательные среды и препараты отечественного производства должны вырабатываться по нормативной документации, утвержденной в установленном порядке.

4. Подготовка к анализу

4.1. Приготовление растворов и реактивов

4.1.1. Пептонно-солевой раствор	По ГОСТ 26669-85
4.1.2. Изотонический (0,85%-ный водный) раствор хлорида натрия	По ГОСТ 26669-85
4.1.4. Приготовление растворов и реактивов для окраски препаратов по Граму	По ГОСТ 10444.1 или в соответствии с инструкцией по применению
4.1.6. Стерильный фосфатный буфер с рН 7,2+-0,1	КН2РО4 - 0,45 г, Na2HPO4 - 5,34 г в 1000 см3 дистиллированной H2О, стерилизовать при температуре 121°С в течение 30 мин

4.2. Приготовление питательных сред

4.2.1. Среды промышленного изготовления, поименованные в п. 4.3., готовят согласно прописям на этикетке или в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя.

4.2.2. Питательный агар с 5% глюкозы готовят в соответствии с ГОСТ 10444.1-84 "Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов, питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе".

4.2.3. Триптон-соевый бульон с дрожжевым экстрактом, триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом.

Состав сред (г/л): ферментативный гидролизат казеина - 17,0; пептон соевый - 3,0; натрий хлористый - 5,0; фосфат калия однозамещенный - 2,5; глюкоза - 2,5; дрожжевой экстракт - 6,0; агар микробиологический (для TSYEA) - 15,0.

Компоненты растворяют в 1000  дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают рН и автоклавируют при 121°С в течение 15 мин.

Готовые среды разливают в стерильные колбы или пробирки и хранят в защищенных от света условиях при температуре не выше 8°С.

4.2.4. Среда для определения подвижности: 20 г гидролизата казеина ферментативного, 6 г пептона мясного ферментативного и 5 г агара растворяют в 1000  дистиллированной воды, устанавливают рН , разливают в пробирки по 5-7  и стерилизуют при 121°С в течение 15 мин.

4.2.5. Среды Гисса с углеводами: 10 г пептона ферментативного и 5 г натрия хлористого растворяют в 1000  дистиллированной воды и добавляют 10 г соответствующего углевода. Устанавливают рН , вносят 10 мл индикатора Андреде (также возможно использование индикатора бромкрезолового пурпурного, "ВР" и др.), разливают в пробирки и стерилизуют при 112°С в течение 20 мин.

5. Отбор и подготовка проб к анализу

5.1. Отбор и подготовку проб продукции производят в соответствии с ГОСТ 26668-85 "Методы отбора проб для микробиологических анализов", ГОСТ 26669-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов", МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов", ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96), Масса или объем отбираемых проб должны быть достаточными для проведения исследования на патогенные микроорганизмы и минимально вдвое превышать аналитический образец.

ГАРАНТ:

В соответствии с приказом Росстандарта от 30 ноября 2010 г. N 596-ст. ГОСТ 26668-85 не применяется на территории РФ с 1 января 2012 г. и введен в действие ГОСТ Р 54004-2010

См. ГОСТ Р ИСО 7218-2008 "Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям", утвержденный приказом Ростехрегулирования от 18 декабря 2008 г. N 480-ст

5.2. От продукции в потребительской таре пробы отбирают в количестве одной или нескольких единиц в зависимости от массы или объема потребительской тары, с тем, чтобы количество было достаточным для проведения анализа. От продукции в транспортной или потребительской таре больших размеров или неупакованной пробы отбирают из разных мест с различной глубины, включая поверхность.

5.3. Для микробиологических анализов пробы отбирают до взятия проб на физико-химические и органолептические анализы стерильным инструментом в стерильную посуду.

5.4. Первичный посев исследуемых проб продуктов на патогенные микроорганизмы проводят в соответствии с порядком, изложенным в МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов".

5.5. При отсутствии роста облигатных патогенов, принадлежащих к родам Salmonella, Shigella, Yersinia, группам энтеровирулентных Escherichia coli, но при обнаружении роста сопутствующей грамотрицательной неспорообразующей микрофлоры в нормируемых навесках исследуемых продуктов, от них отбирают дополнительные пробы (2 навески по 100 г при первичном посеве 100 г продукта, 2 невески по 125 г при первичном посеве 50 г, 2 навески по 137,5 при первичном посеве 25 г) и анализируют в соответствии с процедурой, изложенной в разделе 7.

6. Проведение анализа

6.1. Пробы продуктов массой 100 г, 125 г или 137,5 г вносят в фосфатный буферный раствор (ФБР) или изотонический раствор (п. 4.3.) в соотношении 1:9 по объему. Посевы термостатируют при температуре ()°С в течение () ч.

6.2. При количественном анализе общая масса (объем) навески должна быть не менее 400 г ().

Из подготовленной по п. 6. пробы отбирают 4 навески (порции) продукта массой 100 г () каждая для анализа. Производят посев каждой из трех навесок (порций) в 900  ФБР и перемешивают.

Из четвертой навески (порции) массой (объемом) 100 г () отбирают три навески (порции) продукта массой 10 г () и производят посев в 90 см3 ФБР и перемешивают. Из этой же пробы отбирают три навески (порции) продукта массой 1 г () и производят посев в 9  ФБР. Для посева (при необходимости - предполагаемом высоком содержании Е. sakazakii в продукте) меньших количеств продукта - 0,1 г, 0,01 г делают десятикратно убывающие разведения навески массой 10 г, и вносят по 1  (х 3) соответствующих разведений в 9  ФБР.

