Методические указания МУК 4.1.2908-11 "Определение остаточных количеств Этаметсульфурон-метила в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 12 июля 2011 г.)

Методические указания МУК 4.1.2908-11
"Определение остаточных количеств Этаметсульфурон-метила в семенах и масле рапса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ 12 июля 2011 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Свидетельство о метрологической аттестации N 0091.05.05.11 от 11.05.2011.

Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения уровня остаточных количеств Этаметсульфурон-метила в семенах и масле рапса в диапазоне 0,02-0,2 мг/кг.

Название действующего вещества по ИЮПАК: Метил-2-[(4-этокси-6-метиламино-1,3,5-триазин-2-ил)карбамоилсульфамоил]бе нзоат.

Структурная формула:

Молекулярная масса: 410,4.

Эмпирическая формула: .

Агрегатное состояние: порошок.

Цвет, запах: белый, без запаха.

Давление паров: мПа (при 25°С).

Коэффициент распределения октанол-вода: logP 0,89(pH 7), 1,558 (рН 5).

Температура плавления: 194°С.

Растворимость в воде (, 25°С): 1,7 (рН 5), 50 (рН 7), 410 (рН 9).

Растворимость в органических растворителях (, 20°С): ацетон - 1,6; ацетонитрил - 0,83, дихлорметан - 3,9; метанол - 0,35; этанол - 0,17; этилацетат - 0,68.

Константа диссоциации (рКа) (при 25°С): 4,6 (слабая кислота).

Стабилен при рН 7 и рН 9.

Подвергается гидролизу, составляет при рН 5 - 41 день.

Краткая токсикологическая характеристика: Этаметсульфурон-метил относится к веществам мало опасным по острой пероральной ( для крыс более 5 000 мг/кг) и дермальной токсичности ( для крыс более 2 000 мг/кг), но к умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности ( для крыс (4 ч) более 5 700 ). Не раздражает кожу и слабо раздражает слизистую оболочку глаз. Онкогенных, мутагенных, тератогенных свойств Этаметсульфурон-метила не выявлено.

Область применения: Этаметсульфурон-метил - послевсходовый гербицид системного действия, проникающий преимущественно через листья растений и ингибирующий фермент ацетолактатсинтазу. Подавляет развитие однолетних и многолетних двудольных сорняков в посевах рапса с нормой расхода 15-30 г д. в./га.

В России проходит регистрационные испытания в качестве гербицида в посевах ярового и озимого рапса с нормой расхода 25 г/га.

В России гигиенические нормативы не установлены.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительные интервалы среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 1

Метрологические параметры для Этаметсульфурон-метила

Анализируемый объект	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Показатель точности (граница относительной погрешности), , % Р = 0,95	Стандартное отклонение повторяемости, , %	Предел повторяемости, r, %	Предел воспроизводимости, R, %
Семена рапса	0,02-0,1 вкл.	50	0,91	2,53	3,54
Семена рапса	0,1-0,2 вкл.	25	2,91	8,09	11,33
Масло рапса	0,02-0,1 вкл.	50	1,44	4,01	5,62
Масло рапса	0,1-0,2 вкл.	25	1,53	4,25	5,95

Таблица 2

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для Этаметсульфурон-метила

Анализируемый объект	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Полнота извлечения вещества, %	Стандартное отклонение, S, %	Доверительный интервал среднего результата, , %
Семена рапса	0,02	0,02-0,2	77,01	2,07	0,75
Масло рапса	0,02	0,02-0,2	74,96	2,25	0,79

2. Метод измерений

Метод основан на определении Этаметсульфурон-метила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на концентрирующих патронах Диапак Амин.

Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.

