Методические указания по измерению концентраций рицина в воздухе рабочей зоны МУК 4.1.196-96 (утв. Госкомсанэпиднадзором РФ от 8 июня 1996 г.)

Методические указания
по измерению концентраций рицина в воздухе рабочей зоны
МУК 4.1.196-96
(утв. Госкомсанэпиднадзором РФ от 8 июня 1996 г.)

Дата введения: с момента утверждения

Рацин - белый порошок с кремовым оттенком, содержание протеина - не менее 80%, содержание воды - не более 8%. М. м. 58-60 тыс., растворим в 9%-ном растворе хлористого натрия, по титру агглютинации должен соответствовать 1:16 - 1:32.

В воздухе находится в виде аэрозоля.

Аллерген.

ПДК в воздухе рабочей зоны не установлена.

Характеристика метода

Определение основано на учете реакции агглютинации эритроцитов под действием рицина.

Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания рицина в анализируемой пробе - 2,5 мкг.

Нижний предел измерения концентрации рицина в воздухе - 0,006 (при отборе 400 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 0,006 до 0,6 .

Измерению не мешают: кетоны, альдегиды.

Суммарная погрешность измерения не превышает 25%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, - около 2 ч.

Приборы, аппаратура, посуда

Аспирационное устройство
Фильтродержатель
Цетрифуга
Весы аналитические
Термостат суховоздушный, обеспечивающий поддержание температуры с точностью 2°С
Планшет для иммунологических реакций с V-образным профилем лунок	ТУ 64-2-278-79
Автоматическая микропипетка-дозатор
Посуда лабораторная	ГОСТ 1770-74

Реактивы, растворы, материалы

Набор для определения рицина в клещевидном шроте	ТУ
Концентрат рицина и 1%-ная суспензия формалинизированных эритроцитов кролика в физиологическом растворе
Стандартный раствор рицина с концентрацией 1 мг/мл готовят растворением концентрата рицина (содержимого флакона) в 1 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия.
Натрий хлористый, х. ч., 0,9%-ный раствор	ГОСТ 4233-87
Кислота соляная, х. ч., 0,1 М раствор	ГОСТ 3118-77
Фильтры АФА-ВП-10	ТУ 95743-80
Бумага фильтровальная	ГОСТ 12026-76

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 20 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10 помещенный в фильтродержатель.

Для определения 0,006 необходимо отобрать 400 л воздуха.

Срок хранения отобранных проб - 1 месяц.

Подготовка к измерению

Фильтр, с отобранной пробой переносят в химический стакан и заливают 5 мл 0,9%-ного раствора хлористого натрия, оставляют на 10 - 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения, затем фильтр отжимают и удаляют.

Степень десорбции вещества с фильтра - 98%. Полученный раствор сливают в коническую пробирку, затем центрифугируют в течение 3 мин при 3000 об/мин.

Проведение измерения

В первые 20 лунок планшета для иммунологических реакций вносят по 0,02 мл физиологического раствора. В первую лунку добавляют 0,02 мл стандартного раствора рицина с концентрацией 1 мг/мл, тщательно перемешивают автоматическим дозатором. Затем отбирают из этой лунки 0,02 мл раствора и переносят его в следующую лунку. Эту операцию повторяют до 20-ой лунки. Из последней лунки отбирают 0,02 мл раствора и помещают в пробирку с 0,1 М раствором соляной кислоты для детоксикации. Затем в каждую лунку добавляют по 0,02 мл 1%-ной суспензии эритроцитов.

С первой по восьмую лунку третьего ряда планшета вносят по 0,02 мл физиологического раствора.

В первую лунку третьего ряда вносят по 0,02 мл исследуемой пробы, перемешивают дозатором, отбирают 0,02 мл и переносят во вторую лунку. Эту операцию повторяют до восьмой лунки.

Из восьмой лунки отбирают 0,02 мл раствора и помещают в пробирку с 0,1 М раствором соляной кислоты для детоксикации. Затем во все лунки с исследуемой пробой добавляют по 0,02 мл 1%-ной суспензии эритроцитов.

Планшет встряхивают в горизонтальной плоскости на поверхности стола и термостатируют при температуре 37°С в течение 40-50 минут. Затем проводят учет результатов.

Концентрацию рицина определяют по последней лунке, в которой прошла гемагглютинация. Признаком отсутствия агглютинации является оседание эритроцитов в виде "пуговицы" с резко очерченными краями.

По номеру последней лунки (в первых 2-х рядах), в которой произошла реакция гемагглютинации со стандартным раствором рицина, находят концентрацию рицина в данной лунке (см. таблицу).

Таблица

Номер лунок	Коэффициент разбавления	Концентрация рицина в экстракте, мг/мл
1	2
2	4
3	8
4	16
5	32
6	64
7	128
8	256
9	512
10	1024
11	2048
12	4096
13	8192
14	16384
15	32768
16	75536
17	151072
18	302144
19	604288
20	1208576

По номеру последней лунки, (в третьем ряду) в которой прошла реакция гемагглютинации с исследуемой пробой, находят показатель разведения в данной лунке по таблице. Концентрацию рицина в этой лунке принимают равной концентрации рицина в последней лунке с положительной реакцией гемагглютинации в 1-2 ряду (по стандартному раствору рицина).

Расчет концентрации

Концентрацию рицина "X" в воздухе рабочей зоны (в ) рассчитывают по формуле:

, где

С - концентрация рицина в стандартном растворе, взятом для анализа, мг/мл;

Т - титр стандартного раствора рицина;

А - общий объем раствора пробы, мл;

a - объем раствора пробы, взятой для анализа, мл;

У - концентрация рицина в последней лунке с исследуемой пробой, в которой прошла гемагглютинация, мг/мл;

n - коэффициент разбавления в данной лунке;

V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, (см. приложение 1).

И.О. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместитель Главного государственного санитарного врача Российской Федерации

Г.Г. Онищенко