Приложение I. Токсичность повторяющейся дозы

Приложение I

Токсичность повторяющейся дозы

Руководящие указания по применению главы I (B) (2) части 2 Приложения к Директиве 75/318/EЭC в целях выдачи разрешения на маркетинг нового лекарственного средства

1. Введение

Цель настоящих исследований состоит в том, чтобы получить информацию о токсичности средства, когда предполагается повторное использование такого лекарственного средства, чтобы исследование могло быть проведено с учетом риска, следующего из терапевтического назначения средства, принимая во внимание продукты биотрансформации.

Продолжительность этих исследований определяется предложенным использованием для человека или намеченной продолжительностью воздействия на человеческий организм. Следующие периоды назначения предлагаются в качестве руководства для корреляции продолжительности повторных исследований токсичности дозы с предложенной продолжительностью воздействия на человеческий организм лекарственного средства:

Предполагаемая продолжительность лечения человека	Предполагаемая продолжительность повторных исследований токсичности дозы
Одна или несколько доз в течение одного дня	Две недели
Повторные дозы в течение свыше семи дней	Четыре недели
Повторные дозы в течение свыше 30 дней	Три месяца
Повторные дозы в течение 30 дней	Шесть месяцев

Когда воздействие на человеческий организм, вероятно, будет более длительным, например, когда частое нерегулярное назначение закончится полным периодом выведения в течение одного или более месяца в течение одного года или когда содержание в теле однократной дозы лекарственного средства будет продлено, тогда продолжительность повторных исследований токсичности дозы составит шесть месяцев.

Когда необходимо провести исследования токсичности продолжительностью три или шесть месяцев, исследование подострой токсичности продолжительностью две или четыре недели может быть разработано и выполнено в виде, соответствующем долгосрочным исследованиям (см. 2.5).

Причина подобного исследования состоит в том, что назначение слишком большой дозы оставит слишком мало живых животных в конце исследования, длящегося три месяца или более; назначение слишком маленькой дозы предотвратит развитие токсичных изменений.

1.1. Общие технические требования относительно исследования токсичности повторяющейся дозы

В Приложении к Директиве 75/318/EЭC, части 2, касающейся токсикологических и фармакологических анализов, указано, что такие анализы должны показать inter alia пороги токсичности:

"Испытания по токсичности повторяющейся дозы предназначены для того, чтобы показать любые физиологические и/или патологические изменения, вызванные повторным назначением активного вещества или комбинацией активных веществ при экспертизе, и определить, как эти изменения связаны с дозировкой.

Желательно, чтобы были выполнены два исследования: одно кратковременное, продолжительностью две - четыре недели, другое - долгосрочное. Продолжительность последнего должна зависеть от условий клинического использования. Его цель будет состоять в том, чтобы определить экспериментальным путем нетоксичный диапазон дозы средства".

Поскольку данные пороги могут быть определены только после их прохождения, исследования токсичности повторяющейся дозы должны быть задуманы таким способом, чтобы выявить признаки токсичности. Это положение подразумевает, что:

1.1.1. при выборе разновидностей для долгосрочных исследований до размещения на рынке желательно, чтобы разновидности метаболизма и фармакокинетик препарата были настолько близки человеку, насколько это возможно в пределах обычного выбора из лабораторных животных, используемых для исследований повторяющихся доз. При наличии существенных различий в метаболизме они должны быть приняты во внимание при оценке результатов;

1.1.2. желательно, чтобы фармакологические целевые органы и фармакологические эффекты средства в используемых разновидностях были такими же, как и используемые для терапевтического воздействия на человека, в случаях, если они известны и это возможно на практике.

1.1.3. Дозировка, схема применения лекарственного средства и частота его назначения должны быть подобраны таким образом, чтобы вызвать накопление в организме животных лекарственного средства и его метаболитов в таком количестве, чтобы продемонстрировать целевой(ые) орган(ы) с точки зрения вредных побочных эффектов. В проектировании протокола внимание будет уделено фармакокинетикам препарата.

Непрерывным назначением лекарственного средства в достаточно больших дозах могут быть достигнуты следующие основные стадии:

(a) количество препарата в организме накапливается вплоть до достижения им устойчивого состояния;

(b) адаптация организма к лекарственному средству относительно фармакологических целевых органов или ферментов биотрансформации или выделительных механизмов;

(с) в некоторых случаях может быть активирован второй метаболический путь из-за перегрузки основного пути дезинтоксикации, в результате чего может быть сформирован новый ядовитый метаболит;

(d) фаза проявления целевой токсичности органа проявилась отказом физиологических функций и в конечном счете патологическими изменениями.

Назначение средства при повторных исследованиях токсичности дозы должно быть достаточным относительно дозировки и продолжительности, чтобы достигнуть заключительного этапа (d) таким образом, чтобы мог быть оценен тип токсичности, полученный в результате применения чрезмерной дозы или при превышении терапевтической дозы, вызывающей токсичность. Не все лекарственные средства могут быть применены в дозировках, приводящих к целевой токсичности отдельного органа. При таких обстоятельствах должно быть получено доказательство того, что была применена максимально возможная доза и что лекарственное средство было системно поглощено.