В предлагаемых условиях анализа метод специфичен. Специфичность обеспечивается подбором состава подвижной фазы и выбором колонок различной полярности.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерения

Весы аналитические "OHAUS", ЕР 114 с наибольшим пределом взвешивания до 110 г и дискретностью 0,0001 г, класс точности по ГОСТ 24104-1 - специальный (I)
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания до 600 г и пределом допустимой погрешности 0,038 г "ACCULAB" V600, соответствуют классу точности по ГОСТ 24104-1 - средний (III)
Колбы мерные на 25, 50, 100, 500 и 1 000	ГОСТ 1770-74
Микрошприц для жидкостной хроматографии "Hamilton, 1700", объем 100 , фирма "SUPELCO", кат. N 26281
Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5,0 рН-метр/милливольтметр рН-150 0...14 рН; 1 999 мВ, номер госрегистрации N 10663	ГОСТ 29227-91
Хроматограф жидкостный Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации N 15311-02
Цилиндры мерные на 10, 25 и 50	ГОСТ 1770-74

Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Этаметсульфурон-метил, СAS 97780-06-8,
аналитический стандарт с содержанием
действующего вещества не менее 98,9%,
фирма Dr. Ehreustorfer GmbH, аккредитованная
по ИСО 9001:2000
Ацетон, осч	ТУ 6-09-3513-86
Ацетонитрил, осч, УФ-200 нм	ТУ 6-09-2167-84
Аммоний уксусно-кислый (аммония ацетат)
безводный, (98%, СAS 631-61-8), фирма
"Acros Organics"
Вода дистиллированная и (или) бидистиллированная (вода дистиллированная, перегнанная повторно в стеклянной емкости)	ГОСТ 6709-72
Гелий, очищенный марки "А"	ТУ 51-940-80
n-Гексан, хч	ТУ 6-09-3818-89
Калий марганцовокислый, чда	ГОСТ 20490-75
Калий фосфорнокислый двузамещённый, 3-х водный, чда	ГОСТ 2493-75
Кальций хлористый, ч	ТУ 6-09-4711-81
Кислота уксусная, ледяная, хч	ГОСТ 61-75
Концентрирующие патроны Диапак Амин (0,6 г), фирма "БиоХимМак СТ"	ТУ 4215-002-05451931-94
Метилен хлористый, хч	ТУ 6-09-2662-77
Натрий сернокислый, безводный, хч	ГОСТ 4166-76
Натрий углекислый, кислый, хч	ГОСТ 4201-79
Натрий хлористый, хч	ГОСТ 4233-77
Натрия гидроокись, хч	ГОСТ 4328-77
Спирт метиловый (метанол), хч	ГОСТ 6995
Этилацетат, чда	ГОСТ 22300-76

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Алонж прямой с отводом для вакуума (АО-14/23) для работы с концентрирующими патронами Диапак Амин	ГОСТ 25336-82
Аппарат для встряхивания проб "SKLO UNION TYP LT1"
Банки с крышками для экстракции на 250 , полипропилен, кат. N 3120-0250, фирма "NALGENE"
Ванна ультразвуковая "UNITRA" UNIMA OLSZTYN UM-4
Вата медицинская гигроскопическая хлопковая нестерильная	ГОСТ 5556-81
Воронки делительные на 250 и 500	ГОСТ 25336-82
Воронки лабораторные, стеклянные	ГОСТ 25336-82
Испаритель ротационный Rota vapor R110 Buchi с водяной баней В-480, фирма "Buchi"
Кислота соляная, хч	ГОСТ 3118-77
Колбы конические плоскодонные на 100, 250 и 1 000	ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные со шлифом (концентраторы) на 100, 250, 1 000 и 4 000 ТС	ТУ 92-891.029-91
Колонка хроматографическая стальная, длиной 250 мм, с внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetry Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма "Waters"
Насос диафрагменный FT.19, фирма "KNF Neu Laboport"
Предколонка хроматографическая стальная, Symmetry С 8, длиной 20,0 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters"
Стаканы стеклянные, термостойкие объемом 100-500	ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с круглодонной колбой объемом 4 000 и приемной конической колбой объемом 1 000
Фильтры бумажные, "красная лента"	ТУ-6-09-1678-86
Фильтры для очистки растворителей, диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма "Waters"
Шприц инъекционный однократного применения объемом 10	ГОСТ 24861-91 (ИСО 7886-84)

Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или специальное химическое образование, опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения анализа, освоившие метод анализа в процессе тренировки и уложившиеся в нормативы контроля при проведении процедуры контроля погрешности анализа.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (205)°С, относительной влажности не более 80% и нормальном атмосферном давлении;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению определений

Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка растворителей (при необходимости), приготовление растворов для проведения анализа, кондиционирование хроматографической колонки, подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на концентрирующих патронах Диапак Амин, установление градуировочной характеристики.

7.1. Подготовка органических растворителей

7.1.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 . Выдерживают его над осушителем в течение 5-6 ч. Затем ацетонитрил сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 аппарата для перегонки растворителей. Ацетонитрил перегоняют при температуре 81,5°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 81,5°С, отбрасывают.

7.1.2. Очистка ацетона

Ацетон, содержащий воду, предварительно осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 . Выдерживают его над осушителем в течение 5-6 ч. Затем ацетон сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 аппарата для перегонки растворителей, прибавляют туда марганцовокислый калий из расчета 100 . Ацетон перегоняют при температуре 56,2°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 56,2°С, отбрасывают.

7.1.3. Очистка бидистиллированной воды

Дистиллят помещают в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 аппарата для перегонки растворителей, добавляют к нему марганцовокислый калий из расчета 1 и кипятят в течение 6 ч, а затем перегоняют.

Собирают фракции, отогнанные при температуре 100,0°С, а фракции, отогнанные при температуре выше и ниже 100,0°С отбрасывают.

7.1.4. Очистка этилацетата

Этилацетат промывают равным объемом 5% раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 . Выдерживают его над осушителем в течение 12-24 ч. Затем этилацетат сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 аппарата для перегонки растворителей. Этилацетат перегоняют при температуре 77,1°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 77,1°С, отбрасывают.

7.1.5. Очистка хлористого метилена

Хлористый метилен промывают равным объемом 5%-го раствора натрия углекислого (безводного), осушают, добавляя в него гранулированный безводный хлористый кальций из расчета не менее 100 . Выдерживают его над осушителем в течение 12-24 ч. Затем хлористый метилен сливают с осушителя в круглодонную колбу со шлифом объемом 4 000 аппарата для перегонки растворителей. Хлористый метилен перегоняют при температуре 40,0°С, а фракции, отогнанные при температуре ниже и выше 40,0°С, отбрасывают.

7.2. Приготовление растворов для проведения анализа

7.2.1. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ

Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанный ацетонитрил, 0,01 М водный раствор уксусной кислоты и спирт метиловый.

В плоскодонную колбу объемом 1 000 помещают 350 ацетонитрила, 50 метанола и 550 0,01 М водного раствора уксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин.

7.2.2. Приготовление рабочих растворов

7.2.2.1. Приготовление 0,01 М водного раствора уксусной кислоты.

В мерную колбу объемом 1 000 помещают 500 очищенной воды и 600 мг ледяной уксусной кислоты, перемешивают, доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Раствор используют для приготовления подвижной фазы. Раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.2.2. Приготовление 0,01 М водного раствора аммония уксуснокислого.

В мерную колбу объемом 1 000 переносят 700 мг аммония уксуснокислого, добавляют 500 очищенной воды и перемешивают до полного растворения соли. Доводят водой объем в колбе до метки и еще раз тщательно перемешивают. Раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.2.3. Приготовление 6 М раствора соляной кислоты.

Мерным цилиндром отбирают 246 концентрированной соляной кислоты и осторожно переносят в мерную колбу на 500 , куда предварительно наливают около 100 дистиллированной воды. Затем раствор перемешивают и после охлаждения доводят водой объем в колбе до метки (при приготовлении раствора соблюдать осторожность и работать под тягой). Раствор хранят не более 6 месяцев при комнатной температуре.

7.2.2.4. Приготовление 0,05 М раствора двузамещенного фосфорнокислого калия.

В мерную колбу на 500 переносят 5,7 г и 50 г NaCl, добавляют 200-300 бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения солей, проверяют рН полученного раствора. Если рН раствора менее 9, доводят его до указанного значения с помощью 1 М раствора гидроокиси натрия, контролируя рН. После достижения нужного значения рН объем доводят водой до метки. Раствор хранят не более 3 месяцев при комнатной температуре.

7.2.2.5. Приготовление раствора для разведения проб и приготовления стандартных растворов.

Мерным цилиндром отмеряют 15 ацетонитрила и помещают в плоскодонную колбу объемом 100 . Туда же помещают 85 0,01 М водного раствора аммония уксуснокислого. Смесь тщательно перемешивают и используют для приготовления стандартных растворов для хроматографирования и растворения проб перед хроматографированием. Раствор хранят не более 2 недель при комнатной температуре.