6.2.1. После термостатирования проб продукта в среде для первичного накопления 10  суспензии (1  - при первичном засеве 1 г или 1 )) пересевают в 90  (9 ) жидких селективных сред для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae по ГОСТ 30519-97 - среду Кесслера с глюкозой, или глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью, или бульон Мак-Конки. Посевы термостатируют при температуре ()°С в течение () ч.

6.2.2. Из посевов после термостатирования, независимо от наличия или отсутствия признаков роста, делают пересев штрихом на поверхность чашек Петри с одной из агаризованных дифференциально-диагностических сред по п. 4.3., Допускается проводить пересев петлей штрихом. Чашки со средами предварительно подсушивают.

Посевы термостатируют при температуре ()°С в течение 24 ч.

6.2.3. При отсутствии роста на чашках с дифференциально-диагностическими средами типа агара Эндо или агара желчного фиолетово-красного анализ прекращают и дают заключение об отсутствии E.sakazakii в исследованной пробе.

6.3. При обнаружении на чашках лактозоположительных колоний дальнейшему изучению подвергают все обнаруженные варианты, для чего отбирают по 3 - 5 колоний каждого типа для их дальнейшего изучения.

6.4. Отобранные для исследования 3-5 характерных колоний пересевают на поверхность триптон-соевого агара с дрожжевым экстрактом по п. 4.3. и термостатируют при температуре 25°С в течение 72 часов. В качестве положительного контроля используют референс-штамм Е. sakazakii, типичный по фенотипическим свойствам.

6.5. Культуры, растущие на триптон-соевом агаре с образованием желтого или желто-коричневого пигмента, подвергают дальнейшему изучению для подтверждения принадлежности к Enterobacter sakazakii.

7. Подтверждение принадлежности выделенных культур к Enterobacter sakazakii

7.1. Подтверждение принадлежности выделенных культур проводят с применением тест-систем для биохимической идентификации API 20E, Rapid 20E, ID 32E.

7.2. К бактериям Enterobacter sakazakii относят культуры, имеющие характерные признаки роста на дифференциально-диагностических средах, при микроскопии по Граму окрашенные отрицательно, подвижные, оксидазоотрицательные, соответствующие комплексу признаков, указанных в таблице 2, имеющие желтый пигмент, не ферментирующие сорбит и не разжижающие желатину. Бактерии E.sakazakii обладают -глюкозидазной активностью.

8. Учет результатов

8.1. Результаты оценивают по каждой исследованной пробе отдельно.

8.2. При получении положительного результата подтверждающего анализа дают заключение о выявлении Е. sakazakii в исследованной навеске (объеме) продукта.

При получении отрицательного результата дают заключение об отсутствии Е. sakazakii в исследованной навеске (объеме) продукта.

8.3. Учет результатов при количественном определении.

Результат оценивают по каждой исследованной пробе продукта отдельно. Регистрируют число положительных результатов в колбах и пробирках с посевами трех последовательно убывающих масс (объемов) продукта, в которых подтверждено наличие бактерий Е. sakazakii при пересеве на твердые питательные среды и последующей идентификации. В зависимости от получаемой комбинации положительных и отрицательных результатов для каждого значения массы (объема) продукта составляют трехзначное число (индекс), по которому, используя таблицу 1, приведенную в Приложении 1, находят наиболее вероятное число (НВЧ) бактерий Е. sakazakii, соответствующее их содержанию в 1 г () продукта.

Для окончательного определения НВЧ бактерий Е. sakazakii в анализируемом образце учитывают значение первой выбранной для расчета индекса НВЧ массы (объема) продукта с подтвержденным наличием Е. sakazakii. Так, в случае, если расчет ведется от посева массы (объема) 100 г () (х 3) продукта, количество Е. sakazakii в 1 г () образца рассчитывается путем деления числа НВЧ, взятого из таблицы соответственно установленному индексу, на 100. В случае, когда в качестве первого значения для расчета выбрана масса (объем) 10 г (х 3), количество Е. sakazakii в 1 г () образца рассчитывается путем деления числа НВЧ из таблицы на 10.

Пример: Бактерии Е. sakazakii обнаружены в трех повторностях при посеве 100 г, в трех повторностях при посеве 10 г и в одной - при посеве 1 г.

"Пример выявления бактерии Е. sakazakii"

Результат по числу секторов с подтвержденным ростом бактерий Е. sakazakii из трех выбранных масс записывается как индекс 3:3:1, что соответствует НВЧ, равному 46 (таблица 1 Приложение 1). Соответственно, наиболее вероятное число бактерий Е. sakazakii составляет 0,46 КОЕ в 1 г продукта.

Если значение НВЧ по таблице 1 составляет величину более чем 110 КОЕ (индекс 3:3:3), исследование целесообразно повторить, используя более высокие разведения образца, в которых исходная концентрация продукта будет в 10 или 100 раз ниже, чем в первоначально выбранном значении.

9. Требования безопасности

Исследования пищевых продуктов на наличие Enterobacter sakazakii проводят в соответствии с СанПиН 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами".

10. Нормативные ссылки

10.1. ГОСТ 30519-97 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий семейства Enterobacteriaceae".

10.2. ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) "Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований".

10.3. ГОСТ 26668-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических исследований".

10.4. ГОСТ 26669-85 "Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов".

10.5. ГОСТ 26670-91 "Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов".

10.6. ГОСТ 10444.1-84 "Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов, питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе".

10.7. СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов".

10.8. СанПиН 1.2.731-99 "Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности и гельминтами".

10.9. МУК 4.2.577-96 "Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов".

Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко