Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54085-2010 "Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Shigella" (утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 745-ст) (отменен)

Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 54085-2010
"Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Shigella"
(утв. приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 745-ст)

Food products. Method for detection of Shigella species bacteria

Дата введения - 1 января 2012 г.

Введен впервые

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 27 июня 2013 г. N 231-ст настоящий ГОСТ отменен с 15 февраля 2015 г. в связи с введением в действие ГОСТ 32010-2013

1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает метод выявления в определенной массе или объеме пищевого продукта бактерий рода Shigella.

2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ Р 54004-2010 Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний

ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 6691-77 Реактивы. Карбамид. Технические условия

ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия

ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, а также по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения

В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бактерии рода Shigella: Грамотрицательные, факультативно-анаэробные бактерии, которые на агаризованных селективно-диагностических средах образуют типичные колонии. Описание и методы определения биохимических и серологических характеристик этих микроорганизмов приведены в настоящем стандарте.

3.2 выявление бактерий рода Shigella: Определение присутствия или отсутствия бактерий рода Shigella в определенной массе или объеме пищевого продукта в соответствии с настоящим стандартом.

4 Сущность метода

4.1 Общие положения

Метод выявления бактерий рода Shigella в определенной массе или объеме пищевого продукта состоит из следующих этапов: высев определенного количества продукта в жидкую неселективную среду, инкубирование посевов, последующее выявление в этих посевах бактерий, способных развиваться в жидкой селективной среде, образующих типичные колонии на агаризованных селективно-диагностических средах, имеющих типичные для бактерий рода Shigella биохимические и серологические характеристики.

4.2 Предварительное обогащение в неселективной жидкой среде

Бактерии рода Shigella могут присутствовать в пищевом продукте в небольшом количестве вместе с большим количеством других бактерий из семейства Enterobacteriaceae или других семейств. Поэтому предварительное обогащение необходимо для выявления небольшого числа клеток бактерий рода Shigella или сублетально поврежденных клеток бактерий рода Shigella.

Для предварительного неселективного обогащения используют забуференную пептонную воду, для некоторых пищевых продуктов используют другое предварительное обогащение по 8.1.2.

Забуференную пептонную воду инокулируют при комнатной температуре пробой пищевого продукта для анализа, затем посевы инкубируют при температуре (371)°С в течение (182) ч.

Для большего эффекта перед внесением анализируемой пробы продукта забуференную пептонную воду нагревают до температуры (371)°С, то есть до температуры инкубирования посевов.

4.3 Обогащение в селективной жидкой среде

Бульон для бактерий рода Shigella сначала инокулируют культурой, полученной по 4.2, а затем инкубируют при температуре (371)°С в течение (242) ч.

4.4 Выделение чистой культуры

Культуры, полученные по 4.3, пересевают на две агаризованные селективно-диагностические среды:

- ксилоза лизин дезоксихолатный агар (XLD агар) и на одну из агаризованных сред - гектоеновый энтероагар, сальмонелла-шигелла агар, висмут-сульфит агар, среду Плоскирева, среду Эндо, среду Левина или дезоксихолатный цитратный агар.

Посевы на агаризованных средах инкубируют при температуре (371)°С и по окончании (242) ч посевы просматривают.

Арбитражной средой является ксилоза лизин дезоксихолатный агар (XLD агар).

4.5 Проведение идентификации

По биохимическим и серологическим тестам подтверждают принадлежность бактерий из колоний, выросших на чашках Петри по 4.4, к бактериям рода Shigella.

5 Питательные среды, растворы реактивов и сыворотки

5.1 Общие положения

Химические вещества, используемые для приготовления питательных сред и реактивов, должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а., а вода должна быть дистиллированной.

5.2 Питательные среды, растворы реактивов

5.2.1 Среда для неселективного предварительного обогащения: вода пептонная забуференная - приложение А (А.1).

5.2.2 Среда обогатительная селективная: бульон для бактерий рода Shigella - приложение А (А.2).

5.2.3 Среды агаризованные селективно-диагностические

5.2.3.1 Первая среда: агар ксилоза лизин дезоксихолатный (XLD агар) - приложение А (А.3.1).

5.2.3.2 Вторая среда - приложение А (А.3.2).

5.2.4 Агар питательный или ГРМ-агар - приложение А (А.4).

5.2.5 Агар мясо-пептонный - приложение А (А.5).

5.2.6 Бульон мясо-пептонный с глюкозой - приложение А (А.6).

5.2.7 Среды с углеводами (Среды Гисса) - приложение А (А.7).

5.2.8 Агар трехсахарный железистый (TSI агар) или агар Клиглера, или агар Олькеницкого - приложение А (А.8).

5.2.9 Агар с мочевиной (Кристенсена) - приложение А (А.9).

5.2.10 Среда для определения L-лизин декарбоксилазы - приложение А (А.10).

5.2.11 Среда для Фогес-Проскауера (VP) реакции - приложение А (А.11).

5.2.12 Реактив для Фогес-Проскауера (VP) реакции - приложение А (А.12).

5.2.13 Среда Козера - приложение А (А.13).

5.2.14 Среда Симмонса - приложение А (А.14).

5.2.15 Агар дезоксихолатный цитратный - приложение А (А.15).

5.2.16 Энтероагар гектоеновый - приложение А (А.16).

5.2.17 Агар питательный полужидкий - приложение А (А.17).