7.2.3. Приготовление градуированных растворов

7.2.3.1. Стандартный раствор N 1 с концентрацией Этаметсульфурон-метила 100,0 .

Взвешивают 10 мг Этаметсульфурон-метила в мерной колбе объемом 100 . Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом. Полученный стандартный раствор N 1 используется для приготовления стандартных растворов для хроматографического исследования для установления градуировочной зависимости. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 3 месяцев.

7.2.3.2. Стандартный раствор N 2 с концентрацией Этаметсульфурон-метила 10,0 .

Из стандартного раствора N 1 отбирают пипеткой 5 , помещают в мерную колбу объемом 50 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 2 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной зависимости. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.3. Стандартный раствор N 3 с концентрацией Этаметсульфурон-метила 1,0 .

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 10 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0,01 М раствором уксуснокислого аммония в соотношении 15:85. Стандартный раствор N 3 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.4. Стандартный раствор N 4 с концентрацией Этаметсульфурон-метила 0,5 .

Из стандартного раствора N 3 отбирают пипеткой 5 , помещают в мерную колбу объемом 10 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0,01 М раствором уксуснокислого аммония в соотношении 15:85. Стандартный раствор N 4 используется для приготовления стандартных растворов для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.5. Стандартный раствор N 5 с концентрацией Этаметсульфурон-метила 0,2 .

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 50 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0,01 М раствором уксусно-кислого аммония в соотношении 15:85. Стандартный раствор N 5 используется для приготовления стандартных растворов и для установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.6. Стандартный раствор N 6 с концентрацией Этаметсульфурон-метила 0,1 .

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 100 и доводят объем до метки смесью ацетонитрила с 0,01 М раствором уксуснокислого аммония в соотношении 15:85. Стандартный раствор N 6 используется для приготовления стандартных растворов для построения установления градуировочной характеристики. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.7. Стандартный раствор с концентрацией Этаметсульфурон-метила 1,0 (в ацетонитриле).

Из стандартного раствора N 2 отбирают пипеткой 1 , помещают в мерную колбу объемом 10 и доводят объем до метки ацетонитрилом. Стандартный раствор N 3 используется для изучения хроматографического поведения Этаметсульфурон-метила на концентрирующих патронах Диапак Амин. Стандартный раствор хранят в холодильнике не более 1 месяца.

7.2.3.8. Стандартные растворы Этаметсульфурон-метила в ацетоне с концентрацией 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 для внесения в образцы.

Из стандартного раствора N 2 методом последовательного разведения ацетоном готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5 и 0,25 и используют эти растворы для внесения в контрольные образцы. Растворы готовят непосредственно перед внесением в контрольные образцы.

7.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации Этаметсульфурон-метила в растворе (), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4 растворам для градуировки с концентрацией 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 .

В инжектор хроматографа вводят по 20 каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений.

7.4. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин для очистки экстракта и проверка хроматографического поведения Этаметсульфурон-метила на них

7.4.1. Подготовка концентрирующих патронов Диапак Амин для очистки экстракта

Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 .

Патрон Диапак Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 (используют как емкость для элюентов).

Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 этилацетата. Элюат отбрасывают.

Нельзя допускать высыхания поверхности патрона.

7.4.2. Проверка хроматографического поведения Этаметсульфурон-метила на концентрирующих патронах Диапак Амин

Из стандартного раствора Этаметсульфурон-метила в ацетонитриле, содержащего 1 , отбирают 1 , помещают в концентратор объемом 100 и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С. Сухой остаток растворяют в 5 этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 .

Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 этилацетата, затем 5 0,1%-й уксусной кислоты в этилацетате и 10 2%-й уксусной кислоты в этилацетате, наносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в концентратор объемом по 100 , упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

Сухой остаток каждой фракции растворяют в 2 смеси ацетонитрила с 0,01 М раствором уксуснокислого аммония в соотношении 15:85 и 20 пробы вводят в хроматограф.

Определяют фракции, содержащие Этаметсульфурон-метил, полноту смывания с патрона и необходимый объём элюента.

Изучение поведения Этаметсульфурон-метила на концентрирующих патронах Диапак Амин проводят каждый раз при отработке методики или поступлении новой партии концентрирующих патронов.