2. Характеристики лекарственного средства и его назначение

2.1. Качество лекарственного средства

В тех случаях, когда это представляется возможным, активное вещество должно включать ту же самую структуру элементов, что и размещаемое на рынке средство. Если вещество в заключительной форме дозировки содержит примеси, существенно отличающиеся либо по количеству, либо по качеству от тестируемой партии, должны быть предприняты дальнейшие шаги по установлению их возможной токсичности. Когда лекарственное средство вводится перорально, важными могут быть его физические характеристики, например, такие, как размер частиц; поэтому в каждом случае должны быть заявлены физические характеристики и стабильность материала, используемого при повторных исследованиях токсичности дозы. Всякий раз, когда используется больше одной партии активного вещества в повторных исследованиях токсичности дозы, об этом должно быть заявлено и должна быть идентифицирована каждая партия. Партия или партии, используемые при повторных исследованиях токсичности дозы, не должны иметь более высокой степени чистоты, чем предназначенные для конечного средства. Когда лекарственное средство применяется в диете или принимается с питьевой водой, должно быть выяснено, что оно является устойчивым в такой питательной среде.

Когда новый элемент лекарственного средства используется впервые, он должен быть проверен в соответствии с теми же самыми критериями, что и новое активное вещество.

2.2. Продолжительность назначения

Продолжительность исследований должна быть связана с продолжительностью предложенного терапевтического использования средства человеком (см. 1).

2.3. Путь введения

Всякий раз, когда это технически выполнимо, средство должно быть введено путем, предназначенным для использования человеком, и желательно, чтобы фармакологический эффект был доказуем этим путем. Когда это невозможно, необходимо рассмотреть использование других путей (назначение ингаляцией описано в Дополнении). Количество лекарственного средства, введенного предложенным путем, должно быть известно в результате проведенных фармакокинетических исследований. Когда лекарственное средство применяется в диете или принимается с питьевой водой, претендент на получение разрешения на маркетинг должен гарантировать, что принимаемое количество лекарственного средства обоснованно и известно. Дозирование при совместном применении испытываемого вещества в диете или с питьевой водой требует регулярного приведения количества лекарственного средства в диете или питьевой воде в соответствии с его ростом и изменяющимся потреблением.

В дополнение к системной токсичности должное внимание должно уделяться локальной токсичности в месте применения, например, в случае применения на коже, внутривлагалищного применения, внутривенного, внутримышечного, ректального, подкожного, внутрисуставного, внутриоболочкового, конъюнктивального, внутриносового и слухового применения или когда лекарственное средство вводится путем ингаляции.

2.4. Частота назначения

Устойчивое состояние совместимости организма с некоторыми средствами достигается только при их применении в течение семи дней в неделю. Обычно назначение лекарственного средства животным должно быть проведено на этой основе. Невозможность этого должна быть обоснована. Когда темп выведения средства является медленным, возможно менее частое назначение. Быстрый темп выведения или желудочная непереносимость могут привести к необходимости назначения лекарственных средств свыше 1 раза в день.

2.5 Размер дозы

Лечение может включать:

(а) большую дозу, выбранную с целью влияния на токсичность целевого органа, если это представляется возможным, или, если это не представляется возможным, - с неспецифической токсичностью, или до момента ограничения объема дозы.

Для исследования токсичности дозировки лекарственного средства продолжительностью от трех до шести месяцев эта доза должна быть получена из анализа подострой токсичности продолжительностью от двух до четырех недель, задуманного и выполненного как исследование обнаружения диапазона дозы;

(b) малую дозу, достаточную для того, чтобы оказать фармакодинамическое влияние или достичь желаемого терапевтического эффекта, или сформировать тот уровень в крови, который будет сопоставим с ожидаемым уровнем для человека;

(с) промежуточную дозу, представляющую собой среднее геометрическое между большой и малой дозами;

(d) исследование должно включать репрезентативную (ые) контрольную (ые) группу (ы); в особых случаях может быть необходима положительная контрольная группа.

Однако все вышеупомянутые положения не применяются, если фармакодинамический эффект самостоятельно вызывает токсичность; примером этому служит гипогликемия, вызванная антидиабетическими средствами.

Исследователь должен обосновать применение того или иного размера дозы.

2.6. Пролекарства

Когда примененное средство является пролекарством, его преобразование в активное лекарственное средство должно быть продемонстрировано на различных видах при исследовании.

3. Технические требования к экспериментальному животному

3.1. Вид животных: выбор и характеристики

Виды должны быть выбраны в максимально возможной степени на основе их подобия человеку относительно фармакокинетик, включая биотрансформацию средства (см. 1.1.1).

Фармакодинамический эффект лекарственного средства, если это возможно, должен быть продемонстрирован по крайней мере на одном из видов, чтобы предоставить информацию о границе между терапевтическими и ядовитыми эффектами.

Исследователь должен оправдать выбор видов и штаммов. Использование животных SPF-статуса обычно увеличивает ценность исследования.

