Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 52690-2006 "Продукты пищевые. Вольтамперометрический метод определения массовой концентрации витамина С" (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 декабря 2006 г. N 461-ст)

5.1 При соблюдении всех регламентируемых настоящим стандартом условий показатели точности метода и результатов измерений массовой концентрации витамина С в пробах в указанном диапазоне измеряемых концентраций при доверительной вероятности Р = 0,95 должны соответствовать значениям, приведенным в таблице 2.

Таблица 2 - Диапазон измерения массовой концентрации витамина С и значения показателей точности метода и результатов измерений

5.2 Результаты измерений массовой концентрации витамина С в контрольных пробах продуктов X, мг/кг или , полученные в соответствии с настоящим стандартом, могут отклоняться от результатов измерений не более:

0,03Х по ГОСТ 24556;

0,05Х по ГОСТ 30627.2.

7.1 Средства измерений и вспомогательное оборудование

7.2 Посуда

7.3 Реактивы и материалы

8.1 Отбор проб

Отбор проб продуктов для определения массовой концентрации витамина С проводят согласно национальному стандарту или другому документу, утвержденному в установленном порядке, регламентирующему отбор проб конкретного продукта.

Пробы продуктов хранят под темным колпаком и анализируют сразу после пробоподготовки в течение дня, так как витамин С со временем в растворе разлагается.

8.2 Подготовка приборов и электродов к работе

Подготовку и проверку работы средств измерений проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации и техническому описанию соответствующего прибора.

Устанавливают режим работы приборов в соответствии с таблицей 3.

Таблица 3 - Параметры измерений аналитических сигналов витамина С вольтамперометрическим методом

8.3 Подготовка и проверка лабораторной посуды

Лабораторную стеклянную посуду, сменные наконечники дозаторов, пипетки протирают фильтром с двууглекислым натрием, многократно промывают дистиллированной водой.

Проверку стаканчиков для анализа на чистоту проводят путем регистрации вольтамперограмм раствора фонового электролита по 10.1 после многократного ополаскивания их дистиллированной водой и затем раствором фонового электролита.

Оптимальными по чистоте являются реактивы и посуда, когда регистрируются аналитические сигналы витамина С (аскорбиновая кислота) в растворе фонового электролита по высоте равные или близкие к нулю.

8.4 Приготовление и проверка работы индикаторного электрода и электрода сравнения

8.5 Приготовление растворов

9.1 Подготовка проб компотов, соковой продукции (соков, нектаров, морсов и сокосодержащих напитков)

В мерную колбу вместимостью 100,0  вносят навеску анализируемой пробы в соответствии со значениями, приведенными в таблице 1. Доводят объем до метки раствором фонового электролита, выдерживают 20 - 30 мин и отфильтровывают полученный раствор через двойной бумажный фильтр. Фильтрат является подготовленной пробой, из которого берется аликвота (см. таблицу 5) для ВА измерения.

9.2 Подготовка проб свежих фруктов и овощей

В фарфоровую ступку помещают навеску пробы массой 5 - 10 г, взятую с точностью до 0,001 г, измельчают фарфоровым пестиком, после чего количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100,0 , смывая со стенок ступки и пестика остатки измельченной пробы раствором соляной кислоты молярной концентрации 0,05 , доводят объем колбы до метки раствором соляной кислоты молярной концентрации 0,05 , выдерживают 20 - 30 мин и отфильтровывают полученный раствор через двойной бумажный фильтр. Фильтрат является подготовленной пробой, из которого берется аликвота (см. таблицу 5) для ВА измерения.

9.3 Подготовка проб овощных, фруктовых и фруктово-молочных пюре

В мерную колбу вместимостью 100,0  вносят навеску анализируемой пробы массой 5 - 10 г, взятую с точностью до 0,001 г, добавляют 30  раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,1  и 1 - 2 г кристаллов хлорида калия, перемешивают, доводят объем до метки бидистиллированной водой, выдерживают 20 - 30 мин и отфильтровывают полученный раствор через двойной бумажный фильтр. Фильтрат является подготовленной пробой, из которого берется аликвота (см. таблицу 5) для ВА измерения.

9.4 Подготовка проб сухих молочных смесей

В мерную колбу вместимостью 100,0  вносят навеску анализируемой пробы массой 0,2 - 2,0 г, взятую с точностью до 0,001 г, добавляют 30 - 50  раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,05 , перемешивают до полного растворения смеси. Затем добавляют в колбу 1 - 2 г кристаллов хлорида калия и доводят объем колбы до метки раствором соляной кислоты молярной концентрации 0,05 . Содержимое колбы тщательно перемешивают и оставляют на 20 - 30 мин, затем отфильтровывают полученный раствор через бумажный фильтр. Фильтрат является подготовленной пробой, из которого берется аликвота (см. таблицу 5) для ВА измерения.

9.5 Подготовка проб жидких молочных смесей

В мерную колбу вместимостью 100,0  вносят навеску пробы массой 5 - 50 г жидкой молочной смеси, взятой с точностью до 0,001 г, добавляют 1 - 2 г кристаллов хлористого калия и доводят объем колбы до метки раствором соляной кислоты молярной концентрации 0,1 . Содержимое колбы тщательно перемешивают и оставляют на 20 - 30 мин, затем отфильтровывают полученный раствор через бумажный фильтр. Фильтрат является подготовленной пробой, из которого берется аликвота (см. таблицу 5) для ВА измерения.

9.6 Подготовка проб сухих крупяных смесей для детского питания

В мерную колбу вместимостью 100,0  вносят навеску сухой крупяной смеси массой 0,1 - 1,0 г, взятой с точностью до 0,001 г, предварительно измельченной в фарфоровой ступке, добавляют 10  раствора соляной кислоты молярной концентрации 0,1 , выдерживают 20 - 30 мин, периодически перемешивая. Содержимое колбы доводят до метки бидистиллированной водой, тщательно перемешивают и отфильтровывают полученный раствор через двойной бумажный фильтр. Фильтрат является подготовленной пробой, из которого берется аликвота (см. таблицу 5) для ВА измерения.

9.7 При анализе проб пищевых продуктов "холостую" пробу делать не обязательно, так как присутствие витамина С ни в реактивах, ни в воде не обнаружено.

10.1 Проверка электрохимической ячейки

Проверку стаканчиков, фонового электролита и электродов на чистоту проводят путем регистрации вольтамперограмм в данной электрохимической ячейке с фоновым электролитом после многократного ополаскивания стаканчиков бидистиллированной водой и фоновым электролитом.

Программу для работы вольтамперометрических анализаторов или режим работы полярографов задают согласно таблице 3. Стаканчики в электрохимических ячейках заполняют фоновым электролитом (10,0  раствора хлорида калия молярной концентрации 0,1 , подкисленного соляной кислотой концентрации 0,1  до рН 3-4). Регистрируют вольтамперограммы раствора фонового электролита, проводя электролиз в течение 30 с.

Оптимальными считаются такие качества реактивов и чистота посуды, когда получаются аналитические сигналы вещества в фоновом электролите, равные или близкие к нулю.

10.2 Проверка работы индикаторного СУЭ по контрольным пробам витамина С

В стаканчик с раствором фонового электролита объемом 10,0  () вносят точно отмеренный дозатором или пипеткой объем () AC витамина С (). Получают контрольную пробу, содержащую аттестованную концентрацию витамина С. Проводят электронакопление и регистрацию вольтамперограмм контрольной пробы, при условиях, рекомендованных в таблице 3.

В этот же раствор повторно делают такую же добавку АС витамина С, регистрируют вольтамперограммы контрольной пробы с добавкой АС витамина С при тех же условиях измерений () и оценивают содержание витамина С в контрольной пробе .

Расчет массовой концентрации витамина С в контрольной пробе , , при использовании анализаторов проводится автоматически, а при использовании полярографов по формуле

, (1)

где - максимальный анодный ток витамина С на вольтамперограмме для контрольной пробы, единицы тока, мм;

- массовая концентрация АС витамина С, из которой при измерении делают добавку к пробе, ;

- объем добавки АС витамина С, ;

- максимальный анодный ток витамина С на вольтамперограмме для контрольной пробы с добавкой АС витамина С, единицы тока, мм;

- объем подготовленной контрольной пробы, .

Если полученное значение концентрации витамина С отличается от контрольного значения менее чем на 10%, то условия работы соответствуют нормальным и следует приступить к измерению подготовленной анализируемой пробы.

Если полученное значение концентрации витамина С () отличается от контрольного более чем на 10%, то эксперимент повторяют с другим стаканчиком, с чистым фоновым электролитом. Если и в этом случае расхождение результатов будет значимым, то индикаторный электрод готовят заново.

10.3 ВА измерения при определении массовой концентрации витамина С в пробе

В кварцевый стаканчик, содержащий 8 - 10  фонового электролита по 8.5.3, вносят аликвоту () подготовленной по 9.1 - 9.6 пробы анализируемого объекта. Объем аликвоты рекомендован в таблице 5. Стаканчик с пробой помещают в электрохимическую ячейку.