7.5. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии

Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 с предколонкой Symmetry C8 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 30°С и скорости потока подвижной фазы 1 3-4 ч.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", N 2051-79 от 21.08.79, а также в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ Р 53457-2009 "Масло рапсовое. ТУ" и ГОСТ Р 52062-2003 "Масла растительные. Правила приемки и методы отбора проб".

ГАРАНТ:

Приказом Росстандарта от 29 ноября 2012 г. N 1631-ст ГОСТ Р 53457-2009 отменен с 15 февраля 2015 г. Для добровольного применения в РФ с 1 июля 2013 г. введен в действие ГОСТ 31759-2012 "Масло рапсовое. Технические условия"

Отобранные пробы семян рапса подсушивают до стандартной влажности и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

Пробы масла рапса хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре 0-4°С.

9. Подготовка проб и выполнение измерений

9.1. Семена рапса

9.1.1. Экстракция

Образец измельченных семян рапса массой 10 г помещают в полипропиленовую банку для экстракции объемом 250 , прибавляют 50 этилацетата и помещают на 5 мин в ультразвуковую ванну. Экстракт декантируют в коническую колбу объемом 250 через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 этилацетата и помещая на 5 мин в ультразвуковую ванну. Экстракты объединяют в конической колбе объемом 250 , а затем фильтруют через фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 250 .

9.1.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Этаметсульфурон-метил экстрагируют из этилацетатного экстракта, полученного по п. 9.1.1, четырьмя порциями по 30 0,05 М щелочного буфера (рН 9), приготовленного по п. 7.2.2.4, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной нижний водный слой с небольшим количеством эмульсии объединяют в конической колбе объемом 250 . После четвертой экстракции верхний этилацетатный слой отбрасывают, а объединенный водный экстракт возвращают в делительную воронку и выдерживают 5 мин. Затем нижний водный слой переносят в чистую коническую колбу объемом 250 , а выделившийся верхний этилацетатный слой отбрасывают.

Водный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 и промывают 50 гексана, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Водный слой возвращают в делительную воронку и промывают двумя порциями хлористого метилена по 30 , каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена отбрасывают.

Водный остаток фильтруют через фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 , подкисляют 6 М соляной кислотой до рН 3 и переносят в делительную воронку объемом 250 . Этаметсульфурон-метил экстрагируют тремя порциями хлористого метилена объемом по 30 , каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний слой (хлористый метилен) объединяют в концентраторе объемом 250 , пропуская его через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин

Сухой остаток, полученный по п. 9.1.2, растворяют в 5 этилацетата, тщательно обмывая стенки концентратора, и вносят на предварительно кондиционированный патрон. Элюат отбрасывают. Исходный концентратор обмывают последовательно двумя порциями по 10 этилацетата и одной порцией объемом 5 0,1% уксусной кислоты в этилацетате и вносят на патрон, элюаты отбрасывают. Этаметсульфурон-метил элюируют 10 2% уксусной кислоты в этилацетате. Элюат собирают в концентратор объемом по 100 , упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

Сухой остаток растворяют в 2 смеси ацетонитрила с 0,01 М раствором уксуснокислого аммония в соотношении 15:85 и 20 пробы вводят в хроматограф.

9.2. Масло рапса

9.2.1. Экстракция и очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей

Из пробы рапсового масла отбирают в стакан навеску массой 10 г и переносят ее в делительную воронку объемом 250 двумя порциями гексана объемом по 30 . Этаметсульфурон-метил экстрагируют тремя порциями по 30 0,05 М щелочного буфера (рН 9), приготовленного по п. 7.2.2.4, каждый раз интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой с небольшим количеством эмульсии объединяют к конической колбе объемом 100 . После третьей экстракции верхний гексановый слой отбрасывают, а объединенный водный экстракт возвращают в делительную воронку и выдерживают 5 мин. Затем нижний водный слой переносят в чистую коническую колбу объемом 100 , а выделившийся верхний гексановый слой отбрасывают.

Водный экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 и промывают двумя порциями по 30 гексана, каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз верхний гексановый слой отбрасывают. Водный слой возвращают в делительную воронку и промывают двумя порциями хлористого метилена по 30 , каждый раз интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлористого метилена отбрасывают.