3.2. Пол

Обычно должно использоваться равное количество самцов и самок.

3.3. Размер групп лечения

При рассмотрении вопроса о размере групп лечения необходимо обратить внимание на следующее:

(а) размер групп лечения должен быть сформирован таким образом, чтобы были показаны все токсикологически важные эффекты лечения;

(b) размер групп лечения должен быть достаточно большим, чтобы позволить жертвовать животными с промежутками перед окончанием исследования, не вмешиваясь в заключительный статистический анализ;

(c) размер групп лечения должен быть достаточно большим, чтобы позволить некоторым животным выжить после завершения периода дозирования, чтобы могла быть оценена обратимость ядовитых изменений в конце лечения;

(d) базовые знания относительно диапазонов изучаемых видов животных и используемых штаммов принимаются во внимание при определении размеров групп.

Однако размер групп контроля и групп лечения всегда ограничивается по практическим и финансовым причинам, а также из соображений гуманности.

3.4. Число видов

Цель исследований токсичности повторяющейся дозы состоит в том, чтобы перенести модель повторного назначения средства с животных на человека. Ценность модели по экстраполяции на человека зависит в большой степени от качественного подобия между моделью животного и человека, что обычно не является известным. Чтобы уменьшить риск ошибки в экстраполяции из-за эффектов или нехватки эффектов, которые являются специфическими для одного из видов животных, должны использоваться по крайней мере два вида, один из которых не является грызуном. Выбор видов должен быть оправдан (см. 1.1.1).

4. Животноводство

Требуется высокий уровень животноводства, также должны контролироваться условия окружающей среды, и диета должна иметь известный постоянный состав. В отчете должны быть отражены меры, принятые в целях обеспечения этих условий.

5. Наблюдения

5.1. Предварительные и контрольные оценки

Контрольные данные о колонии необходимы для мелких млекопитающих в отношении всех морфологических, биохимических и физиологических переменных. По более крупным животным должны быть получены данные предварительной оценки животных, используемых в исследовании.

5.2. Мониторинг во время исследования

5.2.1 Общий мониторинг

Общий мониторинг выполняется во время исследования, и он должен включать мониторинг рациона питания, массы тела, гематологии, клинической химии, анализа мочи, офтальмологии, ЭКГ и общего поведения. Выбор используемых методов и выбор других анализов должен соответствовать текущему уровню знания и используемому виду животных. У грызунов, если требуются ЭКГ и офтальмологические или другие специализированные экспертизы, возможно их проведение на ограниченном количестве животных на каждом уровне дозы.

5.2.2. Частота проведения мониторинга

Частота проведения мониторинга в дополнение к исследованиям предварительной оценки и заключительному мониторингу должна быть приспособлена к проявлениям токсичности, а также фармакокинетикам лекарственного средства. Выполненные анализы (включая сбор образцов крови) во время мониторинга должны также быть проведены на контрольных группах и не должны поразить экспериментальных животных таким образом, чтобы это повлияло на заключительную интерпретацию результатов испытания на токсичность.

5.2.3. Рацион питания

Когда средства применяются с едой, особое внимание должно быть обращено на то, какое влияние оказывает средство на потребление пищи. Должны быть учтены последствия потребления лекарственного средства.

5.3. Заключительный мониторинг

Заключительные наблюдения должны быть как можно более емкими. Аутопсия должна быть проведена на всех животных. Гистопатология должна быть выполнена на всех органах и тканях после большой дозы и у контрольных групп, перечисленных в списке. У грызунов проверка групп c малыми дозами может ограничиваться теми органами и тканями, которые показывают патологические изменения при аутопсии. По другим видам, когда используется небольшое количество животных, гистопатология на перечисленных выше тканях должна быть проведена у всех животных при всех размерах доз.

Если органы тщательно не исследуются, образцы тканей должны быть подготовлены и храниться в течение пяти лет от даты размещения на рынке для возможной экспертизы. Особенности в дистрибуции лекарственного средства могут потребовать дальнейших гистопатологических исследований.

6. Иммунное вмешательство

Экспансивный рост иммунологии и признание ее важности заставили обратить внимание на вмешательство в иммунную систему препаратами, даже если это не связано с их целевым воздействием. Такое вмешательство может вызвать нежеланные побочные эффекты (инфекция; рак). Поэтому особенно важно исследовать селезенку, вилочковую железу и некоторые лимфатические узлы макроскопическим и микроскопическим путем при завершении исследования токсичности. Они должны выявить любое влияние на иммунную систему и, таким образом, потребность в дальнейших анализах.

Так как наши знания в этой области быстро увеличиваются, любой тест, используемый для изучения иммунологического эффекта лекарственного средства, должен основываться на существующих в момент проведения исследования научных знаниях.

7. Выводы

По результатам исследования должны быть сделаны выводы.

Дополнение А
Список тканей, которые будут изучены гистологически при исследовании токсичности повторяющейся дозы

- Сильно пораженные ткани;

- ткани или опухоли (включая региональные лимфатические узлы);

- мазки крови (в случае анемии, увеличенного тимуса, лимф