Проводят электронакопление и регистрацию вольтамперограмм анализируемой пробы, установив параметры измерений аналитических сигналов в соответствии с таблицей 3. Измеряют аналитические сигналы витамина С в пробе ().

В стаканчик с анализируемым раствором пробы с помощью пипетки или дозатора вносят добавку АС () витамина С в таком объеме (), чтобы высота пика витамина С на вольтамперной кривой увеличилась примерно в два раза по сравнению с первоначальной.

Добавку АС вносят в малом объеме (не более 0,10 ), чтобы предотвратить изменение объема анализируемой пробы. Рекомендуемые добавки АС известной концентрации витамина С приведены в таблице 5.

Таблица 5 - Рекомендуемые объемы аликвоты пробы, концентрации и объемы добавок АС витамина С при регистрации вольтамперограмм при анализе проб

Проводят электронакопление и регистрацию вольтамперограмм пробы с введенной добавкой АС витамина С в тех же условиях. Измеряют аналитические сигналы (высоты пиков) витамина С в пробе с добавкой АС витамина С ().

Общий вид вольтамперограмм, полученных при ВА измерениях фонового электролита, пробы и пробы с добавкой АС витамина С, приведен в приложении А.

Операции для каждой из параллельных анализируемых проб проводят в одинаковых условиях.

11.1 Для определяемого вещества рассчитывают среднеарифметическое () не менее чем из двух значений воспроизводимых аналитических сигналов, полученных при регистрации вольтамперограмм пробы.

Такой же расчет проводят и для вольтамперограмм при регистрации анализируемой пробы с добавкой АС витамина С. Получают значение .

11.2 Массовую концентрацию X, мг/кг или , витамина С в анализируемой пробе вычисляют по формуле

, (2)

где - максимальный анодный ток витамина С на вольтамперограмме для анализируемой пробы, единицы тока, мм;

- массовая концентрация АС витамина С, из которой делается добавка к пробе, ;

- объем добавки АС витамина С, ;

- объем подготовленной по 9.1 - 9.6 пробы, равный 100 ;

- максимальный анодный ток витамина С на вольтамперограмме для пробы с добавкой АС витамина С, единицы тока, мм;

m - навеска (объем) пробы, взятой для анализа, г (или );

- объем взятой для измерения аликвоты, .

11.3 Вычисления проводят по 11.2 для каждой из двух параллельных анализируемых проб; получают соответственно значения и .

11.4 Проверяют приемлемость полученных результатов параллельных определений. Расхождение между полученными результатами двух параллельных определений анализируемой пробы не должно превышать предела повторяемости (сходимости), приведенного в таблице 2.

Результаты считают приемлемыми при выполнении условия

. (3)

Абсолютное значение предела повторяемости (сходимости) рассчитывают для среднеарифметического значения результатов двух параллельных определений по формулам:

, (4)

r = 0,20X. (5)

При выполнении условия (3) значение Х принимается за окончательный результат измерения.

11.5 Если условие (3) не выполняется, то проводят повторные измерения (см. 8.2 - 8.4) и проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (сходимости), в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).

Числовое значение результата измерения (анализа) должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и абсолютное значение предела повторяемости (сходимости) результатов параллельных определений, содержащего не более двух значащих цифр.

13.1 Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях, m=2), проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подпункт 5.3.2.1) по отношению к пределу воспроизводимости, приведенному в таблице 2, или к критической разности для двух среднеарифметических результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подпункт 5.3.2.2).

13.2 Разрешение противоречий между результатами двух лабораторий проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.3).

14.1 Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории предусматривает:

- контроль исполнителем процедуры выполнения измерений (на основе оценки погрешности при реализации отдельно взятой контрольной процедуры);

- контроль стабильности результатов измерений (на основе контроля стабильности среднего квадратического отклонения промежуточной (внутрилабораторной) прецизионности, погрешности).

14.2 Контроль качества результатов измерений, полученных в конкретной лаборатории в условиях промежуточной (внутрилабораторной) прецизионности, проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6.

14.3 Процедуры и периодичность контроля точности (контроля стабильности) получаемых результатов измерений в пределах лаборатории проводят с учетом требований раздела 6 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

14.4 Периодичность контроля исполнителем процедуры выполнения измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.

15.1 Условия безопасного проведения работ

При выполнении аналитических измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами и с инертными газами.

Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

15.2 Требования к квалификации операторов

Выполнение измерений проводит лаборант или химик-аналитик, владеющий техникой вольтамперометрического анализа и изучивший инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.