Далее проводят очистку экстракта по п. 9.1.3. Очистка экстракта на концентрирующих патронах Диапак Амин.

После очистки элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30°С.

9.3. Условия хроматографирования

Хроматограф жидкостный Waters 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу, номер госрегистрации N 15311-02 или другой с аналогичными характеристиками.

Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 250 мм х 4,6 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Предколонка стальная Symmetry C8, 20 мм х 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма "Waters".

Температура колонки: 30°С.

Подвижная фаза: ацетонитрил-метанол-0,01 М уксусная кислота в соотношении 35:5:55.

Длина волны: 240 нм.

Время удерживания Этаметсульфурон-метила: 12,606 мин 2%.

Чувствительность не менее 0,005 AUFS (единиц абсорбции на шкалу).

Объем вводимой пробы 20 .

Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг.

10. Обработка результатов

Для обработки результатов хроматографического анализа используется программное обеспечение химического анализа Empower2.

Альтернативная обработка результатов.

Содержание Этаметсульфурон-метила рассчитывают по формуле:

, где

Х - содержание Этаметсульфурон-метила в пробе, мг/кг;

- высота (площадь) пика стандарта, мм;

- высота (площадь) пика образца, мм;

А - концентрация стандартного раствора, ;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, ;

m - масса анализируемого образца, г ();

Р - содержание Этаметсульфурон-метила в аналитическом стандарте, %.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

, где (1)

, - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (табл. 1), при этом .

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

мг/кг при вероятности Р => 0,95, где

- среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

- граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

"содержание вещества в пробе менее 0,02 мг/кг"*

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений, а также контроль стабильности градуировочной характеристики осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

13.1. Контроль стабильности градуировочной характеристики

Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

Контроль стабильности градуировочной характеристики для Этаметсульфурон-метила проводят при смене основного градуировочного раствора N 1 каждые 3 месяца, при смене основных градуировочных растворов N 2, 3, 4, 5 и 6 - каждый месяц, а также в начале и окончании каждой серии анализов.

При контроле стабильности градуировочной характеристики проводят измерения не менее трех образцов концентраций для градуировки, содержание Этаметсульфурон-метила в которых должно охватывать весь диапазон концентраций от 0,1 до 1,0 .

Градуировочная характеристика считается стабильной, если для каждого из используемого для контроля градуировочного раствора сохраняется соотношение:

, где

X - концентрация Этаметсульфурон-метила контрольного измерения, ;

С - известная концентрация градуировочного раствора Этаметсульфурон-метила в смеси ацетонитрила с 0,01 М раствором уксуснокислого аммония в соотношении 15:85, взятая для контроля стабильности градуировочной характеристики, ;

2,66 - погрешность градуировочной характеристики, %.

Если величина расхождения (А) превышает 2,66%, делают вывод о невозможности применения градуировочной характеристики для дальнейших измерений. В этом случае выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики и повторяют контроль ее стабильности с использованием других градуировочных растворов Этаметсульфурон-метила, предусмотренных МВИ. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики определяют ее заново согласно п. 7.3.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится методом добавок

Величина добавки должна удовлетворять условию:

, где

- характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг, при этом:

, где

- граница абсолютной погрешности, мг/кг;

, где

Результат контроля процедуры рассчитывают по формуле:

, где

, , - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11), содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце и концентрация добавки, соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры () с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

, (2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Расхождение между результатами измерений, выполненных в условиях воспроизводимости (разное время, разные операторы, разные лаборатории), не должно превышать предела воспроизводимости (R):

, где (3)

, - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций, табл. 1), %.

14. Разработчики

Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Довгилевич Е.В., ст. н. сотр., канд. биол. наук, Довгилевич А.В., ст. н. сотр., канд. хим. наук, Устименко Н.В., ст. н. сотр., канд. биол. наук.

Российский государственный аграрный университет - МСХА имени К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (499) 976-37-68, факс: (499) 976-43-26.

______________________________

* - 0,02 мг/кг - предел обнаружения.

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

Откройте актуальную версию документа прямо сейчас

Получить бесплатный доступ

Если вы являетесь пользователем интернет-версии системы ГАРАНТ, вы можете открыть этот документ прямо сейчас или запросить по Горячей линии в системе.