5.2.18 Агар мясо-пептонный полужидкий - приложение А (А.18).

5.2.19 Раствор физиологический - приложение А (А.19).

5.3 Сыворотки

5.3.1 Сыворотки диагностические шигеллезные агглютинирующие адсорбированные поливалентные сухие к Shigella dysenteriae 1, 2; 3-7; 8-12.

5.3.2 Сыворотки диагностические шигеллезные агглютинирующие адсорбированные поливалентные сухие к Shigella boydii 1, 2, 4, 5, 7, 9, 12; 3, 6, 8, 10, 11; 13, 14, 15.

5.3.3 Сыворотки диагностические шигеллезные агглютинирующие адсорбированные поливалентные сухие к Shigella flexneri I-V.

5.3.4 Сыворотки диагностические шигеллезные агглютинирующие адсорбированные поливалентные сухие к Shigella flexneri I-VI и Shigella sonnei.

5.3.5 Для идентификации бактерий рода Shigella используют постановку реакции агглютинации с диагностическими шигеллезными агглютинирующими адсорбированными поливалентными сыворотками.

Адсорбированные сыворотки содержат антитела, которые агглютинируют взвеси культур шигелл, содержащие соответствующие антигены.

Каждое опытное определение должно быть гарантированным, то есть используемая сыворотка должна быть пригодной для агглютинации бактерий рода Shigella.

Качество сывороток проверяется в реакции с контрольными штаммами бактерий рода Shigella.

5.3.6 Сухие агглютинирующие адсорбированные сыворотки промышленного производства готовят перед употреблением в соответствии с рекомендациями, указанными в прилагаемых к ним инструкциях.

6 Аппаратура, посуда, материалы, реактивы

Приемлемой альтернативой посуде многоразового применения является одноразовая посуда, если она отвечает соответствующим требованиям.

6.1 Оборудование лабораторное для микробиологических исследований - по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 10444.1.

6.2 Аппарат для сухой стерилизации (стерилизационный сушильный шкаф) или влажной стерилизации (автоклав), с регулирующими устройствами для поддержания заданной температуры, с допустимой погрешностью не более 1°С.

6.3 Термостат, поддерживающий температуру (371)°С.

6.4 Баня водяная, поддерживающая заданную температуру от 44°С до 47°С с погрешностью 0,5°С.

6.5 Прибор для мембранной фильтрации растворов.

6.6 Весы лабораторные для взвешивания реактивов с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания 0,01 мг и 10 мг.

6.7 Пробирки и колбы разной вместимости по ГОСТ 25336. Допускается использование флаконов или бутылок с нетоксичными металлическими или пластиковыми завинчивающимися крышками.

6.8 Микроскоп биологический, обеспечивающий просмотр в проходящем свете, с увеличением 900-1000х.

6.9 Петля бактериологическая, с размером диаметра петли около 3 мм.

6.10 рН-метр с диапазоном измерений рН от 2 до 18, погрешность измерений 0,01 ед. рН при температуре 20°С - 25°С.

6.11 Стекла предметные по ГОСТ 9284.

6.12 Стекла покровные по ГОСТ 6672.

6.13 Пипетки градуированные или автоматические, вместимостью от 1 до 10 по ГОСТ 29228.

6.14 Чашки Петри нормального размера (диаметр 100 мм) и/или большого размера (диаметр 150 мм) по ГОСТ 25336.

6.15 Натрий дезоксихолат.

6.16 Аммоний железо III цитрат.

6.17 Карбамид (мочевина) по ГОСТ 6691.

6.18 Контрольные штаммы бактерий рода Shigella.

6.19 Креатина моногидрат.

6.20 Ксилоза.

6.21 L-лизин моногидрохлорид.

6.22 Экстракт мясной.

6.23 Настой сердца (порошок).

6.24 Новобиоцин натриевая соль.

6.25 Пептический перевар животных тканей.

6.26 Протеозопептон.

6.27 Твин-80.

6.28 Феноловый красный.

6.29 Гидролизат казеина ферментативный.

6.30 Железа III цитрата тригидрат.

6.31 Цитрат натрия.

6.32 Спирт этиловый пищевой 96%-ный по ГОСТ Р 51652.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов по качеству не хуже указанных в разделе 6.

7 Отбор и подготовка проб

Отбор и подготовка проб - по ГОСТ Р 54004, ГОСТ 26669.

Для анализа отбирают лабораторную пробу, не поврежденную и не измененную по качеству в ходе транспортировки или хранения.

9 Обработка результатов

9.1 Результаты оформляют по каждой лабораторной пробе отдельно.

9.2 Результаты выявления бактерий рода Shigella в определенной массе или объеме продукта записывают: "Бактерии рода Shigella обнаружены (не обнаружены) в Х г () пищевого продукта".

X - масса (объем) анализируемой пробы пищевого продукта, в которой выявляли бактерии рода Shigella, г ().

10 Протокол испытания

Протокол испытания должен включать следующее:

- используемый метод отбора проб;

- использование каких-нибудь отклонений в методе обогащения или инкубации;

- все условия испытания, не включенные в настоящий стандарт, а также причины, которые могут влиять на результаты;

- полученные результаты.

11 Требования безопасности

Требования безопасности выполнения работ и квалификации оператора - по ГОСТ Р ИСО 7218, [1].

Библиография

[1] СП 1.3.2322-2008 Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней